一种抑制解螺旋酶制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，公开了一种抑制解螺旋酶

【技术实现步骤摘要】
一种抑制解螺旋酶
Ⅴ
基因表达的siRNA及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，尤其涉及一种抑制解螺旋酶
Ⅴ
基因表达的siRNA及其应用。

技术介绍

[0002]神经母细胞瘤(NB)属于神经源性肿瘤的一种，起源于交感神经系统的神经脊，是儿童最常见的恶性颅外实体瘤，占儿童恶性肿瘤发生率的10％，儿童肿瘤死亡人数的15％。根据INRG(International Neuroblastoma Risk Group)分类系统，NB可分为高危、中危、低危、极低危组；其中极低危组，如部分M
‑
S(INRG分期)/IV
‑
S期(INSS分期)患者，无需治疗肿瘤可自我消退。而对于高危组，即使给予高强的综合治疗，包括化疗、手术、放疗、自体干细胞移植及免疫治疗，高危组神经母细胞瘤(NB)的2年生存率也仅为19％。由此可见，神经母细胞瘤(NB)是一类临床和生物学异质性非常显著的疾病，临床肿瘤外科工作者一直致力于对其防治的研究，希望找到NB精确有效的治疗靶点。NB在组织学分类上，又可分为ganglioneuroma，ganglioneuroblastoma intermixed，ganglioneuroblastoma nodular和neuroblast oma等四类。
[0003]核酸干扰(RNA干扰、RNAi)是一种序列特异性的RNA降解过程，其理论上可为任何基因的敲低或者沉默提供了一个相对容易和直接的方式。在自然发生的RNA干扰中，双链RNA会经核糖核酸酶Ⅲ/解旋酶
‑
Dicer酶的作用而裂解为小干扰RNA(siRNA)分子，这种小siRNA分子是一种具有19
‑
23个核苷酸(nt)的双链RNA(dsRNA)，其在3
’
末端有两个核苷酸突出。这些siRNA整合到名为RNA诱导的沉默复合物(RISC)的多组分核糖核酸酶中，siRNA的一条链仍然连着RISC，这条链能指引复合物到达与RISC中的引导单链siRNA(ss
‑
siRNA)序列互补的同源RNA。这种siRNA引导的核酸内切酶能消化同源的RNA，从而使其失活。有研究已经揭示，化学合成的21
‑
25个核苷酸的siRNA在哺乳动物细胞中显示出非常明显的RNAi效应，siRNA杂交(在末端或者中间)的热力学稳定性对决定分子的功能起到重要作用，核酸干扰技术具有广阔的应用前景。
[0004]因此，采用RNAi技术对癌症相关基因的表达进行干扰，从而对肿瘤细胞进行抑制，是一种极具潜力的肿瘤治疗策略，本专利技术希望就神经母细胞瘤基因表达情况展开研究，开发出一种能够抑制和治疗上述肿瘤中至少一种的siRNA干扰试剂。

技术实现思路

[0005]本专利技术旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出一种抑制解螺旋酶
Ⅴ
基因表达的siRNA及其应用，所述siRNA具备干扰和抑制解螺旋酶
Ⅴ
基因表达的作用，能够抑制至少如神经母细胞瘤等神经源性肿瘤细胞的增值，并促进如神经母细胞瘤等神经源性肿瘤细胞的凋亡。
[0006]在前期研究中已发现，解螺旋酶
Ⅴ
(FUBP1)基因在神经母细胞瘤(NB)肿瘤组织与细胞株中高度表达，而在通过对FUBP1进行抑制后可以抑制神经母细胞瘤细胞的增殖，促进
其凋亡，两者具有高度相关性。
[0007]由此，本专利技术针对靶向解螺旋酶
Ⅴ
基因的siRNA进行筛选，从众多候选siRNA序列挑选出具有RNAi活性的siRNA。通过在哺乳细胞培养物中测试以确定候选siRNA序列是否发生预期的干扰作用，再通过进一步的筛选和优化，最终得到了最佳的两个小分子干扰片段siRNA
‑
2和siRNA
‑
3。
[0008]本专利技术提供一种抑制解螺旋酶
Ⅴ
基因表达的siRNA，包括siRNA
‑
2和/或siRNA
‑
3；
[0009]所述siRNA
‑
2中正义链与反义链的核苷酸序列如SEQ ID NO:3
‑
4所示；
[0010]所述siRNA
‑
3中正义链与反义链的核苷酸序列如SEQ ID NO:5
‑
6所示。
[0011]siRNA
‑
2的核苷酸序列为：
[0012]正义链：5
’‑
UCAACCAGAUGCUAAGAAA
‑3’
(SEQ ID NO:3)；
[0013]反义链：5
’‑
AGUUGGUCUACGAUUCUUU
‑3’
(SEQ ID NO:4)。
[0014]siRNA
‑
3的核苷酸序列为：
[0015]正义链：5
’‑
CAACUACAACUCAAACUAA
‑3’
(SEQ ID NO:5)；
[0016]反义链：5
’‑
GUUGAUGUUGAGUUUGAUU
‑3’
(SEQ ID NO:6)。
[0017]由上述序列可知，干扰片段siRNA
‑
2和siRNA
‑
3均为具有19个核苷酸(nt)的小分子双链RNA(dsRNA)。在某些特定方面，所述siRNA可缺乏化学修饰或具备化学修饰。
[0018]进一步的，所述siRNA
‑
2或siRNA
‑
3中的至少一种具有化学修饰。采用化学修饰的方法可使siRNA的稳定性增加，提高其在体内抵抗核糖酶的水解的能力，降低免疫刺激反应，并延长siRNA干扰基因表达下调的作用时间，使其作用具有高效性、特异性。
[0019]所述化学修饰可位于引导链和/或过客链上、位于3
’
或5
’
端的一个或多个核苷酸上和/或位于构成内部骨架的一个或多个核苷酸上。
[0020]更进一步的，当所述化学修饰发生在核苷酸的核糖、碱基或磷酸上的至少一种时，所述化学修饰包括但不限于：用2
’‑
O
‑
甲基RNA(2
’
OMe)、2
’‑
O
’‑
甲氧基乙基(2
’
MOE)、2
’‑
氟(2F)或2
’‑
氟
‑
β
‑
阿拉伯糖核苷酸(FANA)基团中的其中至少一种对核糖的2
’‑
OH基团取代至少一次，将2
’‑
氧烷基转化成氨基乙基
‑
、胍基乙基
‑
、氰基乙基
‑
或烯丙基，用硫代磷酸酯代替磷酸二酯基团，将siRNA的一个或多本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抑制解螺旋酶
Ⅴ
基因表达的siRNA，其特征在于，包括siRNA
‑
2和/或siRNA
‑
3；所述siRNA
‑
2中正义链与反义链的核苷酸序列如SEQ ID NO:3
‑
4所示；所述siRNA
‑
3中正义链与反义链的核苷酸序列如SEQ ID NO:5
‑
6所示。2.根据权利要求1所述的siRNA，其特征在于，所述siRNA
‑
2或siRNA
‑
3中的至少一种具有化学修饰。3.一种抑制解螺旋酶
Ⅴ
基因表达...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄茂，尹浩帆，黄志坚，
申请(专利权)人：珠海市人民医院，
类型：发明
国别省市：