一种枯草芽胞杆菌沙漠亚种及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种枯草芽胞杆菌沙漠亚种及其应用，属于微生物技术领域。本发明专利技术所述的枯草芽胞杆菌沙漠亚种，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.24427。本发明专利技术所述的枯草芽胞杆菌沙漠亚种能够抑制黄曲霉和禾谷镰刀菌的生长，且对黄曲霉毒素B1具有显著的降解作用。因此，可将该菌应用于黄曲霉和禾谷镰刀菌的防治，以及黄曲霉毒素B1的降解领域，应用前景广阔。应用前景广阔。应用前景广阔。

【技术实现步骤摘要】
一种枯草芽胞杆菌沙漠亚种及其应用


[0001]本专利技术属于微生物
，具体涉及一种枯草芽胞杆菌沙漠亚种及其应用。

技术介绍

[0002]黄曲霉毒素(Aflatoxin)是一类主要由黄曲霉(Aspergillus flavus)、寄生曲霉(A.parasiticus)等真菌产生的次级代谢物。从分子结构上分析，该类毒素是由二呋喃环和香豆素组成的结构类似物。黄曲霉毒素具有极强的致畸、致癌、致突变性，广泛污染花生、玉米、棉籽、稻谷、干果、牛奶等农产品和食品。已被鉴定出的黄曲霉素素有二十多种，其中黄曲霉毒素B1(AFB1)分布范围最广，并且毒性最强，并在1993年被世界卫生组织癌症研究机构(IARC)归为IA类致癌物。
[0003]目前常用的AFB1脱除方法主要是物理法和化学法。物理法包括挑拣、漂洗、高温加热、辐射法、溶剂萃取等方法，这些方法要么耗费大量人力物力，效率不高；要么会破坏农产品的营养成分。化学法则是利用氧化剂、氢氧化钠等化学试剂与毒素反应造成毒素降低，但其存在很大的局限性，很多试剂对操作人员的皮肤、眼睛、呼吸道造成伤害，并且化学试剂残留不易去除，影响农产品和食品的质量安全。微生物脱毒法成为近年来的研究热点，该方法主要是利用细菌、真菌等微生物及其代谢产物去除食品中的AFB1，该脱毒法对原料无污染、具有高度专一性、同时能避免毒素重新产生，具有降解条件温和、特异性强和脱毒效率高等优点，因此是一种高效、安全的去毒方法。不过，不同的微生物，其脱毒效率显然不同，很多微生物的脱毒效率较低。
[0004]禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)是引起小麦赤霉病的主要病原菌之一，赤霉病的发生会造成粮食严重减产和籽粒品质下降；而且，在小麦贮存过程中，籽粒本身携带病菌或贮存条件不当也会使小麦籽粒受到禾谷镰刀菌的侵染；该菌侵染小麦后会产生多种真菌毒素，包括脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮和雪腐镰孢菌烯醇等。这些真菌毒素具有毒性，摄入毒素超标的小麦会造成人和动物机体免疫力下降，导致畸性和癌症，严重危害人和动物健康。因而被禾谷镰刀菌侵染后的小麦籽粒不再适用于磨粉和食用，也不能用作饲料。
[0005]为了能减少禾谷镰刀菌的危害，人们通过多种方法开展禾谷镰刀菌的防治，主要包括无菌种子、禾谷镰刀菌非宿主作物轮作、抗禾谷镰刀菌的育种、化学防治以及生物防治等。虽然采用无污染的小麦种子和轮种禾谷镰刀菌非宿主作物可以有效降低禾谷镰刀菌的源头污染，但因为禾谷镰刀菌孢子容易扩散等原因，导致这些防治方法作用有限。培育具有禾谷镰刀菌抗性的小麦品种进展缓慢；化学防治虽然有效但长期使用会导致农药残留超标、病原菌耐药性增加，影响小麦食品安全的同时还会造成环境污染；生物防治是一种采用拮抗微生物来抑制禾谷镰刀菌的方法，该方法不仅绿色无污染，而且是效果明显的一种病害防治方式，正越来越受到研究人员的关注。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供了一种枯草芽胞杆菌沙漠亚种，所述菌种保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.24427。
[0007]上述枯草芽胞杆菌沙漠亚种被证明对黄曲霉和禾谷镰刀菌均具有抑制效果，为此，本专利技术提供了上述枯草芽胞杆菌沙漠亚种在防治黄曲霉和/或禾谷镰刀菌中的应用。其中，在该应用中，对于黄曲霉和/或禾谷镰刀菌的防治，可以是诊疗性的，也可以是非诊疗性的。
[0008]本专利技术还提供了上述枯草芽胞杆菌沙漠亚种在提高食品贮藏性能中的应用；其中，所述食品选自易被黄曲霉和/或禾谷镰刀菌侵染的食品，包括但不限于例如花生、小麦、玉米、棉籽、稻谷、干果、牛奶等食品。
[0009]上述枯草芽胞杆菌沙漠亚种被证明具有黄曲霉毒素降解作用，为此，本专利技术提供了上述枯草芽胞杆菌沙漠亚种在降解黄曲霉毒素中的应用。其中，所述黄曲霉毒素选自黄曲霉毒素B1。
[0010]本专利技术提供了上述枯草芽胞杆菌沙漠亚种在制备具有黄曲霉抑制效果和/或禾谷镰刀菌抑制效果和/或黄曲霉毒素B1降解效果的制剂中的应用。
[0011]本专利技术提供了一种微生物制剂，含有上述枯草芽胞杆菌沙漠亚种。
[0012]本专利技术提供了一种黄曲霉毒素B1的降解方法，是将上述枯草芽胞杆菌沙漠亚种菌液与黄曲霉毒素B1或含有黄曲霉毒素B1的样品混合，在适宜的温度下孵育，以实现黄曲霉毒素B1的降解。
[0013]上述降解方法中，所述适宜的温度，是指，适宜本专利技术所述枯草芽胞杆菌沙漠亚种生长和繁殖的任何温度，例如37℃，或者其它温度。
[0014]上述降解方法中，孵育时间可选自72h，也可以是其它时长，例如24h、48h等。
[0015]本专利技术的有益效果为：
[0016]本专利技术提供了一种枯草芽胞杆菌沙漠亚种，该菌能够抑制黄曲霉和禾谷镰刀菌的生长，且对黄曲霉毒素B1具有显著的降解作用。因此，可将该菌应用于黄曲霉和禾谷镰刀菌的防治，以及黄曲霉毒素B1的降解领域，应用前景广阔。
附图说明
[0017]图1为菌株A12的菌落形态；
[0018]图2为菌株A12的16S rRNA基因的电泳图；其中，泳道1是菌株A12的16S rRNA基因，泳道M是DL2000 Marker；
[0019]图3为黄曲霉拮抗试验；其中，中间生长的是黄曲霉，左右两边生长的是菌株A12；
[0020]图4为菌株A12降解AFB1的HPLC图谱；其中，A图为对照组，B图为实验组；
[0021]图5为禾谷镰刀菌拮抗试验；其中，左侧为菌株A12，右侧为禾谷镰刀菌。
具体实施方式
[0022]菌种分离与鉴定：
[0023]2017年1月从青岛采集健康的、没有霉变的花生样品，用75％乙醇消毒花生壳，晾干后，在超净台，打开花生，从健康的花生壳内取出部分壳内物质悬浮在10mL无菌水中，震
荡稀释制备土壤悬浊液，然后用无菌蒸馏水稀释100倍。取100μL悬浮液涂布在LB固体平板上，放置于37℃进行培养，3天后平板上长出多个菌落。根据颜色和形态不同，挑取4个菌落在LB固体平板上进行划线纯化，经过3次划线纯化后，经AFB1降解试验分析，发现其中一株具有AFB1降解能力，将该菌株编号为A12。
[0024]按照“伯杰细菌鉴定手册”(第八版)中描述的方法，对菌株A12进行形态特征和生理生化特征鉴定，具体结果如下：
[0025]形态学特征：菌株A12在LB培养基上单菌落凸起，乳白色，不透明(如图1)，在37℃下培养2天后，菌落约为5
‑
7mm。
[0026]生物学特征：氧化酶活性为阴性，能在4～50℃生长，革兰氏染色为阳性，能水解利用酪蛋白、明胶和淀粉等。
[0027]基因学特征：提取A12的细菌基因组DNA，利用16S rRNA基因通用引物进行PCR扩增，扩增产物连接到pMD19
‑
T载体，转化重组质粒到大肠杆菌，测序得到的1511bp基因序列，其16S rRNA基因电泳如图2所示。
[0028]16S rRNA基本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种枯草芽胞杆菌沙漠亚种，其特征在于，所述菌种保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.24427。2.权利要求1所述枯草芽胞杆菌沙漠亚种在非诊疗性防治黄曲霉和/或禾谷镰刀菌中的应用。3.权利要求1所述枯草芽胞杆菌沙漠亚种在提高食品贮藏性能中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述食品选自易被黄曲霉和/或禾谷镰刀菌侵染的食品。5.权利要求1所述枯草芽胞杆菌沙漠亚种在降解黄曲霉毒素中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述黄曲霉毒素选...

【专利技术属性】
技术研发人员：王明清，于丽娜，毕洁，宋昱，孙杰，江晨，杨庆利，
申请(专利权)人：山东省花生研究所，
类型：发明
国别省市：