本发明专利技术公开了耐低温复合菌剂及在高原堆肥发酵中的应用。本发明专利技术涉及生物技术领域，具体涉及一种耐低温复合菌剂及在高原堆肥发酵中的应用。本发明专利技术的复合菌剂活性成分为蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus CCTCC NO：M 20221062和短小芽孢杆菌Bacillus pumilus CCTCC NO：M 20221061组成。此复合菌剂可在低温环境下应用于高原堆肥发酵过程，缩短堆肥发酵时间，并促进植物种子发芽率，提高堆肥的品质。提高堆肥的品质。
【技术实现步骤摘要】
耐低温复合菌剂及在青藏高原堆肥发酵中的应用
[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种耐低温复合菌剂及在青藏高原堆肥发酵中的应用。
技术介绍
[0002]青海属于高原大陆性气候，年平均气温5.7℃，1月最冷零下8.2℃，7月最热17.2℃。菇渣和动物粪便的混合堆肥可有效利用农牧业废弃物，但是高原低温条件下菇渣和动物粪便的混合堆肥处理时间长效果较差，导致堆肥无法腐熟完全。为了保证堆肥过程的正常进行，人们对低温条件下堆肥升温方法进行了研究，如电加热、沼气加热、保温棉覆盖等，但对于实际堆肥生产来说，这些方法还不够节能和经济。
技术实现思路
[0003]本专利技术所要解决的技术问题是如何选育适合高原气候的低温堆肥发酵的菌剂。
[0004]本专利技术提供的用于制备堆肥的复合菌剂，所述复合菌剂的活性成分由蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌组成。
[0005]所述复合菌剂为用于制备堆肥的复合菌剂，所述蜡样芽孢杆菌为蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus QS7，其在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC NO：M 20221062；所述短小芽孢杆菌为短小芽孢杆菌Bacillus pumilus QM6，其在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC NO：M 20221061。
[0006]所述复合菌剂中，所述产蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌的菌落形成单位CFU配比为1∶1。
[0007]所述复合菌剂中，所述蜡样芽孢杆菌和所述短小芽孢杆菌能在低温10℃
‑
15℃生长。
[0008]本专利技术还提供了一种蜡样芽孢杆菌，所述蜡样芽孢杆菌为蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus QS7，其在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC NO：M 20221062。
[0009]本专利技术还提供了短小芽孢杆菌，所述短小芽孢杆菌为短小芽孢杆菌Bacillus pumilus QM6，其在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC NO：M 20221061。
[0010]本专利技术还提供了用于制备堆肥的菌剂，所述菌剂含有上述蜡样芽孢杆菌和上述短小芽孢杆菌。
[0011]本专利技术还提供了一种肥料，所述肥料是以菇渣和/或畜禽养殖粪便为原料，利用上述复合菌剂、上述蜡样芽孢杆菌或上述短小芽孢杆菌发酵所述原料得到的有机肥。
[0012]本专利技术还提供了上述复合菌剂、上述蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌或上述菌剂在如下任一种中的应用：
[0013]1)产纤维素酶；
[0014]2)低温条件下发酵堆肥；
[0015]3)低温下加快堆肥腐熟进程；
[0016]4)促进植物种子发芽或在制备促进植物种子发芽的产品中的应用。
[0017]上述肥料在促进植物种子萌发中的应用也属于本专利技术的保护范围。
[0018]所述堆肥以菇渣和/或畜禽养殖粪便为原料制成。所述低温可为零下15℃
‑
10℃。
[0019]所述植物可为油菜。
[0020]本专利技术旨在筛选出利于在低温下促进发酵且纤维素酶活高的混合菌株，使其能够应用于低温堆肥发酵中，降低堆肥成本，提高堆肥效率。
[0021]保藏说明
[0022]菌种名称：蜡样芽孢杆菌
[0023]拉丁名：Bacillus cereus
[0024]菌株编号：QS7
[0025]保藏机构：中国典型培养物保藏中心
[0026]保藏机构简称：CCTCC
[0027]地址：中国武汉，武汉大学
[0028]保藏日期：2022年7月8日
[0029]保藏中心登记入册编号：CCTCC NO：M 20221062
[0030]菌种名称：短小芽孢杆菌
[0031]拉丁名：Bacillus pumilus
[0032]菌株编号：QM6
[0033]保藏机构：中国典型培养物保藏中心
[0034]保藏机构简称：CCTCC
[0035]地址：中国武汉，武汉大学
[0036]保藏日期：2022年7月8日
[0037]保藏中心登记入册编号：CCTCC NO：M 20221061
附图说明
[0038]图1为夏季堆肥过程中堆体温度变化监测。注：处理1(菇渣∶羊板粪体积比＝9∶1、添加混合菌)、处理2(菇渣∶羊板粪体积比＝9∶1、不加菌)
[0039]图2为冬季堆肥过程中堆体温度变化监测。注：处理3(混合秸秆∶牛粪体积比＝1∶1、添加混合菌)、处理4(混合秸秆∶牛粪体积比＝1∶1、不加菌)
具体实施方式
[0040]下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。以下提供的实施例可作为本
普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本专利技术的限制。
[0041]下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0042]以下实施例中的定量实验，如无特别说明，均设置三次重复实验。
[0043]下述试验用到的培养基配方：
[0044]NA固体培养基(g/L)：牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，琼脂17g，加水至1000mL，pH 7.0。
[0045]NA液体培养基与上述NA固体培养基的区别在于不加入琼脂。
[0046]CMC
‑
Na培养基(g/L)：CMC
‑
Na 10g，NaCl 5g，KH2PO
4 1g/L，MgSO
4 0.2g，酵母粉10g，琼脂18g，加双蒸水至1L，pH调至7.0，121℃灭菌20min。
[0047]保护剂(NB培养基)(g/L)：牛肉膏5g，蛋白胨15g，氯化钠5g，二甲基亚砜10％，加双蒸水至1L，pH调至7.0，121℃灭菌20min。
[0048]实施例1、耐低温菌的分离鉴定与保藏
[0049]1、菌株分离
[0050]称取来自于青海省西宁市大堡子青海惠田农业种植基地棉籽壳样品5g加入到装有45mL无菌水的三角瓶中，震荡10分钟，梯度稀释，在NA培养基37℃培养24小时，挑取单菌落。
[0051]2、菌株培养特征及形态学特征
[0052]观察QS7：菌体细胞杆状，末端方，呈短或长链，革兰氏阳性菌，无荚膜，运动。菌落直径较大，表面粗糙，扁平，不规则。
[0053]QM6：菌体细杆状，革兰氏阳性菌，菌落圆形。
[0054]3、分子鉴定
[0055]将菌株QS7进行纯化后挑取其单菌落进行PCR，引物选用的是细菌的16S rRNA基因扩增的通用引物：27F(5
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.用于制备堆肥的复合菌剂，其特征在于，所述复合菌剂的活性成分由蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌组成。2.根据权利要求1所述的复合菌剂，其特征在于：所述复合菌剂为用于制备堆肥的复合菌剂，所述蜡样芽孢杆菌为蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus QS7，其在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC NO：M 20221062；所述短小芽孢杆菌为短小芽孢杆菌Bacillus pumilus QM6，其在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC NO：M 20221061。3.根据权利要求1或2所述的复合菌剂，其特征在于：所述复合菌剂中，所述产蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌的菌落形成单位CFU配比为1∶1。4.根据权利要求3所述的复合菌剂，其特征在于：所述蜡样芽孢杆菌和所述短小芽孢杆菌能在低温10℃
‑
15℃生长。5.蜡样芽孢杆菌，其特征在于，所述蜡样芽孢杆菌为蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus QS7，其在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC...
【专利技术属性】
技术研发人员：谈重芳，王敏，梅燕，张琨，徐丽萍，孔小平，张生田，保守智，晏存柱，
申请(专利权)人：西宁市蔬菜技术服务中心，
类型：发明
国别省市：
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