一种酒曲中产蛋白酶的枯草芽孢杆菌菌株及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种酒曲中产蛋白酶的枯草芽孢杆菌菌株及其应用。本发明专利技术提供的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)JQ

【技术实现步骤摘要】
一种酒曲中产蛋白酶的枯草芽孢杆菌菌株及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种酒曲中产蛋白酶的枯草芽孢杆菌菌株及其应用。

技术介绍

[0002]蛋白酶是最重要的一种工业酶制剂，能催化蛋白质和多肽水解，广泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中。在干酪生产、肉类嫩化和植物蛋白改性中都大量的使用蛋白酶。
[0003]皮革工业的脱毛和软化已大量利用蛋白酶，既节省时间，又改善劳动卫生条件。蛋白酶还可用于蚕丝脱胶、肉类嫩化、酒类澄清。临床上可作药用，如用胃蛋白酶治疗消化不良，用酸性蛋白酶治疗支气管炎，用惮性蛋白酶治疗脉管炎以及用胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶对外科化脓性创口的净化及胸腔间浆膜粘连的治疗。加酶洗衣粉是洗涤剂中的新产品，含碱性蛋白酶，能去除衣物上的血渍和蛋白污物。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种酒曲中产蛋白酶的枯草芽孢杆菌菌株及其应用。
[0005]本专利技术提供的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)JQ
‑
2，已于2022年09月07日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏登记号为CGMCC No.25660。
[0006]本专利技术还保护枯草芽孢杆菌JQ
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2在制备蛋白酶和/或凝乳酶中的应用。
[0007]所述应用中，通过发酵培养枯草芽孢杆菌JQ
‑
2，获得蛋白酶和/或凝乳酶。
[0008]发酵培养枯草芽孢杆菌JQ
‑
2的步骤具体可为：将枯草芽孢杆菌JQ
‑
2接种至发酵培养基，30℃、180r/min振荡培养24h。
[0009]发酵培养枯草芽孢杆菌JQ
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2的步骤具体可为：将枯草芽孢杆菌JQ
‑
2种子液以5％的接种量接种至发酵培养基，30℃、180r/min振荡培养24h。
[0010]发酵培养枯草芽孢杆菌JQ
‑
2的步骤具体可为：将枯草芽孢杆菌JQ
‑
2种子液以5％的接种量接种至发酵培养基(培养基装液量为20％)，30℃、180r/min振荡培养24h。
[0011]枯草芽孢杆菌JQ
‑
2种子液的OD
600nm
值为1.3。
[0012]枯草芽孢杆菌JQ
‑
2种子液的制备方法具体可为：枯草芽孢杆菌JQ
‑
2接种至液体LB培养基，30℃、120r/min振荡培养至OD
600nm
值为1.3，得到种子液。
[0013]本专利技术还保护枯草芽孢杆菌JQ
‑
2的发酵液。
[0014]所述发酵液的制备方法可为：将枯草芽孢杆菌JQ
‑
2接种至发酵培养基，30℃、180r/min振荡培养24h。
[0015]所述发酵液的制备方法可为：将枯草芽孢杆菌JQ
‑
2种子液以5％的接种量接种至发酵培养基，30℃、180r/min振荡培养24h。
[0016]所述发酵液的制备方法可为：将枯草芽孢杆菌JQ
‑
2种子液以5％的接种量接种至
发酵培养基(培养基装液量为20％)，30℃、180r/min振荡培养24h。
[0017]枯草芽孢杆菌JQ
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2种子液的OD
600nm
值为1.3。
[0018]枯草芽孢杆菌JQ
‑
2种子液的制备方法具体可为：枯草芽孢杆菌JQ
‑
2接种至液体LB培养基，30℃、120r/min振荡培养至OD
600nm
值为1.3，得到种子液。
[0019]本专利技术还保护所述发酵液在制备蛋白酶和/或凝乳酶中的应用。
[0020]本专利技术还保护所述发酵液作为蛋白酶和/或凝乳酶的应用。
[0021]本专利技术还保护一种制备蛋白酶的方法，包括如下步骤：发酵培养枯草芽孢杆菌JQ
‑
2，得到发酵液。
[0022]发酵培养枯草芽孢杆菌JQ
‑
2的步骤具体可为：将枯草芽孢杆菌JQ
‑
2接种至发酵培养基，30℃、180r/min振荡培养24h。
[0023]发酵培养枯草芽孢杆菌JQ
‑
2的步骤具体可为：将枯草芽孢杆菌JQ
‑
2种子液以5％的接种量接种至发酵培养基，30℃、180r/min振荡培养24h。
[0024]发酵培养枯草芽孢杆菌JQ
‑
2的步骤具体可为：将枯草芽孢杆菌JQ
‑
2种子液以5％的接种量接种至发酵培养基(培养基装液量为20％)，30℃、180r/min振荡培养24h。
[0025]枯草芽孢杆菌JQ
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2种子液的OD
600nm
值为1.3。
[0026]枯草芽孢杆菌JQ
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2种子液的制备方法具体可为：枯草芽孢杆菌JQ
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2接种至液体LB培养基，30℃、120r/min振荡培养至OD
600nm
值为1.3，得到种子液。
[0027]所述方法还包括如下步骤：从所述发酵液中纯化得到蛋白酶。
[0028]所述纯化方法依次包括如下步骤：硫酸铵沉淀和阴离子交换柱纯化。
[0029]所述硫酸铵沉淀为70％饱和度硫酸铵沉淀。
[0030]所述硫酸铵沉淀为4℃环境70％饱和度硫酸铵沉淀。
[0031]所述硫酸铵沉淀的方法具体可为：在发酵液中加入硫酸铵至70％饱和度，然后4℃磁力搅拌20min，然后4℃静置2h。
[0032]阴离子交换柱纯化的参数如下：
[0033]阴离子层析柱：填充物为DEAE
‑
琼脂糖凝胶FF，柱子型号为2.6
×
40cm；
[0034]洗脱过程：先用Tris
‑
HCl缓冲液平衡，然后上样，然后用Tris
‑
HCl缓冲液洗脱。
[0035]洗脱流速具体可为2mL/min。
[0036]洗脱过程中收集保留时间为第26
‑
159min的过柱后溶液。
[0037]洗脱过程中收集保留体积为52
‑
318mL的过柱后溶液。
[0038]上样液的制备方法包括如下步骤：完成硫酸铵沉淀后，离心收集沉淀；用PBS缓冲液溶解沉淀，然后转移至透析袋(截留分子量为8000
‑
14000KDa)中，将透析袋置于PBS缓冲液中透析，然后收集透析袋中的液相，冷冻干燥，得到冻干粉；将冻干粉溶解于Tris
‑
HCl缓冲液，然后用0.45μm滤膜过滤，收集滤液，即为上样液。
[0039]上样液的制备方法包本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)JQ
‑
2，其保藏登记号为CGMCC No.25660。2.权利要求1所述枯草芽孢杆菌的发酵液。3.一种制备蛋白酶的方法，包括如下步骤：发酵培养权利要求1所述枯草芽孢杆菌，得到发酵液。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述方法还包括如下步骤：从所述发酵液中纯化得到蛋白酶。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于：所述蛋白酶具有11个区段；所述11个区段分别如序列表的序列2至序列12所示。6.权利要求3至5中任一所述方法制备得到的蛋白酶。7.应用，为如下(a)或(b)或(c)...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨贞耐，赵华，张敏，刘竹韵，任青霞，薛瑞，刘同吉，
申请(专利权)人：北京工商大学，
类型：发明
国别省市：