一种丙酮酸氧化酶制剂及其工业化生产方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种丙酮酸氧化酶制剂及其工业化生产方法与应用，首先将含有丙酮酸氧化酶的菌种扩大培养发酵，加入乳糖进行诱导后加入维生素B1和维生素B2溶液，继续发酵至26h后，加入硫酸镁溶液后继续发酵至菌液浓度大于120g/L，制备得到发酵液，将发酵液洗涤后加入核酸酶进行均质处理，然后将处理后料液中加入絮凝剂，搅拌均匀后过滤，将滤液进行浓缩后得到丙酮酸氧化酶制剂溶液。本发明专利技术在发酵过程中在乳糖诱导之后加入维生素B1和维生素B2，同时将补加硫酸镁的时间改为发酵后26h之后，使得制备得到的丙酮酸氧化酶制剂的酶活性大大提高。高。高。

【技术实现步骤摘要】
一种丙酮酸氧化酶制剂及其工业化生产方法与应用


[0001]本专利技术属于生物工程
，尤其涉及一种丙酮酸氧化酶制剂及其工业化生产方法与应用。

技术介绍

[0002]丙酮酸氧化酶(Pyruvate Oxidase)是一种焦磷酸硫胺素(Thiaminepyrophosphate，TPP)依赖型的氧化酶。当无机磷酸和氧分子存在时，在辅酶TPP、FAD和Mg2+的参与下，丙酮酸氧化酶能催化丙酮酸氧化脱羧生成乙酰磷酸、CO2和H2O2。在过氧化物酶的共同作用下，丙酮酸氧化酶可以用于人体血液中丙氨酸氨基转移酶和天冬氨酸氨基转移酶的测定，同时，还可用于河水和废水中磷酸根离子含量的测定。丙酮酸氧化酶作为一种酶生物催化剂在生化检验中发挥着非常重要的作用，包括临床生化检验、环境检测及生物传感器中，用于即时在线检测发酵生产中重要的中间产物丙酮酸以及血液中的丙酮酸含量。
[0003]工业化生产丙酮酸氧化酶酶制剂，因涉及到多辅酶及辅因子体系，发酵培养基经过长时间蒸汽灭菌后，有机营养物损失较大，导致发酵过程无法确定是否能满足辅酶合成所需的营养需求，引起发酵活力本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种丙酮酸氧化酶制剂的工业化生产方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将含有丙酮酸氧化酶的菌种扩大培养，当菌液浓度为35～40g/L时，加入葡萄糖，发酵至菌液浓度为45
‑
55g/L时，降温后加入乳糖进行诱导，然后加入维生素B1和维生素B2溶液；S2、将步骤S1中的菌液发酵至26h后，加入二价金属离子溶液后继续发酵至菌液浓度大于120g/L，制备得到发酵液；S3、将步骤S3中的发酵液洗涤后加入核酸酶进行均质处理，结束后在均质液中再次加入核酸酶后升温至50
±
1℃，保温处理得到处理后料液，然后将处理后料液中加入絮凝剂，搅拌均匀后过滤；S4、将步骤S3中得到的滤液进行浓缩后得到丙酮酸氧化酶制剂溶液。2.根据权利要求1所述的工业化生产方法，其特征在于，步骤S1中维生素B1的加入量为发酵液体积的0.03
‑
0.07％，维生素B2的加入量为发酵液体积的0.01
‑
0.04％，其中维生素B1溶液和维生素B2溶液使用氯化钠溶液配制。3.根据权利要求1所述的工业化生产方法，其特征在于，步骤S2中的二价金属离子为镁离子，加入的二价金属离子的终浓度为0.05

【专利技术属性】
技术研发人员：邹乐，颜少慰，张廷志，
申请(专利权)人：水羊化妆品制造有限公司，
类型：发明
国别省市：