利用磁性纳米固定化酶将S腺苷甲硫氨酸转化合成ACC方法技术

本发明专利技术属于生物化工技术领域，具体涉及一种利用磁性纳米固定化酶将S腺苷甲硫氨酸转化合成ACC方法，包括：将种子在一定条件下培育，获得黄化苗；从黄化苗中提取1

【技术实现步骤摘要】
后，选取生长状况较好的幼苗碾压使其下胚轴尾部稍微破损，冷藏15
‑
26h，作为酶提取材料。
[0008]在上述的利用磁性纳米固定化酶将S腺苷甲硫氨酸转化合成ACC方法中，作为优选的方案，所述步骤二具体为：以pH 8.0的磷酸缓冲液并添加质量分数为0.01
‑
0.05%的二硫苏糖醇和质量分数为0.0001
‑
0.0005%磷酸吡哆醛作为提取液，料液比1:5
‑
15，用打浆机粉碎幼苗，粉碎时间1
‑
3min，然后放入超声提取器中提取2
‑
5min；将提取液用5
‑
6层纱布过滤，即可得到提取液。
[0009]在上述的利用磁性纳米固定化酶将S腺苷甲硫氨酸转化合成ACC方法中，作为优选的方案，所述步骤三具体为：向步骤二中的提取液中加入质量分数20%
‑
30%的硫酸铵，充分溶解后放入4℃保藏50
‑
90min，离心萃取器以5000
‑
8000转/min离心15
‑
20min，取上清液；上清液以截留分子量3KDa的超滤膜超滤，取截留溶液再用10KDa的超滤膜超滤，截留溶液即为1
‑
氨基环丙烷羧酸合成酶酶液。
[0010]在上述的利用磁性纳米固定化酶将S腺苷甲硫氨酸转化合成ACC方法中，作为优选的方案，所述步骤四具体为：取50
‑
100g APTS
‑
Fe4O3磁性纳米颗粒分散在1
‑
5 L质量分数10
‑
20%戊二醛（GA）水溶液中并搅拌 2
‑
5h，加入磁铁吸取磁性纳米颗粒；将制备好的APTS
‑
Fe4O3‑
GA纳米粒子均匀分散在1
‑
5 L上述酶液中，在20
‑
30℃和100
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200 rpm 下搅拌 3
‑
6 h，得到固定化酶用磷酸缓冲液洗涤数次，其中，磷酸缓冲液pH=8.0，将其储存在上述缓冲液中，即可得到1
‑
氨基环丙烷羧酸合成磁性纳米固定化酶。
[0011]在上述的利用磁性纳米固定化酶将S腺苷甲硫氨酸转化合成ACC方法中，作为优选的方案，所述磷酸缓冲液为磷酸钠缓冲液或者磷酸钾缓冲液。
[0012]在上述的利用磁性纳米固定化酶将S腺苷甲硫氨酸转化合成ACC方法中，作为优选的方案，所述步骤五具体为：用pH 8.0的磷酸缓冲液配置质量分数1%
‑
10%的S
‑
腺苷甲硫氨酸溶液100
‑
500 L，并向其中添加20
‑
60 g的二硫苏糖醇、1
‑
5g的磷酸吡哆醛和10
‑
50g的磁性纳米颗粒固定化酶，充分密封混合后，置于20
‑
30 ℃恒温反应釜中搅拌反应3
‑
6 h；然后，向反应釜底部加入磁铁吸附磁性纳米颗粒固定化酶，取出反应液，再加入新的反应液；连续循环反应5
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20次，合并反应液即为1
‑
氨基环丙烷羧酸粗品。
[0013]本专利技术提供一种利用磁性纳米固定化酶将S腺苷甲硫氨酸转化合成ACC方法，具有如下有益效果：本专利技术通过特定方法从植物黄化苗中提取制备1
‑
氨基环丙烷
‑1‑
羧酸合成酶，并通过交联法制备磁性纳米固定化酶。该固定化酶稳定性强，催化活性高。并且容易通过外加磁场快速从反应液中分离出来，循环使用，节省成本。
[0014]本专利技术通过提出的利用固定化1
‑
氨基环丙烷
‑1‑
羧酸合成酶连续循环合成1
‑
氨基环丙烷
‑1‑
羧酸的方法，便于放大，可大规模生产制备1
‑
氨基环丙烷
‑1‑
羧酸。
[0015]本专利技术提出的利用固定化1
‑
氨基环丙烷
‑1‑
羧酸合成酶连续循环合成1
‑
氨基环丙烷
‑1‑
羧酸的方法，在温和条件下反应，能耗低，不使用有机试剂和重金属，环境友好。
附图说明
[0016]图1为本专利技术的1
‑
氨基环丙烷羧酸合成磁性纳米固定化酶扫描电镜图；图2为本专利技术的ACC标准品HPLC色谱图；
图3为本专利技术的纯化产物HPLC色谱图；图4为本专利技术的ACC纯品1H
‑
NMR谱图；图5为本专利技术的ACC纯品
13
C
‑
NMR谱图。
具体实施方式
[0017]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0018]以下结合具体情况说明本专利技术的示例性实施例：实施例1如图1
‑
图5所示，本专利技术提供一种利用磁性纳米固定化酶将S腺苷甲硫氨酸转化合成ACC方法，包括：步骤一、将丝瓜、番茄、大豆、玉米种子中的至少任意一种在一定条件下培育，获得黄化苗；具体为：取1kg丝瓜、番茄、大豆或玉米种子中的一种，用蒸馏水洗净后浸泡24h置于湿润的纱布上，于 25℃培养箱中萌发；每天用蒸馏水洗涤幼苗一次，萌发6d 后，选取生长状况较好的幼苗碾压使其下胚轴尾部稍微破损，冷藏15
‑
26h，作为酶提取材料。步骤二：从黄化苗中提取1
‑
氨基环丙烷羧酸合成酶（ACS）溶液；具体为：以pH 8.0的磷酸缓冲液并添加质量分数为0.01
‑
0.05%的二硫苏糖醇和质量分数为0.0001
‑
0.0005%磷酸吡哆醛作为提取液，料液比1:5
‑
15，用打浆机粉碎幼苗，粉碎时间1
‑
3min，然后放入超声提取器中提取2
‑
5min；将提取液用5
‑
6层纱布过滤，即可得到提取液。
[0019]步骤三：利用步骤二中的提取液通过硫酸铵盐析法和超滤法获得高纯度1
‑
氨基环丙烷羧酸合成酶（ACS）；具体为：向步骤二中的提取液中加入质量分数20%
‑
30%的硫酸铵，充分溶解后放入4℃保藏50 min，离心萃取器以6000 r/min离心15
‑
20min，取上清液；上清液以截留分子量3 KDa的超滤膜超滤，取截留溶液再用10 KDa的超滤膜超滤，截留溶液即为1
‑
氨基环丙烷羧酸合成酶酶液。
[0020]步骤四：将高纯度1
‑
氨基环丙烷羧酸合成酶（ACS）通本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用磁性纳米固定化酶将S腺苷甲硫氨酸转化合成ACC方法，其特征在于，包括：步骤一：将丝瓜、番茄、大豆、玉米种子中的至少任意一种在一定条件下培育，获得黄化苗；步骤二：从黄化苗中提取1
‑
氨基环丙烷羧酸合成酶（ACS）溶液；步骤三：利用步骤二中的提取液通过硫酸铵盐析法和超滤法获得高纯度1
‑
氨基环丙烷羧酸合成酶（ACS）；步骤四：将高纯度1
‑
氨基环丙烷羧酸合成酶（ACS）通过戊二醛交联法获得磁性纳米固定化1
‑
氨基环丙烷羧酸合成酶；步骤五：利用磁性纳米固定化1
‑
氨基环丙烷羧酸合成酶在辅酶溶液系统中将S
‑
腺苷甲硫氨酸连续循环生物转化合成1
‑
氨基环丙烷羧酸。2.根据权利要求1所述的利用磁性纳米固定化酶将S腺苷甲硫氨酸转化合成ACC方法，其特征在于，所述步骤一具体为：取1kg丝瓜、番茄、大豆或玉米种子中的一种，用蒸馏水洗净后浸泡24h置于湿润的纱布上，于 25℃培养箱中萌发；每天用蒸馏水洗涤幼苗一次，萌发6d 后，选取生长状况较好的幼苗碾压使其下胚轴尾部稍微破损，冷藏15
‑
26h，作为酶提取材料。3.根据权利要求1所述的利用磁性纳米固定化酶将S腺苷甲硫氨酸转化合成ACC方法，其特征在于，所述步骤二具体为：以pH 8.0的磷酸缓冲液并添加质量分数为0.01
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0.05%的二硫苏糖醇和质量分数为0.0001
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0.0005%磷酸吡哆醛作为提取液，料液比1:5
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15，用打浆机粉碎幼苗，粉碎时间1
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3min，然后放入超声提取器中提取2
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5min；将提取液用5
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6层纱布过滤，即可得到提取液。4.根据权利要求1所述的利用磁性纳米固定化酶将S腺苷甲硫氨酸转化合成ACC方法，其特征在于，所述步骤三具体为：向步骤二中的提取液中加入质量分数20%
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30%的硫酸铵，充分溶解后放入4℃保藏50
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90min，离心萃取器以5000
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8000r/min离心15
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【专利技术属性】
技术研发人员：马科，吴桐，薛靖文，曾淼，
申请(专利权)人：郑州尼采生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：