甾体化合物14α羟化酶及其应用制造技术

本发明专利技术涉及甾体化合物14α羟化酶及其应用。具体选自酶P450

【技术实现步骤摘要】
甾体化合物14
α
羟化酶及其应用


[0001]本专利技术属于酶学和微生物应用领域，尤其是涉及甾体化合物14α羟化酶及其应用。

技术介绍

[0002]甾体是一种广泛存在于动物、植物和真菌中的天然有机化合物，具有多种生理、药理活性，被广泛用于抗肿瘤、抗炎和抗真菌等药物。近年来，已有300多个甾体分子被批准用于药物开发，2020年全球甾体产品年销售额超过1500亿美元，是市场价值仅次于抗生素的第二大类药物。
[0003]甾体化合物通常由一个“环戊烷多氢菲”的四环母核和三个侧链组成基本碳骨架。甾烷核上官能团特别是羟基的不同排列方式，使甾体分子具有不同的生理功能。例如，11β
‑
OH对糖皮质激素的生物活性至关重要，14β
‑
OH是所有强心苷的核心且重要的结构特征，14α
‑
OH衍生物可用作部分人类乳腺癌或雌激素依赖性子宫肿瘤化学治疗剂、兽用孕激素药物等一系列化合物合成的前体等。
[0004]如何专一高效地在甾核结构的特定位点上修饰羟基一直是甾体领域的重要与核心问题。目本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.甾体化合物14α羟化酶，其特征在于，选自酶P450
Y
、酶P450
YM1
或酶P450
YM2
；其中，酶P450
Y
的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；酶P450
YM1
的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；酶P450 YM2
的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。2.一种可合成甾体14α羟化产物的工程菌株的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：PCR扩增获取酶P450
Y
、酶P450
YM1
或酶P450
YM2
的基因，得到P450
Y
基因、P450
YM1
基因或P450
YM2
基因；从真菌Cochliobolus lunatus CX3的cDNA文库中扩增获取P450还原酶基因，即CPR基因，其氨基酸序列如SEQ ID No.4所示；步骤二：将步骤一获得的P450
Y
基因、P450
YM1
基因或P450
YM2
基因中的一个和CPR基因片段同时克隆到表达载体，筛选阳性质粒；步骤三：将步骤二中获得的阳性质粒转入宿主菌，构建可合成甾体14α羟化产物的工程菌株；其中，酶P450
Y
的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；酶P450
YM1
的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；酶P450 YM2
的氨基酸序列如SEQ ID No.3所...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁如冰，尹献旗，林双君，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：