一种底物耐受型黄嘌呤氧化酶突变体及其应用制造技术

一种底物耐受型黄嘌呤氧化酶突变体及其应用，该突变体是将鲍氏不动杆菌黄嘌呤氧化酶Y351V进行如下任一突变后获得的：(1)将鲍氏不动杆菌黄嘌呤氧化酶的β亚基进行Q201E突变；(2)将鲍氏不动杆菌黄嘌呤氧化酶的β亚基进行Q201C突变；(3)将鲍氏不动杆菌黄嘌呤氧化酶的β亚基进行Q201L突变；(4)在鲍氏不动杆菌黄嘌呤氧化酶的β亚基的P319K突变；(5)将鲍氏不动杆菌黄嘌呤氧化酶的β亚基进行P319Y突变。所述突变体的应用是在高浓度底物条件下降解嘌呤类物质和酸类、醛类、胺类以及含氮杂环物质。本发明专利技术提供的底物耐受性明显提高，且具有更好的底物亲和力和催化效率，符合高浓度底物下工业化生产的需求，可降低生产成本，更加适用于工业化生产应用。工业化生产应用。

【技术实现步骤摘要】
一种底物耐受型黄嘌呤氧化酶突变体及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体是一种底物耐受型黄嘌呤氧化酶突变体及其应用，在鲍氏不动杆菌黄嘌呤氧化酶的基础上，通过点突变制造黄嘌呤氧化底物耐受性增强的黄嘌呤氧化酶突变体，该突变体在降解含嘌呤类物质和酸类、醛类、胺类以及含氮杂环物质材料中的应用。

技术介绍

[0002]黄嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase，简称XOD)是一种含钼氧化还原酶，它与黄嘌呤脱氢酶(Xanthine Dehydrogenase，XDH)由同一基因编码而成，而XOD是XDH通过翻译后修饰得到。XOD能够催化包括嘌呤、喋呤、醛酸、胺类等杂环类化合物在内的sp2杂化碳原子，因此具有重要的商业应用价值，其中黄嘌呤氧化酶的应用主要涉及五个方面，分别是药物代谢、核苷类药物合成、体外检测、生物修复、健康食品方面(王成华，邢新会.黄嘌呤氧化酶的研究进展及其发展前景[J].广西科学,2017,24(1):15
‑
24.)。
[0003]底物抑制现象是黄嘌呤氧化酶催化过程中普遍存在的现象。已有研究表明本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鲍氏不动杆菌黄嘌呤氧化酶突变体，其特征在于，该突变体酶是由
ɑ
亚基和β亚基构成，所述
ɑ
亚基的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述β亚基的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。2.根据权利要求1所述的鲍氏不动杆菌黄嘌呤氧化酶突变体，其特征在于，该突变体酶是由
ɑ
亚基和β亚基构成，(a)所述α亚基的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；(b1)所述β亚基的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的第201位的谷氨酰胺替换为谷氨酸后得到的氨基酸序列；(b2)所述β亚基的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的第201位的谷氨酰胺替换为半胱氨酸后得到的氨基酸序列；(b3)所述β亚基的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的第201位的谷氨酰胺替换为亮氨酸后得到的氨基酸序列；(b4)所述β亚基的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的第319位的脯氨酸替换为赖氨酸后得到的氨基酸序列；(b5)所述β亚基的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的第319位的脯氨酸替换为酪氨酸后得到的氨基酸序列。3.编码权利要求1所述蛋白质的DNA分子。4.根据权利要求3所述的DNA分子，其特征在于：所述核酸分子为编码权利要求1所述蛋白质的基因，所述基因为如下1)
‑
12)中任一所示DNA分子：1)将SEQ ID NO.3的第2102
‑
2104位的cag替换为gag后所得序列所示DNA分子；2)将SEQ ID NO.3的第2102
‑
2104位的cag替换为gag后所得序列的第1501
‑
2377位所示DNA分子；3)将SEQ ID NO.3的第2102
‑
2104位的cag替换为tgt后所得序列所示DNA分子；4)将SEQ ID NO.3的第2102
‑
2104位的cag替换为tgt后所得序列的第1501
‑
2377位所示DNA分子；5)将SEQ ID NO.3的第2102
‑
2104位的cag替换为ctt后所得序列所示DNA分子；6)将SEQ ID NO.3的第2102
‑
2104位的cag替换为ctt后所得序列的第1501
‑
2377位所示DNA分子；7)将SEQ ID NO.3的第2456
‑
2458位的cca替换为aag后所得序列所示DNA分子；8)将SEQ ID NO.3的第2456
‑
2458位的cca替换为aag后所得序列的第1501
‑
2377位所示DNA分子；9)将SEQ ID NO.3的第2456
‑
2458位的cca替换为tat后所得序列所示DNA分子；10)将SEQ ID NO.3的第2456
‑
2458位的cca替换为tat后所得序列的第1501
‑
2377位所示DNA分子；11)在严格条件下与1)
‑
10)中任一所限定的DNA分子杂交且编...

【专利技术属性】
技术研发人员：王成华，文佑，徐佳慧，潘冬雷，
申请(专利权)人：广西大学，
类型：发明
国别省市：