活性重组hTET2蛋白的表达及纯化方法技术

本发明专利技术提供一种活性重组hTET2蛋白的表达及纯化方法，通过选择编码hTET2蛋白的活性序列的基因，并在其N端添加一段编码多肽序列DYKDDDDK的基因。再将目的基因转移至HEK293细胞中异源表达出重组hTET2蛋白，通过超声破碎细胞，再经DYKDDDDK抗体偶联层析柱亲和纯化，可以得到经EM

【技术实现步骤摘要】
活性重组hTET2蛋白的表达及纯化方法


[0001]本专利技术涉及一种蛋白纯化工程
，具体涉及一种高活性重组hTET2蛋白的表达及纯化方法。

技术介绍

[0002]基因组甲基化不能通过常规的PCR检测出来。目前，主流的甲基化测序方法是基于亚硫酸氢盐(Bisulfite，BS)处理DNA之后而衍生的测序方法。亚硫酸氢盐测序(BS
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Seq)可以将未甲基化的胞嘧啶(C)脱氨基生成尿嘧啶(U)，而甲基化的胞嘧啶不会被脱氨基，仍然为(5mC)。在后续的测序过程中，U会被检测为T，5mC被检测为C，将测序结果与未经亚硫酸盐处理的测序结果进行对比，即可得到甲基化的位点。但是BS
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Seq也存在以下缺陷：(1)亚硫酸氢盐极具破坏性，会降解接触到的99％的底物，因此不适用于稀有的样品。(2)BS
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Seq的方法不能区分5
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甲基胞嘧啶(5mC)及其氧化产物5
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羟甲基胞嘧啶(5
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hmC)。
[0003]TET(Ten<br/>‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种活性重组hTET2蛋白，其序列如SEQ ID NO.1所示。2.一种用于编码权利要求1所述的活性重组hTET2蛋白的基因，其序列如SEQ ID NO.2所示。3.一种权利要求1所述的活性重组hTET2蛋白的表达及纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：合成权利要求2所述的用于编码权利要求1所述的重组hTET2蛋白的基因，插入到载体pcDNA3.1中，得重组质粒pcDNA3.1
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hTET2；将重组质粒pcDNA3.1
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hTET2转入HEK293F细胞中，培养至细胞活率低于70％时收获细胞培养物；对细胞进行超声裂解，离心，得上清液；将上清液进行亲和层析，透析脱盐，得重组hTET2蛋白粗提纯产物；将蛋白粗提纯物进一步进行离子交换层析，得重组hTET2蛋白精提纯产物；重组hTET2蛋白精提纯产物透析，超滤浓缩，分装，即得。4.根据权利要求3所述的重组hTET2蛋白的表达及纯化方法，其特征在于，所述超声裂解的工艺参数为：功率250W，时间5min，3s/3s，采用的破菌液组成为：50mM Tris
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HCl pH 7.5，300mM NaCl，0.1*cOmpleteTM Protease Inhibitor Cocktail，0.1mM AEBSF，1％Triton X
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100。5.根据权利要求3所述的重组hTET2蛋白的表达及纯化方法，其特征在于，所述亲和层析的工艺参数为：冲洗杂蛋白所采用的冲洗液为含300mM NaCl且pH为7.5的Tris
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HCl缓冲液，洗脱目标蛋白的洗脱液为含300mM ...

【专利技术属性】
技术研发人员：周雪莉，赵中梳，熊章万，鲁俊超，柴智，张福城，
申请(专利权)人：武汉爱博泰克生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：