可用于治疗GM1神经节苷脂症的组成物制造技术

提供一种可用于治疗GM1神经节苷脂症的治疗方案，包含投予具有AAV衣壳和载体基因组的重组腺相关病毒(rAAV)载体，所述载体基因组包含编码人类β

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】Lysosomal Storage Diseases),神经病理学和实验神经学杂志(Journal of Neuropathology and Experimental Neurology),58:887
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902；Kaye等人,1992,GM1神经节苷脂症的动物模型中的髓鞘生成不良(Dysmyelinogenesis in animal model of GM1 gangliosidosis),儿科神经学(Pediatric Neurology),8:255
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61)和炎症反应(Jeyakumar等人,2003,中枢神经系统炎症是小鼠GM1和GM2神经节苷脂症模型中的病变发生标志(Central nervous system inflammation is a hallmark of pathogenesis in mouse models of GM 1and GM2 gangliosidosis),脑(Brain),126:974
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87)。
[0003]目前并无针对GM1的改善病程进展的治疗(disease
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modifying therapies)。包括喂食管放置、呼吸治疗和抗癫痫药的支持性护理和对症治疗为目前的治疗途径(Jarnes Utz等人,2017,婴儿神经节苷脂症：对应于临床变化的时间线(Infantile gangliosidoses:Mapping a timeline of clinical changes),分子遗传学和代谢(Molecular Genetics and Metabolism),121:170
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79)。以麦格司他(miglustat)(一种葡苷基神经酰胺(glucosylceramide)合成酶抑制剂)的基质减量疗法(Substrate reduction therapy(SRT))，已于GM1和GM2患者中评量。仅管麦格司他通常耐受性良好，但并未导致症状管理或疾病进展方面的显著改善，且某些患者会出现剂量限制的胃肠道副作用(Shapiro等人,2009,Regier等人,2016b)。当与生酮饮食合并使用时，麦格司他已显示具有良好的耐受性，并于一些患者中增加生存率(Jarnes Utz等人,2017)。然而，应注意尚未进行过以麦格司他的随机对照研究，且麦格司他并未获批准用于治疗GM1神经节苷脂症。于此疾病中，以骨髓或脐带血的造血干细胞移植(HSCT)经验有限。对患有第2型GM1的患者进行的骨髓移植使症状发作前的幼年型发作GM1
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神经节苷脂症患者的白血球β
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半乳糖苷酶水平正常化，不会改善长期临床结果(Shield等人,2005,矫正β
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半乳糖苷酶活性的骨髓移植不影响青少年GM1神经节苷脂症的神经结果(Bone marrow transplantation correctingβ
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galactosidase activity does not influence neurological outcome in juvenile GM1
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gangliosidosis).遗传代谢疾病杂志(Journal of Inherited Metabolic Disease).28(5):797
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798.)。HSCT的起效时间缓慢，使其不适合用于快速进展的第1型GM1疾病(Peters和Steward,2003,遗传代谢疾病的造血细胞移植：结果和实践指南的概览(Hematopoietic cell transplantation for inherited metabolic diseases:an overview of outcomes and practice guidelines).骨髓移植(Bone Marrow Transplantation).3 1:229.)。腺相关病毒(Adeno
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associated virus(AAV))，细小病毒科(Parvovirus family)的—员，为具有约4.7千碱基对(kb)长的单股线状DNA(ssDNA)基因组的小的无套膜的二十面体病毒。野生型基因组包含于DNA股的两端的反向末端重复(inverted terminal repeat(ITRs))，和两个开读框(open reading frames(ORFs))：rep和cap。rep由四个重叠的基因组成，所述基因编码AAV生命周期所需的rep蛋白，以及cap含有衣壳蛋白：VP1、VP2和VP3的重叠核苷酸序列，其自组装形成二十面体对称的衣壳。
[0004]AAV被指定为依赖病毒(Dependovirus)属，因为所述病毒为作为经纯化的腺病毒原种中的污染物而被发现。AAV的生命周期包括潜伏期和感染期，在潜伏期内，AAV基因组在感染后会被定点整合到宿主染色体中，而在感染期内，腺病毒或单纯疱疹病毒(herpes simplex virus)感染后，整合的基因组随后会被抢救、复制并包装至传染性病毒中。非致病性、广泛宿主范围(包括非分裂细胞)的感染力和潜在的位点特异性染色体整合的特性使
AAV成为有吸引力的基因转移工具。
[0005]期望的是用于治疗与异常GLB1基因相关的病症的替代疗法。

技术实现思路

[0006]提供一种治疗性重组的复制缺陷的腺相关病毒(rAAV)，其可用于有需要的人类患者中治疗和/或减轻与GM1神经节苷脂症相关的症状。所述rAAV理想地是复制缺陷的且携带一载体基因组，所述载体基因组包含于指导其在目标的人类细胞中表达的调节序列的控制下编码人类(h)β
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半乳糖苷酶的GLB1基因，如本文所使用，可被称为rAAV.GLB1。在某些具体实施例中，rAAV包含AAVhu68衣壳。本文中此rAAV被称为rAAVhu68.GLB1，但在某些情形下，术语rAAVhu68.GLB1载体、rAAVhu68.hGLB1、rAAVhu68.hGLB1载体、AAVhu68.GLB1、或AAVhu68.GLB1载体可交替使用而指相同构筑体。
[0007]在一个方面中，在此提供一种可用于人类患者中治疗GM1神经节苷脂症的治疗方案，其中所述方案包含投予具有AAV衣壳和载体基因组的重组腺相关病毒(rAAV)载体，所述载体基因组包含在引导其在目标细胞中表达的调节序列的控制下编码人类β
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半乳糖苷酶的序列，所述投予包含单剂的脑大池内(ICM)注射，所述单剂包含：(i)约1.6x10
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至约1.6x10
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GC，其中所述患者为约1个月至约4个月龄；(ii)约2.1x10
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至约2.1x10
14
GC，其中所述患者为至少4个月龄至低于8个月龄；(iii)约2.6x10
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至约2.6x10
14
GC，其中所述患者为至少8个月龄至高至12个月龄；或(iv)本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种可用于治疗人类患者的GM1神经节苷脂症的治疗方案，其中该方案包含投予具有AAV衣壳和载体基因组的重组腺相关病毒(rAAV)载体，所述载体基因组包含在引导其于目标细胞中表达的调节序列的控制下编码人类β
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半乳糖苷酶的序列，所述投予包含单剂的脑大池内(ICM)注射，所述单剂包含：(i)约1.6x10
13
至约1.6x10
14 GC，其中所述患者为约1个月至约4个月龄；(ii)约2.1x10
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至约2.1x10
14 GC，其中所述患者为至少4个月龄至低于8个月龄；(iii)约2.6x10
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至约2.6x10
14 GC，其中所述患者为至少8个月龄至高至12个月龄；或(iv)约3.2x10
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至约3.2x10
14 GC，其中所述患者为至少12个月龄。2.根据权利要求1所述的方案，其中所述人类β
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半乳糖苷酶编码序列包含记载于SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：6、或SEQ ID NO：5的核苷酸序列，或与SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：6、或SEQ ID NO：5的任一者至少95％相同的序列，其编码SEQ ID NO：4的氨基酸24至677的成熟β
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半乳糖苷酶。3.根据权利要求1或2所述的方案，其中所述经编码的人类β
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半乳糖苷酶具有选自下列的序列：(a)SEQ ID NO：4的约氨基酸1至677；和(b)合成的人类酶，包含融合至SEQ ID NO：4的约氨基酸24至677的异源引导子序列。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方案，其中所述载体基因组进一步包含5'反向末端重复(ITR)序列、衍生自人类泛素C(UbC)启动子的调节元件、嵌合内含子、polyA信号、和/或3'ITR序列。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方案，其中所述患者已被鉴定为患有第1型(婴幼期)GM1或第2a型(婴幼晚期)GM1。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方案，其进一步包含在递送rAAV的至少前一天或当天，对所述患者实施至少一种免疫抑制协同疗法。7.根据权利要求6所述的方案，其中所述免疫抑制协同疗法包括一或多种皮质类固醇。8.根据权利要求6或7所述的方案，其中所述免疫抑制协同疗法包括口服去氢皮质醇(oralprednisolone)。9.根据权利要求8所述的方案，其中所述口服去氢皮质醇以每公斤体重约1mg投予。10.根据权利要求5至9中任一项所述的方案，其中投予rAAV后，实施所述至少一种免疫抑制协同疗法持续至少3至4周。11.根据权利要求1至10中任一项所述的方案，其中通过延缓癫痫发作、降低癫痫发作频率、血清和/或脑脊髓液中的β
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半乳糖苷酶以及通过核磁共振造影(MRI)测量的脑组织的体积变化中的一种或多种来评估治疗的疗效。12.一种包含重组AAV(rAAV)载体的组成物，所述rAAV载体包含AAV衣壳和载体基因组，所述载体基因组包含人类β
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半乳糖苷酶编码序列和引导其在目标细胞中表达的表达控制序列，其中所述rAAV载体被调配成用于脑大池内(ICM)注射至需要其的人类个体，以投予下列剂量：(i)约1.6x10
13
至约1.6x10
14 GC，其中所述患者为约1个月至约4个月龄；(ii)约2.1x10
13
至约2.1x10
14 GC，其中所述患者为至少4个月龄至低于8个月龄；(iii)约2.6x10
13
至约2.6x10
14 GC，其中所述患者为至少8个月龄至高至12个月龄；或
(iv)约3.2x10
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至约3.2x10
14 GC，其中所述患者为至少12个月龄。13.根据权利要求12所述的组成物，其中所述人类β
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半乳糖苷酶编码序列包含记载于SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：6、或SEQ ID NO：5的核苷酸序列，或与SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：6、或SEQ ID NO：5的任一者至少95％相同的序列，其编码SEQ ID NO：4的氨基酸24至677的成熟β
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半乳糖苷酶。14.根据权利要求12或13所述的组成物，其中所述载体基因组进一步包含5'反向末端重复(ITR)序列、衍生自人类泛素C(UbC)启动子的调节元件、嵌合内含子、polyA信号、和/或3'ITR序列。15.根据权利要求12至14中任一项所述的组成物，其中所述rAAV被调配成悬浮液以递送每克脑质量3.33x10
10 GC至每克脑质量3.33x10
11 GC，可选择地其中所述投予剂量的体积为约3.0mL至约5.0mL。16.根据权利要求12至15中任一项所述的组成物，其中所述rAAV存在于具有pH 6至9的调配缓冲液中，可选择地其中所述pH为约7.2。17.根据权利要求12至16中任一项所述的组成物，其用于协同疗法中，所述协同疗法包含在递送rAAV的至少前一天或当天向患者投予至少一种免疫抑制剂。18.根据权利要求17所述的组成物，其中所述免疫抑制剂为皮质类固醇，可选择地为经口递送的去氢皮质醇。19.一种治疗罹患GM1神经节苷脂症的患者的方法，所述方法包含通过脑大池内(ICM)注射向患者投予单剂的重组腺相关病毒(rAAV)，其中所述rAAV包含AAV衣壳和载体基因组，所述载体基因组包含在引导其于目标细胞中表达的调节序列的控制下编码人类β
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半乳糖苷酶的序列，且其中所述单剂为所述患者每克估算脑质量1x10
10 GC至3.4x10
11 GC。20.根据权利要求19所述的方法，其中所述患者在18个月龄或之前有GM1症状的发作。21.根据权利要求20所述的方法，其中所述患者在6个月龄或之前有GM1症状的发作。22.根据权利要求20所述的方法，其中所述患者在6至18个月龄有GM1症状的发作。23.根据权利要求19至21中任一项所述的方法，其中所述患者患有第1型(婴幼期)GM1。24.根据权利要求19、20或22中任一项所述的方法，其中所述患者患有第2a型(婴幼晚期)GM1。25.根据权利要求19至24中任一项所述的方法，其中所述患者已被诊断患有第1型或第2a型GM1。26.根据权利要求19至25中任一项所述的方法，其中所述个体为至少4个月龄。27.根据权利要求26所述的方法，其中所述个体为4至36个月龄。28.根据权利要求26所述的方法，其中所述个体为4至24个月龄的人类患者。29.根据权利要求26所述的方法，其中所述患者为6至36个月龄的人类患者。30.根据权利要求26所述的方法，其中所述患者为6至24个月龄的人类患者。31.根据权利要求26所述的方法，其中所述患者为12至36个月龄的人类患者。32.根据权利要求26所述的方法，其中所述患者为12至24个月龄的人类患者。33.根据权利要求19至32中任一项所述的方法，其中所述单剂为所述患者的每克估算脑质量3.3x10
10 GC。
34.根据权利要求33所述的方法，其中所述单剂为2.1x10
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【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：宾夕法尼亚州大学信托人，
类型：发明
国别省市：