一种茶树内生真菌及在促进铁皮石斛生长的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种茶树内生真菌及在促进铁皮石斛生长的应用，属于微生物技术领域。本发明专利技术涉及的异常威克汉姆酵母属菌株(Wickerhamomycessp.)，于2022年09月15日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌株保藏名称为：KLBMP0506，保藏编号为：CGMCCNo.25719。其在促进铁皮石斛生长及次级代谢产物积累等方面具有显著作用，为开发珍稀药用石斛属植物促生菌肥提供优良的菌种资源，促进石斛产业化发展，具有良好的应用开发前景。景。景。

【技术实现步骤摘要】
一种茶树内生真菌及在促进铁皮石斛生长的应用


[0001]本专利技术属于微生物
，具体涉及一种茶树内生真菌的异常威克汉姆酵母属菌株(Wickerhamomycessp.)及其在促进铁皮石斛生长中的应用。

技术介绍

[0002]铁皮石斛(DendrobiumofficinaleKimuraetMigo)，又名黑节草，隶属于兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium)，是我国特有珍稀濒危药用植物。具有养阴生津、护肝利胆、养胃护肠、降糖明目、抗癌防老等功效。现已被列入《中国药典》(TheState PharmacopoeiaCommissionofP.R.China,2010)及药食同源目录。由于其极高的药用、经济价值，市场对铁皮石斛的需求量不断扩大，导致了严重的滥采滥挖现象，加上其自身在自然环境下生长速度缓慢，种子萌发率低，对生境要求苛刻，铁皮石斛的野生资源已近乎枯竭。人工栽培是解决其野生资源短缺问题的有效途径。但人工种植铁皮石斛仍面临生长周期长、平均产量低等问题，为追求高产、缩短生长周期，目前铁皮石斛石斛种植产业存在的植物生长调节剂、化肥使用超标现象十分严重，导致人工种植的铁皮石斛品质差，这些问题在一定程度上限制了铁皮石斛的产业化发展。
[0003]植物内生菌是指其生活史中某一阶段或整个阶段生活在健康植物组织或器官内，并对宿主植物没有引起明显病害症状的一类微生物群，主要包括内生真菌、内生细菌、内生放线菌。植物内生菌作为一类重要的微生物资源，在对植物的生长发育、次生代谢物的积累、抗逆性的提高等方面具有重要的促进作用。近年来，探究内生菌与药用植物的互作关系，利用内生菌提高药用植物的产量及品质已成为多个领域的研究热点。高产和优质一直是中药材研究追求的目标，利用内生菌资源提高药用植物的产量和质量，对保护和开发药用植物资源具有重要的生态意义。
[0004]目前已有一些关于利用内生菌促进铁皮石斛生长的研究，但效果并不理想，目前利用的功能菌株很难达到既能促进铁皮石斛生长，同时又能提高其次级代谢产物的含量。胡秀芳等人利用鞘氨醇单胞菌(Sphingomonassp.)实现了促进铁皮石斛组培苗的生长，但鲜重和干重仅增加了10％左右。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足之处，提供一种对铁皮石斛有明显促生作用的异常威克汉姆酵母属菌株(Wickerhamomycessp.)该菌株可促进铁皮石斛的生长及次级代谢产物的积累，有利于解决铁皮石斛培育及栽培过程中生长速度慢、周期长、品质差等技术难题。
[0006]为了实现上述技术目的，本专利技术的一种茶树内生真菌，其特征在于：该茶树内生真菌的分类明命名为异常威克汉姆酵母属菌株(Wickerhamomycessp.)，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，菌株保藏名称为：KLBMP0506，保藏编号为：CGMCCNo.25719，保藏日期为2022年09月15日。
[0007]一种如权利要求1所述的茶树内生真菌的应用，能够促进铁皮石斛生长及次级代谢产物的积累。
[0008]一种制备茶树内生真菌菌剂的方法，利用权利要求1所述的异常威克汉姆酵母属菌株(Wickerhamomycessp.)，进行如下处理：
[0009]将菌株KLBMP0506接种于新鲜的YPD液体培养基中，于28℃摇床，200rpm/min培养16h，活化菌株；
[0010]按照体积比为1:100的比例将已活化好的菌液2mL转接至200mLYPD液体培养基中，于28℃，200rpm/min摇床培养至OD
600
＝0.6；
[0011]对培养产物进行6000rpm/min离心10min，弃上清收集菌体，并用无菌水重悬菌体，调节菌液浓度为OD
600
＝0.5。
[0012]进一步，将KLBMP0506菌液接种于铁皮石斛组培苗，每瓶组培苗接种200μL菌液，菌液浓度为OD
600
＝0.5，菌液接在组培苗基部附近，从而促进铁皮石斛的生长及次级代谢产物的积累。
[0013]进一步，所述YPD液体培养基为：酵母提取物10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，定容至1000mL蒸馏水中，PH自然。
[0014]进一步，所述菌剂为微生物肥料。
[0015]一种组合物，包含权利要求1所述的茶树内生真菌。
[0016]本专利技术的一种茶树内生真菌为异常威克汉姆酵母属菌株(Wickerhamomycessp.)，菌株KLBMP0506从茶树果实中采用内生真菌分离纯化技术分离获得的，具体分离纯化方法如下：
[0017]1)取采自江西高安的茶树果实，流水冲洗10min，并将冲洗过后的样本超声波清洗10min，以避免组织表面附着的难冲洗物质影响分离结果，然后在超净工作台内将冲洗后的样本先用75％乙醇浸泡消毒1min，无菌水冲洗1次，然后用2％次氯酸钠溶液浸泡消毒6min，无菌水洗3遍，表面消毒后的样本用剪刀剪成小组织后平铺在YPD固体培养基上，于28℃环境培养2
‑
5d，直至长出单菌落；
[0018]2)挑取单菌落于同上述步骤(1)中的YPD平板划线纯化，于28℃环境培养，并进行划线纯化分离，获得纯培养物。
[0019]有益效果：与现有技术相比，本专利技术的优点是：
[0020]本专利技术的菌株KLBMP0506对铁皮石斛促生效果显著，同时可以有效促进铁皮石斛次级代谢产物的积累。该菌株可作为微生物菌肥，用于铁皮石斛的种苗培育及人工种植过程，提升其药材的质量，保证药材使用的有效性及安全性，能够减轻化肥滥用带来的环境污染问题。
[0021]本专利技术从植物内生菌的角度出发，利用菌株KLBMP0506显著促进了铁皮石斛生长，同时有效提高了铁皮石斛次级代谢产物的含量。本专利技术提供的菌株可作为微生物菌肥，用于铁皮石斛的种苗培育及人工栽培过程，提升铁皮石斛药材的质量，保证其药材使用的有效性及安全性，同时也能够减轻大量使用化肥带来的环境污染问题。
[0022]本专利技术的菌株KLBMP0506培养条件简单、容易保存、遗传稳定、易于工业化生产，具有良好的开发应用前景。
附图说明
[0023]图1为本专利技术所述的菌株KLBMP0506在YPD固体培养基上的形态图，图中A为平板正面；B为平板反面。
[0024]图2为本专利技术所述的菌株KLBMP0506对铁皮石斛生长的影响(CK为对照组，3w、6w、9w分别代表菌株KLBMP0506与铁皮石斛共培养3周、6周和9周)，图中A为鲜重；B为干重。
[0025]图3为本专利技术所述的菌株KLBMP0506对铁皮石斛多糖积累的影响，图中A为总多糖标准曲线；B为各组总多糖含量。
[0026]图4为本专利技术所述的菌株KLBMP0506对铁皮石斛石斛碱积累的影响，图中A为石斛碱标准曲线；B为各组石斛碱含量。
具体实施方式
[0027本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种茶树内生真菌，其特征在于：该茶树内生真菌的分类明命名为异常威克汉姆酵母属菌株(Wickerhamomyces sp.)，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，菌株保藏名称为：KLBMP0506，保藏编号为：CGMCC No.25719，保藏日期为2022年09月15日。2.一种如权利要求1所述的茶树内生真菌的应用，其特征在于：促进铁皮石斛生长及次级代谢产物的积累。3.一种制备茶树内生真菌菌剂的方法，其特征在于，利用权利要求1所述的异常威克汉姆酵母属菌株(Wickerhamomyces sp.)，进行如下处理：将菌株KLBMP0506接种于新鲜的YPD液体培养基中，于28℃摇床，200rpm/min培养16h，活化菌株；按照体积比为1:100的比例将已活化好的菌液2mL转接至200mL YPD液体培养基中，于28℃...

【专利技术属性】
技术研发人员：李露丹，陈雨杰，蒋继宏，曹小迎，孙勇，吕梦娇，徐靓，徐丹，
申请(专利权)人：江苏师范大学，
类型：发明
国别省市：