利用基因编辑技术创制甘蓝型油菜矮化材料的方法和应用技术

本发明专利技术属于植物基因工程和生物技术领域，特别涉及一种利用CRISPR/Cas9基因编辑技术创制甘蓝型油菜矮化材料的方法和应用。该方法通过利用CRISPR/Cas9基因编辑技术编辑甘蓝型油菜BnaA06G0083400WE基因，获得甘蓝型油菜矮化材料；所述甘蓝型油菜矮化材料的编码基因突变体的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。本发明专利技术通过CRISPR/Cas9基因编辑技术对甘蓝型油菜BnaA06G0083400WE基因进行基因编辑，得到矮化的甘蓝型油菜，为甘蓝型油菜育种提供宝贵的基因资源和种质资源；该方法特性强，容易获得，是实现目标性状改良，培育新材料的有效途径，可应用于油茶育种中。应用于油茶育种中。应用于油茶育种中。

【技术实现步骤摘要】
利用基因编辑技术创制甘蓝型油菜矮化材料的方法和应用


[0001]本专利技术属于植物基因工程和生物
，涉及甘蓝型油菜BnaA06G0083400WE基因定点突变的方法和应用，特别涉及一种利用CRISPR/Cas9基因编辑技术创制甘蓝型油菜矮化材料的方法和应用。

技术介绍

[0002]株高直接影响作物的抗倒性能和丰产潜力，成为现代作物育种和理想株型育种的重要指标之一。矮化育种是绿色革命的重要组成部分，其最早开始于Norman Borlaug于1950发起的小麦育种革命，而水稻半矮秆基因sd1和小麦Rht8的发现以及应用则是这场革命的里程碑此后，水稻、玉米和黄瓜等作物的矮化育种工作相继开展了起来。
[0003]目前我国油菜主产区90％以上油菜品种都是甘蓝型油菜，株高高于180cm的占36％以上，低于160cm的仅11％。株高过高易引起倒伏、不耐肥、不适宜机械化操作等生产问题，是制约油菜机械化生产的重要因素之一。在油菜倒伏后，油菜每角果粒数下降17.5％，种子产量降低16.2％，同时油菜机械化收获的难度和机损率增加，进而导致收获性减产。目本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用基因编辑技术创制甘蓝型油菜矮化材料的方法，其特征在于，通过利用CRISPR/Cas9基因编辑技术编辑甘蓝型油菜BnaA06G0083400WE基因，获得甘蓝型油菜矮化材料；所述甘蓝型油菜矮化材料的编码基因突变体的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。2.根据权利要求1所述的一种利用基因编辑技术创制甘蓝型油菜矮化材料的方法，其特征在于，包括以下具体步骤：(1)甘蓝型油菜BnaA06G0083400WE基因CRISPR/Cas9表达载体的构建：1)sgRNA靶位点的选择：所述sgRNA靶位点是针对甘蓝型油菜westar中BnaA06G0083400WE基因不同拷贝的结构和同源关系，基于CRISPRdirect网站设计，核苷酸序列为：SEQ ID NO.2：5
’‑
agaggtcaaggccatccacaagg
‑3’
；2)引物设计和PCR扩增：所述引物序列如下：SEQ ID NO.3：5
’‑
cagtGGTCTCagtca agaggtcaaggccatccaca
‑3’
；SEQ ID NO.4：5
’‑
cagtGGTCTCaaaac tgtggatggccttgacctct
‑3’
；所述PCR扩增过程如下：按50μL体系的PCR反应，以上下游引物混合，经PCR仪变性退火得到gRNA片段；3)CRISPR/Cas9表达载体的构建与农杆菌转化：利用T4连接酶将步骤2)所得gRNA片段...

【专利技术属性】
技术研发人员：支添添，周舟，
申请(专利权)人：宜春学院，
类型：发明
国别省市：