鼻咽癌相关尿液标志物在制备用于鼻咽癌诊断/预后的产品中的应用制造技术

本发明专利技术属于医学检验技术领域，具体涉及鼻咽癌相关尿液标志物在制备用于鼻咽癌诊断/预后的产品中的应用，所述标志物组由以下标志物中的一种或者几种任意组合：4

【技术实现步骤摘要】
鼻咽癌相关尿液标志物在制备用于鼻咽癌诊断/预后的产品中的应用


[0001]本专利技术属于医学检验
，具体涉及鼻咽癌相关尿液标志物在制备用于鼻咽癌诊断/预后的产品中的应用。

技术介绍

[0002]鼻咽癌的主要发病因素包括遗传易感性，饮食因素和EB病毒(Epstein
‑
Barrvirus,EBV)感染，其发病机制的研究包括基因的突变、代谢组学、蛋白质组学、基因组学等方面。尽管如此，目前仍然难以全面理解鼻咽癌的发生、发展，这给其治疗带来了困难。
[0003]一般来说，鼻咽癌的诊断还是以鼻咽镜检查为主，但是价格贵，而且对人体有伤害；鼻咽癌的进一步确诊依然需要靠组织的病理诊断，但组织的活检具有侵袭性，患者比较痛苦。同时对于隐匿性鼻咽癌或者黏膜下型鼻咽癌有可能需要多次，如此反复的组织活检必然增加患者的经济负担和心理负担，也非常不利于大规模筛查。血浆EBV DNA检测在鼻咽癌早期诊断和筛查，复发和转移诊断，预后判断以及个体化治疗等方面具有较大的价值。据报道，鼻咽癌患者血浆中存在持续阳性的EBV DNA，其拷贝数与肿瘤的分期相关，有效治疗后迅速下降，复发和转移时再次升高。然而EB病毒检测敏感性和特异性均不高。因此，如何寻找到有效的、高效的、特异性、无创性的鼻咽癌肿瘤标志物(Bio
‑
marker)对于提高患者的生存率至关重要。

技术实现思路

[0004]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了鼻咽癌相关尿液标志物在制备用于鼻咽癌诊断/预后的产品中的应用，本专利技术基于代谢组学技术，在尿液中筛选出能较好区分正常人对照和早期鼻咽癌的标志物，能够用于制备鼻咽癌诊断/预后的产品，通过检测尿液样本实现特异性的、迅速的、无创伤性的检测鼻咽癌。
[0005]本专利技术提供了鼻咽癌相关尿液标志物在制备用于鼻咽癌诊断/预后的产品中的应用，所述标志物由以下标志物中的一种或者几种任意组合：
[0006]4‑
imidazoleacetic acid,Deoxyinosine和Ethanolamine。
[0007]进一步地，，所述标志物由以下标志物组成：
[0008]4‑
imidazoleacetic acid和Deoxyinosine。
[0009]进一步地，相对于正常健康人，鼻咽癌患者的尿液中4
‑
imidazoleacetic acid上升，Deoxyinosine下降，和Ethanolamine上升。
[0010]进一步地，所述产品为检测试剂。
[0011]进一步地，所述产品为诊断试剂盒。
[0012]利用上述产品检测鼻咽癌相关尿液标志物组的检测方法，包括以下步骤：
[0013]S1，采集受试者的尿液样本；
[0014]S2，尿液样本采用超高效液相色谱系统HILIC色谱柱进行分离；
[0015]S3，分离后的尿液样本，用质谱仪进行样本一级、二级谱图的采集，获得Wiff格式的原始数据，原始数据经ProteoWizard转换成.mzXML格式，然后采用XCMS软件进行峰对齐、保留时间校正和提取峰面积，得到受试者的尿液样本中4
‑
imidazoleacetic acid,Deoxyinosine和Ethanolamine的定量结果。
[0016]进一步地，S1中，尿液样本加入预冷的体积比为2：2：1的甲醇、乙腈、水溶液中，涡旋混合，低温超声30min，
‑
20℃静置10min，14000g，4℃离心20min，取上清真空干燥，质谱分析时加入100μL乙腈水溶液，乙腈和水的体积比为1:1，复溶，涡旋，14000g，4℃离心15min，待用。
[0017]进一步地，S2中，采用Agilent1290InfinityLC超高效液相色谱系统HILIC色谱柱进行分离；柱温25℃；流速0.5mL/min；进样量2μL；流动相组成A：水+25mM乙酸铵+25mM氨水，B：乙腈；梯度洗脱程序如下：0
‑
0.5min，95％B；0.5
‑
7min，B从95％线性变化至65％；7
‑
8min，B从65％线性变化至40％；8
‑
9min，B维持在40％；9
‑
9.1min，B从40％线性变化至95％；9.1
‑
12min，B维持在95％；整个分析过程中样品置于4℃自动进样器中。
[0018]进一步地，S3中，采用ABTripleTOF6600质谱仪进行样本一级、二级谱图的采集，得到原始Wiff格式的原始数据；样品经用Agilent1290InfinityLC超高效液相色谱系统分离后，用TripleTOF6600质谱仪进行质谱分析，分别采用电喷雾电离正离子和负离子模式进行检测，ESI源设置参数如下：雾化气辅助加热气1：60，辅助加热气2：60，气帘气：30psi，离子源温度：600℃，喷雾电压
±
5500V；一级质荷比检测范围：60
‑
1000Da，二级子离子质荷比检测范围：25
‑
1000Da，一级质谱扫描累积时间：0.20s/spectra,二级质谱扫描累积时间0.05s/spectra；二级质谱采用数据依赖型采集模式获得，并且采用峰强度值筛选模式，去簇电压：
±
60V，碰撞能量：35
±
15eV，IDA设置如下:动态排除同位素离子范围：4Da，每次扫描采集10个碎片图谱。
[0019]与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：
[0020]本专利技术通过研究发现，与正常健康人相比，鼻咽癌患者的尿液中4
‑
imidazoleacetic acid,Deoxyinosine和Ethanolamine的量存在显著变化，ROC分析发现4
‑
imidazoleacetic acid和Deoxyinosine两种代谢物作为标志物组合时效果最优：AUC值为0.935，预测准确度为85％，高于在他们血液中EBV阳性的检出率(63％)，能很好预测鼻咽癌的发病，因此能够将上述尿液标志物用于制备鼻咽癌诊断/预后的产品，为鼻咽癌的早期诊断用提供特异性的、迅速的、无创伤性的检测手段。
附图说明
[0021]图1为本专利技术中基于179种差异代谢物的KEGG富集分析。
[0022]图2为本专利技术中基于SVM预测模型评估尿液标志物组(4
‑
imidazoleacetic acid,Deoxyinosine和Ethanolamine)的ROC分析结果。
具体实施方式
[0023]下面结合附图和具体实施例对本专利技术进行详细说明，但不应理解为本专利技术的限制。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。如无特殊说明，下述实施例中所用的技术手
段为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.鼻咽癌相关尿液标志物在制备用于鼻咽癌诊断/预后的产品中的应用，其特征在于，所述标志物由以下标志物中的一种或者几种任意组合：4
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imidazoleacetic acid,Deoxyinosine和Ethanolamine。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述标志物由以下标志物组成：4
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imidazoleacetic acid和Deoxyinosine。3.根据权利要求1或2任一项所述的鼻咽癌相关尿液标志物...

【专利技术属性】
技术研发人员：饶军，李金高，廖朝晖，卢天柱，钟方炎，
申请(专利权)人：江西省肿瘤医院江西省第二人民医院，江西省癌症中心，
类型：发明
国别省市：