【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及检验医学，尤其涉及肝癌相关尿液标志物在制备用于肝癌诊断/预后的产品中的应用。
技术介绍
1、根据世界卫生组织2020年统计的数据，原发性肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma，hcc)发病率在所有肿瘤的第六位，肿瘤导致的死亡原因第三位，且均呈逐渐上升趋势，其中新发病例约90万例，死亡约83万例。肝癌发病的高危因素包括病毒性肝炎、酒精性肝病、脂肪肝等，在亚洲国家中乙型肝炎病毒是导致原发性肝癌的主要因素。原发性肝癌起病隐匿，诊断时大多已处于局部晚期或已出现远处转移，进展期的5年生存率约为15％，而早期肝癌5年生存率约为75％，因此早期诊断是改善预后的关键。
2、迄今为止，hcc的诊断主要依赖于影像学的诊断和血清中标志物如甲胎蛋白(alpha fetoprotein，afp)、异常凝血酶原(protein inducedbyvitamin k absence orantagonist-ⅱ，pivka-ⅱ)、病毒的拷贝数等的监测。事实上肝癌的影像学早期诊断的灵敏度仅为47％，而hcc特异度的标志物如afp诊断的灵敏度为52.9％，特异度为93.3％，与影像学结合后可进一步提高。约30％的肝癌患者表现为afp阴性。因此，仍亟须新的诊断方法来改善临床肝癌的早期筛查效果。代谢组学(metabonomics)是20世纪90年代中期继基因组学、蛋白质组学、转录组学之后发展起来的一门新兴学科，是对一个生物系统的细胞在特定时间和条件下所有小分子代谢物质的定量分析，与基因组学和蛋白质组学相比，代谢组学与生理学
3、在hcc早期诊断中，血液标本应用较广，然而目前尚无某一种蛋白类或基因类的标志物能对于肝癌早期有明确诊断作用。肝癌的影像学早期诊断的灵敏度仅为47％，而hcc特异度的标志物如afp诊断的灵敏度为52.9％，特异度为93.3％，与影像学结合后可进一步提高。约30％的肝癌患者表现为afp阴性。因此，寻找对原发性肝细胞癌诊断有重要价值的生物标志物就变得至关重要。
技术实现思路
1、本专利技术克服了现有技术中缺乏对原发性肝细胞癌诊断有重要价值的生物标志物的缺陷，具体提供了肝癌相关尿液标志物在制备用于肝癌诊断/预后的产品中的应用。本专利技术基于代谢组学技术，在尿液中筛选出能较好区分早期肝癌(hcc)患者和正常人的标志物，能够通过检测尿液样本实现特异性的、迅速的、无创伤性的检测hcc。
2、本专利技术采用以下技术方案进行。
3、本专利技术的提供了肝癌相关尿液标志物在制备用于肝癌诊断/预后的产品中的应用，标志物由以下标志物中的一种或者几种任意组合：n-(4-氨基丁基)-乙酰胺(n-acetylputrescine)，甲酸氨基谷氨酸(formiminoglutamic acid)，前列腺素e1(pge1)，四氢醛固酮-3-葡萄糖苷酸(tetrahydroaldosterone-3-glucuronide)，2-酮-3-脱氧-d-葡萄糖酸(2-keto-3-deoxygluconic acid)和酮戊二酸(alpha-kg)。
4、进一步地，所述标志物由以下标志物组成：
5、n-(4-氨基丁基)-乙酰胺(n-acetylputrescine)，甲酸氨基谷氨酸(formiminoglutamic acid)，前列腺素e1(pge1)，四氢醛固酮-3-葡萄糖苷酸(tetrahydroaldosterone-3-glucuronide)。
6、进一步地，所述产品为检测受试者尿液中所述标志物含量的试剂。
7、进一步地，所述检测试剂包括色谱法、光谱法、质谱法或化学分析法检测所述标志物含量的试剂。
8、进一步地，所述色谱法为超高效液相色谱法。
9、进一步地，使用超高效液相色谱法进行检测；所述超高效液相色谱法检测所用的流动相包括a相和b相；所述a相为水相，含25mmol/l乙酸铵和25mmol/l氨水；所述b相为乙腈。
10、进一步地，所述产品为检测试剂盒，所述试剂盒包括检测样品中所述标志物含量的试剂。
11、进一步地，所述样品为受试者的尿液。
12、进一步地，相对于正常健康人，肝癌患者的尿液中n-acetylputrescine上升、formiminoglutamic acid上升、pge1上升、tetrahydroaldosterone-3-glucuronide下降、2-keto-3-deoxygluconic acid上升、alpha-kg下降。
13、进一步地，所述检测试剂盒用于评价肝癌治疗方案的有效性。
14、利用上述产品检测肝癌相关尿液标志物组的检测方法，包括以下步骤：
15、s1，采集受试者的尿液样本；
16、s2，尿液样本采用超高效液相色谱系统通过watersacquityuplc beh amide(2.1mm×50mm,1.7μm)液相色谱柱色谱柱进行分离；
17、s3，分离后的尿液样本，用质谱仪进行样本一级、二级谱图的采集，获得wiff格式的原始数据，原始数据经处理后得到受试者的尿液样本中n-acetylputrescine，formiminoglutamic acid，pge1，tetrahydroaldosterone-3-glucuronide，2-keto-3-deoxygluconic acid和alpha-kg的定量结果。
18、进一步地，s1中，测定样品渗透压结果，根据下方公式计算需要的样本的体积，之后加水至100μl，加入400μl提取液(甲醇：乙腈＝1：1(v/v))；涡旋混匀30s，超声10min(冰水浴)；-40℃静置1h；将样品4℃，12000rpm(离心力13800(×g)，半径8.6cm)离心15min；取上清于进样瓶中上机检测；所有样品另取等量上清混合成qc样品上机检测；
19、
20、进一步地，s2中，采用vanquish(thermo fisher scientific)超高效液相色谱系统waters acquity uplc behamide(2.1mm×50mm,1.7μm)色谱柱进行分离；液相色谱a相为水相，含25mmol/l乙酸铵和25mmol/l氨水，b相为乙腈。样品盘温度：4℃，进样体积：2μl。
21、进一步地，s3中，采用orbitrap exploris 120质谱仪在控制软件(xcalibur,版本：4.4，thermo)控制下进行一级、二级质谱数据采集，得到原始wiff格式的原始数据。详细参数如下：鞘气流速(sheath gas flow rate):50arb,辅助气体流量(aux gas flowrat本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.肝癌相关尿液标志物在制备用于肝癌诊断/预后的产品中的应用，其特征在于，标志物由以下标志物中的一种或者几种任意组合：N-Acetylputrescine，Formiminoglutamicacid，PGE1，Tetrahydroaldosterone-3-glucuronide，2-Keto-3-deoxygluconic acid和alpha-KG。
2.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述标志物由以下标志物组成：
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品为检测受试者尿液中所述标志物含量的试剂。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述检测试剂包括色谱法、光谱法、质谱法或化学分析法检测所述标志物含量的试剂。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述色谱法为超高效液相色谱法。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述超高效液相色谱法检测所用的流动相包括A相和B相；所述A相为水相，含25mmol/L乙酸铵和25mmol/L氨水；所述B相为乙腈。
7.根据权利要求1所述的应用，其特征在
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述样品为受试者的尿液。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，相对于正常健康人，肝癌患者的尿液中N-Acetylputrescine上升、Formiminoglutamic acid上升、PGE1上升、Tetrahydroaldosterone-3-glucuronide下降、2-Keto-3-deoxygluconic acid上升、alpha-KG下降。
10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述检测试剂盒用于评价肝癌治疗方案的有效性。
...【技术特征摘要】
1.肝癌相关尿液标志物在制备用于肝癌诊断/预后的产品中的应用，其特征在于，标志物由以下标志物中的一种或者几种任意组合：n-acetylputrescine，formiminoglutamicacid，pge1，tetrahydroaldosterone-3-glucuronide，2-keto-3-deoxygluconic acid和alpha-kg。
2.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述标志物由以下标志物组成：
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品为检测受试者尿液中所述标志物含量的试剂。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述检测试剂包括色谱法、光谱法、质谱法或化学分析法检测所述标志物含量的试剂。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述色谱法为超高效液相色谱法。
6.如权利要求5所述的应用，其特...
【专利技术属性】
技术研发人员：张慧卿，饶军，万祥辉，张建龙，罗明明，熊爱华，
申请(专利权)人：江西省肿瘤医院江西省第二人民医院，江西省癌症中心，
类型：发明
国别省市：
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