鲟鱼功能性多肽及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体涉及鲟鱼功能性多肽及其应用。本发明专利技术提供的功能性多肽为以下1)或2)中所述的多肽：1)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽；2)在氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽的N端和/或C端添加蛋白标签得到的多肽。该功能性多肽具有较高的抗肿瘤、抗炎、促进骨细胞增殖、分化活性，可用于具有上述功能的药物的制备，具有制备过程简单、得率高的优势，应用价值较好，且有利于实现鲟鱼软骨的高值化利用，提高鲟鱼原料的利用率。提高鲟鱼原料的利用率。

【技术实现步骤摘要】
鲟鱼功能性多肽及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及从鲟鱼软骨中提取的功能性多肽及其应用。

技术介绍

[0002]氨基酸(Amino acid)是构成蛋白质的基本单位，赋予蛋白质特定的分子结构形态，使其具有特定的生理生化活性，氨基酸和蛋白质在体内具有特殊的生理功能，是生物体内不可缺少的营养成分之一。多肽是一类由多种氨基酸组成的具有特殊生理功能的活性物质。功能性多肽是具有特定生物活性多肽，具有易于吸收、易于加工、低致敏性、低渗透压等特点，在食品、医药、化妆品等领域具有重要的应用价值。以动物加工副产品为原料开发功能性多肽对于提高动物原料的利用率和促进人类健康具有重要的意义。

技术实现思路

[0003]本专利技术的第一目的在于提供从鲟鱼软骨中提取的功能性多肽。
[0004]本专利技术的第二目的在于提供上述功能性多肽的应用。
[0005]本专利技术的第三目的在于提供含有上述功能性多肽的产品。
[0006]具体地，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]第一方面，本专利技术提供功能性多肽，所述多肽为以下1)或2)中所述的多肽：
[0008]1)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽；
[0009]2)在氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽的N端和/或C端添加蛋白标签得到的多肽。
[0010]以上所述的SEQ ID NO.1所示的序列具体如下：
[0011]SEQ ID NO.1：LNGTDPEDVIR。
[0012]以上所述的蛋白标签可为任意的蛋白标签，包括但不限于His、Flag、GST、c
‑
Myc、eGFP/eCFP/eYFP/mCherryeGFP、HA、SUMO标签等。所述多肽的N端和C端携带的蛋白标签可以相同也可以不同。
[0013]本专利技术经实验验证证明，以上所述的功能性多肽具有较高的抗肿瘤、抗炎和促进骨细胞增殖、分化的活性。
[0014]上述功能性多肽可为从鲟鱼软骨中分离得到的纯天然小分子活性肽。
[0015]第二方面，本专利技术提供编码所述功能性多肽的核酸分子。
[0016]第三方面，本专利技术提供包含所述核酸分子的生物材料，所述生物材料为表达盒、载体或宿主细胞。
[0017]其中，所述表达盒为将所述核酸分子与转录或翻译调控元件可操作性地连接得到的重组核酸分子。
[0018]所述载体包括但不限于质粒载体、病毒载体、转座子。
[0019]所述宿主细胞包括微生物细胞(例如：大肠杆菌、酵母等)或动物细胞或细胞系。
[0020]第四方面，本专利技术提供以上所述的功能性多肽或所述核酸分子或所述生物材料在
制备食品或药物中的应用。
[0021]在本专利技术的一些实施方式中，所述药物具有抗肿瘤、抗炎和/或促进骨细胞增殖、分化功能。
[0022]本专利技术还提供所述功能性多肽或所述核酸分子或所述生物材料在制备具有抗肿瘤功能的产品中的应用。
[0023]本专利技术还提供所述功能性多肽或所述核酸分子或所述生物材料在制备具有抗炎功能的产品中的应用。
[0024]本专利技术还提供所述功能性多肽或所述核酸分子或所述生物材料在制备具有促进骨细胞增殖、分化功能的产品中的应用。
[0025]以上所述的产品优选为药物。
[0026]本专利技术还提供所述功能性多肽或所述核酸分子或所述生物材料在非治疗目的的促进骨细胞增殖、分化中的应用。
[0027]第五方面，本专利技术提供一种产品，所述产品含有所述功能性多肽。
[0028]优选地，所述产品为具有抗肿瘤功能、抗炎功能和/或促进骨细胞增殖、分化功能的药物。
[0029]以上所述的药物优选以所述功能性多肽作为活性成分。
[0030]除所述功能性多肽以外，所述药物还可包含其他活性成分，或者包含药学领域允许的辅料。
[0031]第六方面，本专利技术提供一种鲟鱼软骨肽，所述鲟鱼软骨肽采用包括以下步骤的方法制备得到：将鲟鱼软骨经两步酶解制得酶解物，将所述酶解物进行功能性多肽的分离和纯化；
[0032]所述两步酶解中，第一步酶解使用碱性蛋白酶，第二步酶解使用软骨素裂解酶；
[0033]所述鲟鱼软骨肽含有功能性多肽，所述功能性多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0034]优选地，所述鲟鱼软骨肽中，所述功能性多肽的质量百分含量为9
‑
12％。
[0035]进一步优选地，所述鲟鱼软骨肽中，所述功能性多肽的质量百分含量为9
‑
10％。
[0036]上述分离纯化包括凝胶层析色谱分离和反相高效液相色谱分离。
[0037]优选地，所述鲟鱼软骨肽的制备方法包括：将鲟鱼软骨粉碎后，以水混合，调至pH为6.9
‑
7.2，与碱性蛋白酶混合后酶解处理3.5
‑
4.5h，经灭酶处理后，再与软骨素裂解酶混合，酶解处理2.5
‑
3.5h后，进行灭酶处理，经固液分离取上清液进行乙醇沉淀处理，经固液分离取上清液后，对乙醇沉淀分离的上清液进行凝胶层析色谱分离；将经凝胶层析分离收集的组分进行反相高效液相色谱(RP
‑
HPLC)分离。
[0038]上述方法中，反相高效液相色谱的色谱条件如下：
[0039]流动相A：超纯水(含0.1％三氟乙酸)；
[0040]流动相B：乙腈(含0.1％三氟乙酸)；
[0041]进样量：50μL；
[0042]样品浓度：5mg/mL；
[0043]检测波长：280nm；
[0044]洗脱程序：0
‑
5min，流动相B为0％；5
‑
10min，流动相B从0％到20％；10
‑
45min流动
相B从20％到45％；45
‑
65min流动相B从45％回到20％；利用自动馏分收集器收集28.5
‑
29.5min(优选28.98min)的馏分。
[0045]上述收集的馏分还可经浓缩后进行冷冻干燥制成冻干产品。
[0046]上述方法中，碱性蛋白酶的用量优选为100
‑
200IU/g鲟鱼软骨，和/或，软骨素裂解酶的用量优选为150
‑
250IU/g鲟鱼软骨。
[0047]上述方法中，固液分离优选采用离心分离。
[0048]上述方法中，乙醇沉淀的条件为于2
‑
4℃沉淀，时间优选为8
‑
15h。
[0049]本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供的功能性多肽具有较高的抗肿瘤、抗炎、促进骨细胞增殖、分化活性，可用于具有上述功能的药物的制备，具有制备过程简单、得率高的优势，具有较好的应用价值，且有利于实现鲟鱼软骨的高值化利用，提高鲟鱼原料的利用率。
附图说明
[0050]为了更清楚地说明本专利技术或现有技术中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.功能性多肽，其特征在于，所述多肽为以下1)或2)中所述的多肽：1)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽；2)在氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽的N端和/或C端添加蛋白标签得到的多肽。2.核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1所述的功能性多肽。3.生物材料，其特征在于，所述生物材料包含权利要求2所述的核酸分子；所述生物材料为表达盒、载体或宿主细胞。4.权利要求1所述的功能性多肽或权利要求2所述的核酸分子或权利要求3所述的生物材料在制备食品或药物中的应用。5.权利要求1所述的功能性多肽或权利要求2所述的核酸分子或权利要求3所述的生物材料在制备具有抗肿瘤功能的产品中的应用。6.权利要求1所述的功能性多肽或权利要求2所述的核酸分子或权利要求3所述的生物材料在制备具有抗炎功能的产品中的应用。7...

【专利技术属性】
技术研发人员：尚楠，武瑞赟，李平兰，穆文强，高博雅，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：