一种高纯度维拉卡肽的纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种高纯度维拉卡肽的纯化方法，涉及生物分子分离纯化技术领域；本发明专利技术提供了一种维拉卡肽的纯化制备方法，本发明专利技术的离子交换色谱法纯化可以除去合成过程中的残留溶剂和大部分杂质；纳滤浓缩过程可以控制样品的氯离子含量，提高最终产品的有效成分含量。本发明专利技术提供的纯化方法得到的是维拉卡肽的盐酸盐，利于纯化制备；且所得维拉卡肽含量高、纯度高、收率高。收率高。收率高。

【技术实现步骤摘要】
一种高纯度维拉卡肽的纯化方法


[0001]本专利技术涉及生物分子分离纯化
，具体涉及一种高纯度维拉卡肽的纯化方法。

技术介绍

[0002]维拉卡肽是由AMGEN INC开发的一种新颖的拟钙剂，主要用于慢性肾病成人患者做血液透析治疗的继发性甲状旁腺功能亢进的多肽药物。2017年2月07日在美国上市，商品名为Parsabiv。其一般制成盐酸盐。其序列结构如下所示：。
[0003]在通过有机合成方法构建二硫键后，会有一定的副产物产生，以及原料及中间体残留，产品纯度较低，需要进行纯化。专利CN106928320A中采用C
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填料、TFA/水
‑
乙腈作为流动相进行纯化，最终产物为TFA盐，其收率仅有52%；专利CN110054662A，中先采用TFA/水
‑
乙腈进行纯化，再用HAc/水
‑
乙腈体系进行二纯，还需要加入盐酸进行冻干，其操作步骤繁琐，且终产物中仍含有乙酸根离子；专利WO2021IN00006介绍了多种纯化方法，但是需要用到大量有机溶剂，成本较高，不利于规模化生产，有些方法使用了高氯酸盐，不利于安全生产。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种纯度高、收率高与肽含量高的维拉卡肽的纯化制备方法。
[0005]本专利技术为实现上述目的所采取的技术方案为：本专利技术提供了一种高纯度维拉卡肽的纯化方法，包括以下步骤：提供维拉卡肽粗品，将维拉卡肽粗品溶解，得到维拉卡肽粗品溶液；将维拉卡肽粗品溶液采用离子色谱分离纯化法进行纯化，得到维拉卡肽纯品溶液；将维拉卡肽纯品溶液采用纳滤的方法进行脱盐浓缩并进行冷冻干燥，得到维拉卡肽的成品；维拉卡肽粗品溶液的浓度为1~100mg/mL。
[0006]本专利技术采用离子交换色谱法纯化可以除去合成过程中的残留溶剂（包括三氟乙酸、乙二硫醇、甲基叔丁基醚等）、残留保护基和大部分杂质；纳滤浓缩过程可以控制样品的氯离子含量，提高最终产品的有效成分含量；且本专利技术提供的纯化方法得到的是维拉卡肽的盐酸盐，利于纯化制备；所得维拉卡肽含量高、纯度高、收率高。
[0007]进一步地，在本专利技术的一些实施方式中，离子色谱分离纯化法的参数包括：样品浓度为10~100mg/mL；色谱柱填料：阳离子色谱；流动A相：磷酸二氢钠水溶液，磷酸二氢钠水溶液的浓度为1~10mmol/L，用磷酸调节pH，范围为2~5；流动B相：氯化钠水溶液，氯化钠水溶液的浓度为0.1~2mol/L，用盐酸调节pH，范围为2~5；线流速：50~300cm/h；梯度洗脱程序为：0~60min：n1vol%
→
m1vol%流动B相；n1为0~20，m1为30~100；检测波长：200~250nm。
[0008]进一步地，在本专利技术的一些实施方式中，维拉卡肽粗品溶解所用溶剂为流动相A。
[0009]进一步地，在本专利技术的一些实施方式中，离子色谱分离法纯化维拉卡肽后得到第一纯化维拉卡肽；将第一纯化维拉卡肽配制成维拉卡肽盐溶液进行纳滤浓缩。
[0010]进一步地，在本专利技术的一些实施方式中，离子色谱分离纯化法中离子色谱柱的有效长度≥150 mm；直径为10~200 mm。
[0011]更进一步地，在本专利技术的一些实施方式中，离子色谱柱中离子色谱柱填料为阳离子交换树脂；填料粒径为30~80μm；填料孔径为1000A。
[0012]更进一步地，在本专利技术的一些实施方式中，检测器应为紫外检测器，检测波长为200~250 nm。
[0013]进一步地，在本专利技术的一些实施方式中，离子色谱分离纯化法中的梯度洗脱程序为：0~60min：5vol%
→
55vol%第一流动B相。
[0014]进一步地，在本专利技术的一些实施方式中，离子色谱分离纯化法中的梯度洗脱程序为：0~60min：10vol%
→
60vol%第一流动B相。
[0015]进一步地，在本专利技术的一些实施方式中，离子色谱分离纯化法中的梯度洗脱程序为：0~60min：10vol%
→
50vol%第一流动B相。
[0016]进一步地，在本专利技术的一些实施方式中，离子色谱分离纯化法中的梯度洗脱程序为：0~60min：0vol%
→
100vol%第一流动B相。
[0017]进一步地，在本专利技术的一些实施方式中，采用纳滤的方法进行脱盐浓缩的参数包括：单次纳滤浓缩的体积比在1~10倍；单次纳滤后应加入5~10倍浓缩液体积的去离子水；反复纳滤浓缩稀释3次以上。
[0018]进一步地，在本专利技术的一些实施方式中，冷冻干燥参数包括：冷冻干燥的预冻温度在
‑
20~
‑
40℃；冷冻干燥过程中真空度低于100pa；冷冻干燥一次升华干燥温度在
‑
20~0℃；冷冻干燥的解析干燥温度在10~40℃；冷冻干燥的冻干时间在24~72小时。
[0019]进一步地，在本专利技术的一些实施方式中，本专利技术中维拉卡肽粗品采用离子色谱分离纯化法纯化后，还包括将所得离子交换色谱纯化馏分进行纳滤浓缩并冷冻干燥，得到维拉卡肽纯品。
[0020]进一步地，在本专利技术的一些实施方式中，维拉卡肽的收率高于60%，且肽含量高于78%。
[0021]进一步地，在本专利技术的一些实施方式中，维拉卡肽的纯度高于99.25%。
[0022]进一步地，在本专利技术的一些实施方式中，维拉卡肽纯品的纯度为99.28~99.52%。
[0023]更进一步地，在本专利技术的一些实施方式中，维拉卡肽纯品的纯度高于99.8%。
[0024]进一步地，在本专利技术的一些实施方式中，维拉卡肽纯品的收率为62.5~70.1%，纯度为99.28~99.52%，肽含量在79.18~85.31%。
[0025]本专利技术的离子交换色谱法纯化可以除去合成过程中的残留溶剂（包括三氟乙酸、乙二硫醇、甲基叔丁基醚等）、残留保护基和大部分杂质；纳滤浓缩过程可以控制样品的氯离子含量，提高最终产品的有效成分含量；且本专利技术提供的纯化方法得到的是维拉卡肽的盐酸盐，利于纯化制备；所得维拉卡肽含量高、纯度高、收率高。因此，本专利技术是一种纯度高、收率高与肽含量高的维拉卡肽的纯化制备方法。
附图说明
[0026]图1为维拉卡肽纯化后的高效液相色谱图。
具体实施方式
[0027]现在通过优选的实施方案和实施例更详细地描述本专利技术，然而，这些实施方案和实施例仅用于示例目的，而不应理解为以任何方式限定本专利技术的范围。以下提供的实施例可作为本
普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本专利技术的限制。本专利技术的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均优选为市售产品。
[0028]需要说明的是，本专利技术使用的术语“流动相”是指引入色谱柱的溶剂。
[0029]需要说明的是，本专利技术所用维拉卡肽粗品优选采专利CN1145248本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高纯度维拉卡肽的纯化方法，包括以下步骤：提供维拉卡肽粗品，将所述维拉卡肽粗品溶解，得到维拉卡肽粗品溶液；将所述维拉卡肽粗品溶液采用离子色谱分离纯化法进行纯化，得到维拉卡肽纯品溶液；将所述维拉卡肽纯品溶液采用纳滤的方法进行脱盐浓缩并进行冷冻干燥，得到维拉卡肽的成品；所述维拉卡肽粗品溶液的浓度为1~100mg/mL。2.根据权利要求1所述的一种高纯度维拉卡肽的纯化方法，其特征在于：所述离子色谱分离纯化法的参数包括：样品浓度为10~100mg/mL；色谱柱填料：阳离子交换树脂；流动A相：磷酸二氢钠水溶液，所述磷酸二氢钠水溶液的浓度为1~10mmol/L，用磷酸调节pH，范围为2~5；流动B相：氯化钠水溶液，所述氯化钠水溶液的浓度为0.1~2mol/L，用盐酸调节pH，范围为2~5；线流速：50~300cm/h；梯度洗脱程序为：0~60min：n1vol%
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m1vol%流动B相；n1为0~20，m1为30~100；检测波长：200~250nm。3.根据权利要求2所述的一种高纯度维拉卡肽的纯化方法，其特征在于：所述维拉卡肽粗品溶解所用溶剂为流动相A。4.根据权利要求2所述的一种高纯度维拉卡肽的纯化方法，其特征在于：所述离子色谱分离法纯化维拉卡肽后得到第一纯化维拉卡肽；将所述第一纯化维拉卡肽配制成维拉卡肽盐溶液进行纳滤浓缩。5. 根据权利要求2所述的一种高纯度维拉卡肽的纯化方法，其特征在于：所述离子...

【专利技术属性】
技术研发人员：纪东亮，罗瑞昌，李雪豪，
申请(专利权)人：杭州信海医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：