美白短肽及其制备方法技术

本发明专利技术属于基因工程技术领域，具体涉及美白短肽及其制备方法。本发明专利技术提供了一种肽，其氨基酸序列包含如SEQ ID No.1所示的序列。本发明专利技术还提供了所述肽的编码多核苷酸、包含该多核苷酸的重组表达载体、包含该重组表达载体的重组宿主细胞、所述肽的制备方法和用途以及包含所述肽的具有美白、抑制黑色素母细胞或抑制黑色素生成的功能的产品。本发明专利技术提供的肽与MSH

【技术实现步骤摘要】
美白短肽及其制备方法
[0001]优先权和相关申请
[0002]本申请要求于2022年6月15日提交中国专利局、申请号为202210678931.1、专利技术名称为“美白短肽及其制备方法”的中国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。


[0003]本专利技术属于基因工程
，具体涉及美白短肽及其制备方法。

技术介绍

[0004]皮肤美白是许多亚洲女性的执着追求，更有“一白遮百丑”的传统美学观念。从科学的角度而言，皮肤的颜色主要是由于皮肤中的色素含量决定的，最主要就是黑色素的含量。皮肤中黑色素的含量可以很大程度上决定皮肤颜色的深浅。黑色素是一种蛋白质，存在于每个人的皮肤、毛发、视网膜、软脑膜等组织中。黑色素的颗粒不全都是纯黑色的，也有黄棕色、红棕色、棕褐色、深棕色等等。他们共同起作用，决定了人类皮肤和毛发的不同颜色。
[0005]黑色素是由黑色素母细胞分泌而产生的。黑色素母细胞属于腺细胞，有很强的分泌能力，其主要分布于人的表皮基层细胞间。黑色素是一种生物色素，是酪氨酸或3,4
‑
二羟苯丙氨酸(又称为多巴，DOPA)经过一连串化学反应所形成，动物、植物与原生生物都有这种相同色素。黑色素通常以聚合的方式存在。黑色素生成的越多，皮肤就越黑。所以只要让黑色素母细胞少生成黑色素，人体皮肤就可以变白。通常有两种思路来减少黑色素的生成，一种思路是降低黑色素母细胞内的酪氨酸酶的生物学活性，第二种思路是通过控制外源刺激信号来抑制黑色素母细胞的活性。
[0006]人体内各种细胞的活性普遍都受到了细胞因子的调节，黑色素母细胞也不例外。MSH全称为黑色素细胞刺激素(melanocyte
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stimulating hormone)，或者促黑激素，是人体中非常重要的激素，是由垂体产生的多肽激素。MSH的功能很强大，即能刺激在头发和皮肤中的黑色素细胞产生黑色素，使皮肤变黑；又能游离脂肪组织的脂肪酸，改善人的视觉滞留，改变神经应激性，提高智力迟钝者的注意力和记忆力。黑色素母细胞表面表达一种黑素皮质素受体，叫做MSH
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R，属于GPCR家族成员。MSH
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R是MSH信号分子的受体。MSH激素从垂体分泌之后，结合到黑色素母细胞上的MSH
‑
R受体上，开启信号通路，激活下游的黑色素的生成。只要能够干扰到MSH和MSH
‑
R的相互作用，就可以阻断这个信号通路的激活，就可以抑制皮肤黑色素的生成。
[0007]目前人类还没有解析得到MSH蛋白结合MSH
‑
R受体的晶体结构，因此二者结合的具体方式尚不明确。但是，人们仍然可以通过设计MSH的序列类似物，来达到阻止MSH结合MSH
‑
R的目的。人体中有α与β两种MSH，其中MSH
‑
α的氨基酸序列为SYSMEHFRWGKPV，以往人们设计了许多类似多肽来模仿这个信号分子的生物学功能，通过结合MSH
‑
R受体来阻止人体自身的MSH信号分子发挥激活作用。比如Nonapeptide
‑
1，又称为melanostatine
‑
5，就是一种MSH
‑
α的类似物，已被证实具有美白的功能。其氨基酸序列和MSH
‑
α的氨基酸序列极为相似。
但是，melanostatine
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5的序列里面含有2个D型的氨基酸，不易通过生物发酵的方法进行制备，因此，其制备方法还都是局限于化学合成，其高额的成本限制了这类产品的广泛使用。
[0008]因此，开发一种能够通过生物合成的较低成本的美白肽是本领域亟待解决的问题。

技术实现思路

[0009]专利技术要解决的问题
[0010]目前，MSH
‑
α类似多肽的制备方法局限于化学合成，高额的制造成本阻碍了此类产品的广泛应用。对此，本专利技术拟提供一种美白短肽及其制备方法，在保证肽的氨基酸序列与MSH
‑
α相似的基础上，利用生物合成实现大规模制备，以便大规模应用。
[0011]用于解决问题的方案
[0012]本专利技术的第一方面提供了一种肽，其中，所述肽的氨基酸序列包含如下(i)
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(iii)中的任一项：
[0013](i)如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列；
[0014](ii)在如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列中添加、取代、缺失或修饰1个或多个氨基酸残基并且保留如SEQ ID No.1所示序列的美白或抑制黑色素母细胞或抑制黑色素生成的活性的氨基酸序列；
[0015](iii)由核苷酸序列编码的氨基酸序列，所述核苷酸序列与编码如SEQ ID No.1所示序列的多核苷酸序列在严格条件下杂交，并且所述氨基酸序列保留如SEQ ID No.1所示序列的美白或抑制黑色素母细胞或抑制黑色素生成的活性，所述严格条件是中等严格条件，中
‑
高严格条件，高严格条件或非常高严格条件。
[0016]本专利技术的第二方面提供了一种多核苷酸，其中，所述多核苷酸编码根据本专利技术第一方面所述的肽。
[0017]进一步的，所述多核苷酸的序列包含如SEQ ID No.2所示的序列。
[0018]本专利技术的第三方面提供了一种重组表达载体，其种，所述重组表达载体包含根据本专利技术第二方面所述的多核苷酸的n个重复，n为大于等于1的整数，当n为大于等于2的整数时，各重复多核苷酸之间直接连接；
[0019]优选的，n为2；
[0020]优选的，所述重组表达载体包括pET系列载体、穿梭载体、噬菌体或病毒载体；
[0021]更优选的，所述重组表达载体为pET
‑
32a。
[0022]进一步的，所述重组表达载体还包含编码能够被TEV蛋白酶切除的氨基酸序列的多核苷酸；
[0023]优选的，所述编码能够被TEV蛋白酶切除的氨基酸序列的多核苷酸的3
’
端与首个所述重复多核苷酸的5
’
端直接连接。
[0024]本专利技术的第四方面提供了一种重组宿主细胞，其中，所述重组宿主细胞包含根据本专利技术第三方面所述的重组表达载体；
[0025]优选的，所述重组宿主细胞为原核细胞、酵母或真核细胞；
[0026]更优选的，所述重组宿主细胞为大肠杆菌BL21(DE3)。
[0027]本专利技术的第五方面提供了根据本专利技术第一方面所述的肽的制备方法，其中，所述
方法包括如下S1～S2所示的步骤：
[0028]S1：发酵培养根据权利要求6所述的重组宿主细胞，诱导肽的表达；
[0029]S2：收集并纯化所述肽。
[0030]进一步的，在步骤S2中包括使用Ni亲和层析柱和/或离子交换层析柱纯化所述肽，以及任选的包括对所述肽进行酶切；
[0031]优选用TEV蛋白酶酶切所述肽。
[0032]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肽，其特征在于，所述肽的氨基酸序列包含如下(i)
‑
(iii)中的任一项：(i)如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列；(ii)在如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列中添加、取代、缺失或修饰1个或多个氨基酸残基并且保留如SEQ ID No.1所示序列的美白或抑制黑色素母细胞或抑制黑色素生成的活性的氨基酸序列；(iii)由核苷酸序列编码的氨基酸序列，所述核苷酸序列与编码如SEQ ID No.1所示序列的多核苷酸序列在严格条件下杂交，并且所述氨基酸序列保留如SEQ ID No.1所示序列的美白或抑制黑色素母细胞或抑制黑色素生成的活性，所述严格条件是中等严格条件，中
‑
高严格条件，高严格条件或非常高严格条件。2.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码根据权利要求1所述的肽。3.根据权利要求2所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列包含如SEQ ID No.2所示的序列。4.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包含根据权利要求2或3所述的多核苷酸的n个重复，n为大于等于1的整数，当n为大于等于2的整数时，各重复多核苷酸之间直接连接；优选的，n为2；优选的，所述重组表达载体包括pET系列载体、穿梭载体、噬菌体或病毒载体；更优选的，所述重组表达载体为pET
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【专利技术属性】
技术研发人员：杨霞，兰小宾，王玲玲，
申请(专利权)人：山西锦波生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：