一种用于宫颈癌PAX1-SOX1-SFRP1基因甲基化检测的引物探针组合及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于宫颈癌PAX1

【技术实现步骤摘要】
一种用于宫颈癌PAX1
‑
SOX1
‑
SFRP1基因甲基化检测的引物探针组合及其应用


[0001]本专利技术属于医学分子生物学领域，尤其涉及一种用于宫颈癌PAX1
‑
SOX1
‑
SFRP1基因甲基化检测的引物探针组合及其应用。

技术介绍

[0002]DNA甲基化异常是肿瘤发生发展过程中的标志性事件之一。在宫颈癌患者中，在宫颈癌患者中，PAX1基因的启动子区域的胞嘧啶会发生甲基化，而正常人中不发生甲化。PAX1是一个宫颈癌的抑癌基因，PAX1启动子的甲基化，导致抑癌功能丧失，癌细胞恶性增殖，可作为宫颈癌早期诊断的生物标志物。细胞中PAX1基因发生的甲基化可以通过DNA的特异扩增而被检测到。在针对多名宫颈癌病人经阴道镜确诊的宫颈癌病例和阴性对照的研究报道中，都表明可以在宫颈癌病人的样本中通过检测PAX1基因的甲基化而查到癌细胞的DNA。本试剂盒对宫颈癌的早期诊断提供参考，使病人多了一种非创性宫颈癌诊断方法的选择。
[0003]宫颈癌的常规筛查方法包括高危型HPV检测和液基细胞学检查，一旦发现阳性，下一步进行宫颈活检和病理切片染色检查。但是，在大量高危型HPV阳性的情况下，宫颈并无癌变或有意义的病理变化，不适宜于下一步的病理活检，否则会造成过度检查，造成受试者痛苦及医疗资源浪费。液基细胞学染色检查，也受限于检查的复杂性，需要专业病理医生看片，受病理医生的资源和精力限制。
[0004]因此在宫颈癌筛查过程中，怎样避免不必要的病理活检成为人们亟待解决的问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术的主要目的在于提供一种用于宫颈癌PAX1
‑
SOX1
‑
SFRP1基因甲基化检测的引物探针组合及其应用，以克服现有技术中的不足。
[0006]为实现前述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案包括：本专利技术实施例的第一方面，提供一种用于宫颈癌PAX1
‑
SOX1
‑
SFRP1基因甲基化检测的引物探针组合，包括检测PAX1基因、SOX1基因和SFRP1基因甲基化的引物对和探针；其中，检测所述PAX1基因的引物对序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，检测所述PAX1基因的探针序列如SEQ ID NO.3所示；检测所述SOX1基因的引物对序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示，检测所述SOX1基因的探针序列如SEQ ID NO.6所示；检测所述SFRP1基因的引物对序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示，检测所述SFRP1基因的探针序列如SEQ ID NO.9所示。
[0007]本专利技术实施例的第二方面，提供一种上述用于宫颈癌PAX1
‑
SOX1
‑
SFRP1基因甲基化检测的引物探针组合在制备检测宫颈癌相关基因甲基化产品中的应用。所述检测宫颈癌相关基因甲基化产品包括检测宫颈癌相关基因甲基化的试剂盒。
[0008]本专利技术实施例的第三方面，提供一种包括上述用于宫颈癌PAX1
‑
SOX1
‑
SFRP1基因甲基化检测的引物探针组合的试剂盒，还包括PCR预混液和Tag DNA聚合酶扩增体系。
[0009]本专利技术实施例的第四方面，提供一种宫颈癌PAX1
‑
SOX1
‑
SFRP1基因甲基化检测方法，包括：S1、收集宫颈脱落细胞，提取其中的游离PAX1
‑
SOX1
‑
SFRP1癌基因片段，备用；S2、将提取的游离PAX1
‑
SOX1
‑
SFRP1癌基因片段进行亚硫酸盐转化，设计包含上述引物探针组合的荧光PCR反应体系，利用所述荧光PCR反应体系对亚硫酸盐转化后的游离PAX1
‑
SOX1
‑
SFRP1癌基因片段进行基因扩增；S3、对步骤S2获取的基因扩增结果CT值与临界值进行比较分析，当CT值小于或等于临界值时为阳性，表明收集的宫颈脱落细胞中含有甲基化的PAX1基因、SOX1基因、SFRP1基因中的至少一种。
[0010]进一步的，所述引物探针组合包括分别检测PAX1基因、SOX1基因和SFRP1基因甲基化的引物对和探针。
[0011]进一步的，所述步骤S1包括采集宫颈脱落细胞保存液，之后采用商用核酸提取试剂盒提取和纯化，获得所述游离PAX1
‑
SOX1
‑
SFRP1癌基因片段。
[0012]进一步的，所述步骤S1包括使用宫颈刷在宫颈口收取宫颈脱落细胞。
[0013]进一步的，步骤S1中提取的游离PAX1
‑
SOX1
‑
SFRP1癌基因片段保存温度为15
‑
25℃。
[0014]进一步的，当PAX1基因CT值≤32时，PAX1基因甲基化阳性；当SOX1基因CT值≤32时，SOX1基因甲基化阳性；当SFRP1基因CT值≤32时，SFRP1基因甲基化阳性。
[0015]本专利技术实施例的第五方面，提供一种上述用于宫颈癌PAX1
‑
SOX1
‑
SFRP1基因甲基化检测的引物探针组合应用于非诊断用途，例如在检测宫颈癌相关基因甲基化科研中的应用。
[0016]与现有技术相比，本专利技术的优点包括：本专利技术设计合成了一种用于宫颈癌PAX1
‑
SOX1
‑
SFRP1基因甲基化检测的引物探针组合及其应用，本专利技术的引物探针组合采用PAX1
‑
SOX1
‑
SFRP1基因甲基化检测，在取得受试者宫颈脱落细胞后，首先进行高危型HPV检测，如果结果为阳性，先不做病理活检，而是做本专利技术的PAX1
‑
SOX1
‑
SFRP1基因甲基化检测，高危型HPV检测为阴性，不做病理活检，继续观察随访；如果采用本专利技术引物探针组合进行的PAX1
‑
SOX1
‑
SFRP1基因甲基化检测结果为阳性，宫颈癌的风险极大，需要尽快做病理活检确诊。可见，采用本专利技术的引物探针组合在宫颈癌筛查过程中，能够避免不必要的病理活检，既降低了费用，也避免了患者的痛苦和医疗资源浪费。
具体实施方式
[0017]下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。以下提供的实施例可作为本
普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本专利技术的限制。
[0018]下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊
说明，均可从商业途径得到。
[0019]本专利技术实施例的一个方面提供了一种用于宫颈癌PA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于宫颈癌PAX1
‑
SOX1
‑
SFRP1基因甲基化检测的引物探针组合，其特征在于：包括检测PAX1基因、SOX1基因和SFRP1基因甲基化的引物对和探针；其中，检测所述PAX1基因的引物对序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，检测所述PAX1基因的探针序列如SEQ ID NO.3所示；检测所述SOX1基因的引物对序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示，检测所述SOX1基因的探针序列如SEQ ID NO.6所示；检测所述SFRP1基因的引物对序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示，检测所述SFRP1基因的探针序列如SEQ ID NO.9所示。2.一种如权利要求1所述用于宫颈癌PAX1
‑
SOX1
‑
SFRP1基因甲基化检测的引物探针组合在制备检测宫颈癌相关基因甲基化产品中的应用。3. 一种包括权利要求1所述用于宫颈癌PAX1
‑
SOX1
‑
SFRP1基因甲基化检测的引物探针组合的试剂盒，其特征在于：还包括PCR预混液和Tag DNA聚合酶扩增体系。4.一种宫颈癌PAX1
‑
SOX1
‑
SFRP1基因甲基化检测方法，其特征在于，包括：S1、收集宫颈脱落细胞，提取其中的游离PAX1
‑
SOX1
‑
SFRP1癌基因片段，备用；S2、将提取的游离PAX1
‑
SOX1
‑
SFRP1癌基因片段进行亚硫酸盐转化，设计包含权利要求1所述引物探针组合的荧光PCR反应体系，利用所述荧光PCR反应体系对亚硫酸盐转化后的游离PAX1
‑
SOX1
‑
SFRP1癌基因片段进行基因扩增；S3、对步骤S2获取的基因扩增结果CT值与临...

【专利技术属性】
技术研发人员：王校，赵娜，刘文波，王海阔，胡长安，李靖，胡守旺，史文钊，
申请(专利权)人：神州医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：