一种没食子酸1-β-葡萄糖基转移酶TbUGGT基因及其克隆表达与应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，涉及一种没食子酸1

【技术实现步骤摘要】
一种没食子酸1
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β
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葡萄糖基转移酶TbUGGT基因及其克隆表达与应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体地，涉及一种没食子酸1
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β
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葡萄糖基转移酶TbUGGT、编码所述的没食子酸1
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β
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葡萄糖基转移酶TbUGGT的基因片段、含有所述基因片段的重组表达载体、一种基因工程化的宿主细胞、所述的没食子酸1
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β
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葡萄糖基转移酶TbUGGT的克隆表达方法、一种没食子酸1
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β
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葡萄糖基转移酶TbUGGT的制备方法，以及一种制备1
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没食子酰
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β
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葡萄糖的方法。

技术介绍

[0002]没食子酸(gallic acid，GA)，又名3,4,5
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三羟基苯甲酸，在漆树、栗子、橡树皮等植物中含量较为丰富，被用做食品添加剂、药物以及工业材料等的生产中。没食子酸的生物合成路径尚未完全明确，多数研究认为没食子酸主要由莽草酸途径的中间产物形成且主要围绕高等植物进行研究。没食子酸在植物体内含量丰富，在酵母及大肠杆菌等微生物体内微量存在。是一种巨大的可再生资源。
[0003]菱是桃金娘目菱科菱属的一年生水生草本漂浮植物，主要分布于热带、温带等地区。菱的非食用部位可作为传统中药用于清热解毒以及治疗胃溃疡、食管癌、痢疾等一些常见疾病。目前已从菱中鉴定出众多酚类化合物，如没食子酸、咖啡酸、柚皮素、三没食子酰葡萄糖、四没食子酰葡萄糖以及五没食子酰葡萄糖等，这些酚类化合物在抗氧化、抗炎、抗癌等方面都具有一定的生理活性。目前，来源于菱的没食子酸1
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β
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葡萄糖基转移酶尚未有研究报道。
[0004]菱中所含的丰富的没食子酰
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葡萄糖种类表明其含有众多相关酶类，没食子酰
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葡萄糖的生物合成需要1
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没食子酰基葡萄糖作为活性酰基供体，1
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没食子酰基葡萄糖是没食子酰
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葡萄糖生物合成路径上的一种关键化合物，其由一分子没食子酸和一分子二磷酸尿苷葡萄糖反应生成。因此，对负责1
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没食子酰基葡萄糖生物合成的没食子酸1
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β
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葡萄糖基转移酶TbUGGT进行研究，有助于解析后续多没食子酰
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葡萄糖的生物合成途径，对利用生物合成途径获取1
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没食子酰基葡萄糖具有重要的指导意义。
[0005]综上所述，当前亟需一种能够获得菱中与没食子酸
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β
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葡萄糖基转移酶相关的基因以及通过原核表达的方式成功得到菱中与没食子酸
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β
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D
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葡萄糖基转移酶相关的蛋白的方法。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种葡糖基转移酶TbUGGT、基因及其克隆表达与应用。该基因来源于植物Trapa bispinosa Roxb.，重组TbUGGT酶具有酶活性。
[0007]本专利技术的第一方面提供一种没食子酸1
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葡萄糖基转移酶TbUGGT，其氨基酸序列如SEQ ID No：1所示。该糖基转移酶可催化没食子酸合成1
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没食子酰
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葡萄糖，命名为TbUGGT。
[0008]MGSESSLVHVFLVSFPAQGHVNPLLRLGKRLASKGLLVTFTTPESIGKQMRKASNIGDQPAPVGDGFIRFEFFEDGWDEDEPRRQDLDQYLPQLEKVGKVIIPEMIRRNAEQGRPISCLINNPFIPWVSDVAQSLGLPSAMLWVQSCACFAAYYHYYHDLVPFPSETAMEIDVQLPCMPLLKHDEVPSFLYPTTPYPFLRRAILGQYKNLDRPFCILLDTFQELEHEIVEYMSKICPIKTVGPLFKNPRAPNAAVKGDFVKADYDCIRWLDSKPPASVVYVSFGSVVYLKQDQWDEIAYGLLNSGVNFLWVMKPPHKDSGYTLLKLPEGLLEKAGERAKVVEWSPQEQVLAHPATACFVTHCGWNSSMEALTSGMPVVAFPQWGDQVTDAKYLVDVFKVGLRMCRGEAEDKLITRDVVERCLREATVGHKAVEMKENALRWKTAAEAAFVEGGSSDRNIHAFVDEVRRRSVELTASKPAAAAEPTAEAADANGKVEPVP(SEQ ID NO：1)
[0009]本专利技术的第二方面提供一种编码所述的没食子酸1
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β
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葡萄糖基转移酶TbUGGT的基因片段，其核苷酸序列如SEQ ID No：2所示。
[0010]5’‑
ATGGGAAGTGAATCATCTCTAGTACACGTTTTCTTGGTATCTTTCCCGGCGCAGGGCCACGTGAATCCGTTGCTGCGTCTGGGTAAGCGCCTGGCGTCCAAGGGTTTGCTTGTCACGTTTACCACCCCGGAATCCATTGGTAAGCAAATGCGTAAAGCGTCCAACATCGGCGACCAGCCGGCGCCAGTGGGCGACGGCTTTATCCGCTTTGAATTTTTCGAGGACGGTTGGGATGAGGACGAGCCGCGTCGTCAGGACCTGGATCAGTACCTCCCACAACTGGAAAAAGTGGGCAAAGTCATTATCCCGGAAATGATTCGTCGTAACGCGGAACAAGGTCGTCCGATTAGCTGCCTGATTAACAACCCGTTCATCCCGTGGGTGTCGGATGTTGCACAGAGCCTGGGCTTGCCGTCTGCGATGCTGTGGGTTCAAAGCTGCGCATGTTTTGCGGCGTACTACCACTATTACCACGACCTAGTGCCGTTCCCATCTGAAACCGCAATGGAAATCGACGTGCAGCTGCCGTGTATGCCGCTGCTTAAGCACGATGAGGTTCCGTCGTTCTTGTACCCGACCACTCCGTACCCGTTCCTGCGCAGAGCGATTCTGGGCCAGTATAAAAACCTCGACCGTCCGTTCTGCATCCTGCTGGACACCTTTCAAGAATTGGAGCACGAA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种没食子酸1
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葡萄糖基转移酶TbUGGT，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID No：1所示。2.一种编码权利要求1所述的没食子酸1
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葡萄糖基转移酶TbUGGT的基因片段，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No：2所示。3.一种重组表达载体，其特征在于，含有权利要求2所述的编码所述的没食子酸1
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β
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葡萄糖基转移酶TbUGGT的基因片段。4.一种基因工程化的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为转化了权利要求3所述的重组表达载体的宿主细胞，或者为基因组上整合了权利要求2所述的基因片段的宿主细胞，及其后代细胞。5.根据权利要求4所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为大肠杆菌，优选为大肠杆菌BL21(DE3)。6.权利要求1所述的没食子酸1
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葡萄糖基转移酶TbUGGT的克隆表达方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)以菱(Trapa bispinosa Roxb.)总RNA反转录后的cDNA为模板，通过PCR扩增获得权利要求2所述的编码所述的没食子酸1
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β
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葡萄糖基转移酶TbUGGT的基因片段；(2)将步骤(1)得到的基因片段克隆入表达载体中构建重组表达载体；再将所述的重组表达载体转入表达系统中进行异源表达；最后经纯化得到所述没食子酸1
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【专利技术属性】
技术研发人员：王丽梅，宋丹丹，殷东杰，王宏勋，易阳，闵婷，艾有伟，
申请(专利权)人：武汉轻工大学，
类型：发明
国别省市：