一种红芸豆抑菌活性多肽及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种红芸豆抑菌活性多肽及其制备方法。其制备方法包括如下制备步骤：S100、原料预处理：将提取过清蛋白的红芸豆豆渣加水软化并磨浆均质制成浆料；S200、水解：向所述浆料加入两种中性蛋白酶水解,得到水解液；S300、膜分离：将所述水解液灭酶后进行固液分离，得到的滤清液用截留分子量3000Da的超滤膜分离，得到的超滤液再用300Da的纳滤膜脱盐和浓缩，得到红芸豆抑菌活性多肽浓缩液。采用本发明专利技术的方法制备得到的多肽对变异链球菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌具有抑制性。由于这些菌是常见的消化道致病菌，该多肽可以作为抑制消化道有害菌的产品或作为外用抑菌产品。害菌的产品或作为外用抑菌产品。害菌的产品或作为外用抑菌产品。

【技术实现步骤摘要】
一种红芸豆抑菌活性多肽及其制备方法


[0001]本专利技术涉及红芸豆多肽的
，特别涉及一种红芸豆抑菌活性多肽及其制备方法。

技术介绍

[0002]红芸豆(Phaseolus vulgaris Linn.sp.)是菜豆属(Phaseolus L.)植物的种粒，在中国种植的品种常见有大红芸豆和小红芸豆两类。红芸豆的蛋白质含量为22％～24％，其中的水溶性清蛋白是α
‑
淀粉酶抑制剂。
[0003]前期研究表明，红芸豆提取了水溶性清蛋白后，红芸豆渣中还含有6％～12％的水不溶蛋白，如能将这些残留蛋白加工成活性多肽，则能提高红芸豆深加工的经济价值和综合利用价值，促进红芸豆的种植业发展。
[0004]目前关于芸豆多肽的研究文献与专利较少，董宪慧在《英国红芸豆蛋白抗氧化肽组分咀嚼片配方的研究》一文中报道，用碱性蛋白酶制备的红芸豆抗氧化肽可加工咀嚼片；张静在《花芸豆多肽提取工艺的研究》一文中，也用碱性蛋白酶加工花芸豆多肽；专利号为CN202010861723.6的专利文件《一种芸豆生物活性肽及其在制备降尿酸药物中应用》公开介绍了用碱溶酸沉法提取芸豆蛋白，然后用碱性蛋白酶制备具有黄嘌呤氧化酶抑制活性的多肽；专利号为ZL201410352633.9的专利文件《一种功能性白芸豆多肽及其制备方法和应用》中提到用酸性蛋白酶酶解白芸豆清蛋白，可以得到有较高的热稳定性的多肽，该多肽具有抑制α
‑
淀粉酶的活性；王秋明在《白芸豆多肽和氨基酸鲜味剂的研制》一文中报道，以提取了白芸豆清蛋白的豆渣为原料，先用碱溶酸沉法提取分离蛋白，然后比较了植物蛋白水解专用酶、木瓜蛋白酶、动物蛋白水解复合酶和碱性蛋白酶水解分离蛋白，制备多肽和氨基酸的效果，结果表明，用碱性蛋白酶水解效果最好，多肽和氨基酸的得率最高可达到5.67％。
[0005]目前尚未有用红芸豆制备抑菌活性多肽的报道。

技术实现思路

[0006]为解决上述
技术介绍
中提到的问题，本专利技术提供一种红芸豆抑菌活性多肽的制备方法，包括如下制备步骤：
[0007]S100、原料预处理：将提取过清蛋白的红芸豆豆渣加水软化并磨浆均质制成浆料；
[0008]S200、水解：向所述浆料加入蜂蜜曲霉(Aspergillus melleus)中性蛋白酶和枯草杆菌(Bacillus subtilis)中性蛋白酶进行水解得到水解液；
[0009]S300、膜分离：将所述水解液灭酶后进行固液分离，得到滤清液，将滤清液用截留分子量3000Da的超滤膜分离，得到的超滤液再用300Da的纳滤膜脱盐和浓缩，即得所述红芸豆抑菌活性多肽浓缩液。
[0010]在一实施例中，所述浆料的制备方法为将提取过清蛋白的红芸豆豆渣与水按质量比1:10～20混合，在10～20℃浸泡6～12h；然后用胶体磨磨浆至少一次，再加入磨浆浆液质
量2％～3％的食用盐溶解后，加热到55～65℃保温提取40～80min，在5～10MPa压力下至少均质一次，即得所述浆料。
[0011]在磨浆浆液中加入一定量的食盐，一方面可以促进红芸豆渣中的球蛋白溶出，另一方面可以将红芸豆淀粉的糊化温度提高到67℃以上，有利于均质浆液在55～65℃下提取球蛋白而淀粉不糊化，使多肽水解液易于分离。
[0012]在一实施例中，水解过程中，加酶量按浆料中蛋白质量计；所述蜂蜜曲霉中性蛋白酶的添加量为3000～5000U/g；所述枯草杆菌中性蛋白酶的添加量为1500～3000U/g。
[0013]在一实施例中，蜂蜜曲霉中性蛋白酶可采用阿玛诺(AMANO)天野公司的3SD型蛋白酶，但不限于此；枯草杆菌中性蛋白酶可采用南宁庞博生物工程有限公司1398菌，但不限于此。
[0014]在一实施例中，所述水解的条件为在40～50℃，pH值为7.0～8.5水解90～160min。
[0015]在一实施例中，所述水解液在灭酶前将pH值调整到4～5。
[0016]在一实施例中，所述灭酶的条件为将水解液加热煮沸4～8min。
[0017]在一实施例中，所述的滤清液为水解液灭酶后，先静置24～48h，取上清液再用50nm陶瓷膜过滤得到的滤液。
[0018]在一实施例中，所述红芸豆抑菌活性多肽浓缩液，其中的氯化钠含量不高于可溶性固形物含量的2％。
[0019]在一实施例中，所述红芸豆抑菌活性多肽浓缩液还可经喷雾干燥成粉状进行保存。
[0020]本专利技术还提供一种红芸豆抑菌活性多肽，采用如上任意所述的红芸豆抑菌活性多肽的制备方法制得。
[0021]基于上述，与现有技术相比，本专利技术提供的一种红芸豆抑菌活性多肽的制备方法具备如下有益效果：
[0022]1、与已有报道的芸豆渣制备多肽的工艺相比，不需用碱溶酸沉法提取蛋白，直接加酶水解，简化了工艺，减少了废水排放，经检测，本专利技术可以使红芸豆渣的多肽提取率达到6.2％。
[0023]2、本专利技术采用蜂蜜曲霉中性蛋白酶和枯草杆菌中性蛋白酶双酶同步水解红芸豆渣，水解时间短，工艺简单，得到的多肽对变异链球菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌具有抑制性。变异链球菌是龋病的主要致病菌，沙门氏菌和金黄色葡萄球菌是常见的肠道致病菌，因此，该多肽可以作为抑制消化道有害菌的产品或外用抑菌产品。由于该多肽原料来源于食品，安全性好，也可以作为蛋白类食品原料。
[0024]本专利技术的其它特征和有益效果将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本专利技术而了解。本专利技术的目的和其他有益效果可通过在说明书、权利要求书中所指出的结构和/或组分来实现和获得。
附图说明
[0025]图1为红芸豆多肽对变异链球菌的抑菌效果图。
[0026]图2为红芸豆多肽对沙门氏菌的抑菌效果图。
[0027]图3为红芸豆多肽对金黄色葡萄球菌的抑菌效果图。
[0028]图4为实施例2中红芸豆多肽样品抑菌浓度梯度曲线。
具体实施方式
[0029]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0030]在本专利技术的描述中，需要说明的是，本专利技术所使用的所有术语(包括技术术语和科学术语)具有与本专利技术所属领域的普通技术人员通常所理解的含义相同的含义，不能理解为对本专利技术的限制；应进一步理解，本专利技术所使用的术语应被理解为具有与这些术语在本说明书的上下文和相关领域中的含义一致的含义，并且不应以理想化或过于正式的意义来理解，除本专利技术中明确如此定义之外。
[0031]本专利技术提供如下实施例
[0032]实施例1
[0033]S100、原料预处理：称取100g提取过清蛋白的红芸豆干豆渣(蛋白含量为12.3％)，加入1700本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种红芸豆抑菌活性多肽的制备方法，其特征在于：S100、原料预处理：将提取过清蛋白的红芸豆豆渣加水软化并磨浆均质成浆料；S200、水解：向所述浆料中加入蜂蜜曲霉中性蛋白酶和枯草杆菌中性蛋白酶水解，得到水解液；S300、膜分离：将所述水解液灭酶后进行固液分离，得到滤清液，将滤清液用截留分子量3000Da的超滤膜分离，得到的超滤液再用300Da的纳滤膜脱盐和浓缩，即得红芸豆抑菌活性多肽浓缩液。2.根据权利要求1所述的红芸豆抑菌活性多肽的制备方法，其特征在于：所述浆料的制备方法为将提取过清蛋白的红芸豆豆渣与水按质量比1:10～20混合，在10～20℃浸泡6～12h；然后用胶体磨磨浆至少一次，再加入磨浆浆液质量2％～3％的食用盐溶解后，加热到55～65℃保温提取40～80min，在5～10MPa压力下至少均质一次，即得所述浆料。3.根据权利要求1所述的红芸豆抑菌活性多肽的制备方法，其特征在于：在所述的在浆料中加入蜂蜜曲霉中性蛋白酶和枯草杆菌中性蛋白酶，其剂量是以浆料中粗蛋白质量计，分别为3000～5000U/g和...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐梅，黄君阳，曹秀娟，王常青，赵大洲，
申请(专利权)人：厦门元之道生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：