一种量子点标记抗体试剂在细胞检测中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种量子点标记抗体试剂，所述量子点标记抗体试剂是以Cd的单金属同位素为唯一Cd来源制成的CdX；其中X＝S、Se或Te。所述量子点CdSe/ZnS中Cd为金属元素镉或其同位素：Cd

【技术实现步骤摘要】
一种量子点标记抗体试剂在细胞检测中的应用


[0001]本专利技术设及医疗器械，具体涉及一种量子点标记抗体试剂在细胞检测中的应用，尤其涉及一种量子点标记抗体试剂在细胞检测中的应用

技术介绍

[0002]量子点(Quantum Dots，QDs)通常指半径小于或接近激子玻尔半径的半导体纳米晶粒。量子点属于一大类新材料——溶液纳米晶中的一种。溶液纳米晶具有晶体和溶液的双重性质，与其他纳米晶材料不同，量子点是以半导体晶体为基础的。粒径在1～100纳米之间，每一个粒子都是单晶。量子点的名字，来源于半导体纳米晶的量子限域效应，或者量子尺寸效应。当半导体晶体小到纳米尺度，不同的尺寸就可以发出不同颜色的光。比如硒化镉(CdSe)这种半导体纳米晶，在2纳米时发出的是蓝色光，到8纳米的尺寸时发出的就是红色光，中间的尺寸则呈现绿色黄色橙色等等。它们具有独特的荧光纳米效应，例如其激发谱宽而且连续分布，发射谱狭窄而对称，且发光波长可通过改变粒径和组成进行调控，荧光强度高、漂白速率慢、灵敏度高，因而在发光材料、光催化、光敏传感器、荧光探针标记等方面有广阔的应用前景。尤其是IIB族与VIA族元素组成的量子点，简称为II
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VI型量子点(其中研究较多的主要是CdX(x＝S、Se、Te)，如CdSe硒化镉)，由于具有特殊优良的可见和近红外光谱区荧光发射性质，在生物医学荧光探针标记物和传感器方面有重要价值。而CdSe量子点与核壳结构的CdSe量子点如CdSe/ZnS、CdSe/CdS量子点由于发射波长覆盖整个可见光区范围，非常适合目视观察，因而受到特别的关注。
[0003]流式细胞术是生物医药领域广泛使用的细胞分析技术。目前流式检测系统主要分为两大类，一类是基于光学检测系统的经典型流式细胞检测系统，它的检测原理是通过荧光素标记的抗体对细胞进行染色，通过光学检测系统对不同荧光素激发光光谱的分析从而对单个细胞的多种蛋白水平进行分析。另一类是基于质谱检测系统的新型流式系统，它的检测原理是通过金属元素标记的抗体对细胞进行染色，通过质谱检测器分析金属元素的含量从而对单个细胞多种蛋白水平进行分析。两种流式检测系统都具有通道多，分析速度快，灵敏度高的特点。基于荧光分析的流式系统和基于金属分析的质谱流式系统，由于原理的不同，现有的配套试剂都无法通用，限制了该检测领域的发展。
[0004]量子点免疫荧光组织化学(Quantum Dots based Immunohistochemistry,QD
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IHC)又称量子点免疫荧光细胞化学，是根据抗原
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抗体特异性结合的原理，用量子点标记特异性抗体作为探针，检测组织或细胞中抗原性物质的一种技术。其与传统荧光流式不同点是以量子点取代荧光染料(如FITC、PE等)作为标记分子，由于凡能被荧光分子标记的细胞或微粒均能用流式细胞仪检测，因此量子点或量子点编码微球在流式细胞术中应用广泛，如细胞生物学分析(定量分析细胞周期并分选不同细胞周期时相的细胞；分析生物大分子如DNA、RNA、抗原、癌基因表达产物等物质与细胞增殖周期的关系，进行染色体核型分析)、肿瘤学分析(利用肿瘤标志物和偶联量子点的特异性抗体发生免疫夹心反应，检测反应物免疫量子点的荧光产率即可表征肿瘤标志物的含量)、免疫学分析(研究细胞周期或DNA倍
体与细胞表面受体及抗原表达的关系；进行免疫活性细胞的分型与纯化；分析淋巴细胞亚群与疾病的关系；免疫缺陷病如艾滋病的诊断；器官移植后的免疫学监测等)及微生物检测(细菌的多参数分析)等。
[0005]与荧光流式细胞术不同的是，质谱流式技术用稳定的重金属同位素(主要是镧系元素)代替荧光基团来标记抗体，目前尚无量子点作为标记分子应用于质谱流式检测的报道。
[0006]量子点抗体是由量子点与抗体分子通过偶联所得；也可以将量子点通过高分子自组装形式形成的微球，在微球表面修饰有羧基官能团，再与抗体进行偶联。因量子点抗体本身独特的荧光效应，该抗体可用于荧光流式细胞术；由于量子点抗体含有Cd金属，并且Cd金属在生物细胞内含量极少的特性，本专利技术人试图用于质谱流式细胞术，获得了成功。因而开发量子点抗体的新应用具有重要的意义。

技术实现思路

[0007]本专利技术所要解决的技术问题在于克服上述不足之处，研究设计量子点抗体试剂在荧光流式检测及质谱流式检测中的应用。
[0008]本专利技术所述量子点抗体是由CdSe/ZnS(硒化镉/硫化锌)量子点与抗体分子通过偶联所得；也可以将量子点通过高分子自组装形式形成的微球，在微球表面修饰有羧基官能团，再与抗体进行偶联。
[0009]本专利技术提供了一种量子点标记抗体试剂及其在细胞检测中的应用。
[0010]具体的，本专利技术提供了一种量子点标记抗体试剂，量子点标记抗体试剂是由以Cd的单金属同位素为唯一Cd来源制成的CdX(X＝S、Se、Te)量子点(市售或交由第三方定制)与抗体(市售)偶联所得。
[0011]本专利技术所用量子点CdSe/ZnS中Cd(镉)为金属元素镉(Cd)及其同位素：Cd
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106、Cd
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108，Cd
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110、Cd
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111、Cd
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112、Cd
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113、Cd
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114和Cd
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116。所用的抗体是能够特异性结合细胞内蛋白质、细胞外蛋白质、细胞内核酸等的抗体，抗体可以是任意种属的抗体，例如，人、鼠、猴、马、羊驼等，抗体的来源没有限制，抗体类型可以是单克隆抗体，也可以是多克隆抗体。优选人抗CD3抗体、人抗CD45抗体或鼠抗CD3e抗体。
[0012]本专利技术量子点与抗体的偶联通过下列方法制备：该方法包括下列步骤：
[0013]本方法参考《一种量子点纳米球标记的荧光免疫印迹检测方法》专利号CN 108663345 A。
[0014]取0.5～5毫克量子点纳米球(CdX(X＝S、Se、Te)量子点纳米球，昆道生物)与0.1～1mmol/L EDC(1
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乙基
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(3
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二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺)溶液加入磷酸盐缓冲液(pH4.0～6.0磷酸二氢钠盐溶液)中，混匀活化三十分钟，活化后加入浓度为50～500ug/ml的抗体，反应三十分钟后，5000～20000转每分离心5～60分钟，弃上清，加浓度为1～10mg/ml牛血清白蛋白封闭2小时后置于4℃保存，得到量子点标记抗体试剂Qdot
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CD量子点
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抗体偶联物。
[0015]本专利技术的另一目的提供了所述量子点
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抗体试剂用于荧光流式检测的检测方法。
[0016]本专利技术所述量子点标记抗体试剂用于荧光流式检测的检测方法包括下列步骤：
[0017](1)将人外周血样本通过离心、过滤后用1毫升磷酸盐缓冲液重悬制成单细胞悬液；
[0018](2)在上述单细胞悬液中加入3毫升红细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种量子点标记抗体试剂，其特征在于，所述量子点标记抗体试剂是以Cd的单金属同位素为唯一Cd来源制成的CdX；其中X为S、Se或Te。2.根据权利要求1所述的一种量子点标记抗体试剂，其特征在于，所述量子点CdSe/ZnS中Cd为金属元素镉或其同位素：Cd
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106、Cd
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108、Cd
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110、Cd
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111、Cd
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112、Cd
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113、Cd
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114或Cd
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116。3.根据权利要求1所述的一种量子点标记抗体试剂，其特征在于，所述抗体选自人抗CD3抗体、人抗CD45抗体、鼠抗CD4抗体或鼠抗CD3e抗体。4.根据权利要求1所述的一种量子点标记抗体试剂，其特征在于，所述量子点标记抗体试剂通过量子点与抗体的偶联制得，该方法包括下列步骤：取0.5～5毫克量子点纳米球CdX，X为S、Se或Te量子点纳米球，与0.1～1mmol/L EDC溶液加入磷酸盐缓冲液pH4.0～6.0磷酸二氢钠盐溶液中，混匀活化三十分钟，活化后加入浓度为50～500ug/ml的抗体，反应三十分钟后，5000～20000转每分离心5～60分钟，弃上清，加浓度为1～10mg/ml牛血清白蛋白封闭2小时后置于4℃保存，得到量子点标记抗体试剂Qdot
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CD。5.一种如权利要求1所述量子点标记抗体试剂在细胞检测中的应用，其特征在于，所述量子点标记抗体试剂的应用为在荧光流式细胞检测或质谱流式细胞检测中的应用。6.根据权利要求5所述量子点标记抗体试剂在细胞检测中的应用，其特征在于，流式细胞仪包括经典型荧光流式细胞仪和质谱流式细胞仪；所述用于检测的抗体试剂，其标签是金属元素Cd及其同位素：Cd
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106、Cd
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108，Cd
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110、Cd
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111、Cd
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112、Cd
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113、Cd
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114或Cd
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116。7.根据权利要求5所述量子点标记抗体试剂在细胞检测中的应用，其特征在于，所述量子点标记抗体试剂用于荧光流式检测的检测方法包括下列步骤：(1)将人外周血样本通过离心、过滤后用1毫升磷酸盐...

【专利技术属性】
技术研发人员：车双益，陈亚楠，孙双午，王宇翀，
申请(专利权)人：上海宸安生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：