一种荧光免疫层析法检测肉糜产品中盐酸克伦特罗的试纸条及其使用方法技术

本申请涉及肉糜产品中盐酸克伦特罗检测的领域，具体公开了一种荧光免疫层析法检测肉糜产品中盐酸克伦特罗的试纸条，包括PVC底板、检测样品垫、硝酸纤维素膜，检测样品垫与硝酸纤维素膜依次连接在PVC底板上，检测样品垫用于滴加荧光标记的盐酸克伦特罗抗体与检测样品的混合物，硝酸纤维素膜用于包被盐酸克伦特罗单克隆抗体与羊抗鼠IgG；其中，荧光标记的盐酸克伦特罗单克隆抗体包括水溶性量子点、三氯化物与盐酸克伦特罗单克隆抗体。本申请的荧光免疫层析法检测肉糜产品中盐酸克伦特罗的试纸条具有检测限低，灵敏度高的效果。灵敏度高的效果。灵敏度高的效果。

【技术实现步骤摘要】
一种荧光免疫层析法检测肉糜产品中盐酸克伦特罗的试纸条及其使用方法


[0001]本申请涉及肉糜产品中盐酸克伦特罗检测的领域，更具体地说，它涉及一种荧光免疫层析法检测肉糜产品中盐酸克伦特罗的试纸条及其使用方法。

技术介绍

[0002]盐酸克伦特罗是瘦肉精的主要成分，此类瘦肉精进入牲畜体内后能够改变养分的代谢途径，促进动物肌肉生长，尤其是促进骨骼肌蛋白质的合成，加速脂肪的转化和分解，提高牲畜的瘦肉率。为了保证牲畜产品质量安全，检测瘦肉精中的盐酸克伦特罗含量的方法就极为重要。
[0003]相关技术中，申请号为CN201510258151.1的中国申请文件公开了一种荧光免疫层析法检测肉糜产品中盐酸克伦特罗的试纸条及其检测方法，本专利技术公开了一种检测盐酸克伦特罗胶体金免疫层析试纸条，包括检测样品垫、结合垫、硝酸纤维素包被膜、吸水垫及PVC底板，所述检测样品垫、所述结合垫、所述硝酸纤维素包被膜及所述吸水垫依次搭接在所述PVC底板上，所述结合垫包被设有盐酸克伦特罗单克隆抗体
‑
胶体金标记物；所述硝酸纤维素包被膜上设有检测线和质控线，所述检测线包被有盐酸克伦特罗抗原，所述质控线包被有羊抗鼠IgG；使用时，组装试纸条，并进行检测；此实验制备的试纸条检测盐酸克伦特罗的灵敏度在8ng/mL。
[0004]针对上述中的相关技术，专利技术人认为上述胶体金免疫层析试纸条检测盐酸克伦特罗的灵敏度较低，对于肉糜产品中微量添加盐酸克伦特罗是检测不到的。

技术实现思路

[0005]为了降低盐酸克伦特罗的检测限，提高检测灵敏度，本申请提供一种荧光免疫层析法检测肉糜产品中盐酸克伦特罗的试纸条及其使用方法。
[0006]第一方面，本申请提供一种荧光免疫层析法检测肉糜产品中盐酸克伦特罗的试纸条，采用如下的技术方案：一种荧光免疫层析法检测肉糜产品中盐酸克伦特罗的试纸条，包括PVC底板、检测样品垫、硝酸纤维素膜，检测样品垫与硝酸纤维素膜依次连接在PVC底板上，检测样品垫用于滴加荧光标记的盐酸克伦特罗抗体与检测样品的混合物，硝酸纤维素膜用于包被盐酸克伦特罗单克隆抗体与羊抗鼠IgG；其中，荧光标记的盐酸克伦特罗单克隆抗体包括水溶性量子点、三氯化物与盐酸克伦特罗单克隆抗体。
[0007]通过采用上述技术方案，水溶性量子点作为一种新型荧光标记物，能够用于荧光免疫层析法中，由于水溶性量子点表面携带有能够溶于水的羧基、氨基或羟基，因此能够与三氯化物中的三价阳离子络合，形成稳定的水溶性量子点
‑
M
3+
组合体，则水溶性量子点作为盐酸克伦特罗单克隆抗体的荧光标记物时，荧光标记的盐酸克伦特罗单克隆抗体的荧光强
度增大，使得最终检测盐酸克伦特罗抗原的检测限降低，灵敏度增高。
[0008]可选的，所述三氯化物为三氯化铝与三氯化铁中的一种。
[0009]通过采用上述技术方案，由于三氯化铝与三氯化铁均能够溶于水，且氯离子在水中不会影响荧光标记的盐酸克伦特罗单克隆抗体的作用，Al
3+
与Fe
3+
在水中均能以离子形式存在，使得Al
3+
与Fe
3+
均能与带有负电荷的水溶性量子点连接，增大单个盐酸克伦特罗单克隆抗体上连接的水溶性量子点数量，增强检测荧光强度，从而降低检测限，提高灵敏度。
[0010]可选的，所述水溶性量子点为ZnSe/ZnS量子点，InP/ZnS量子点，CdS/ZnS量子点，CdSe/ZnS量子点制得的水溶性量子点中的一种。
[0011]通过采用上述技术方案，ZnSe/ZnS量子点，InP/ZnS量子点，CdS/ZnS量子点，CdSe/ZnSde量子点在发光量子点中发光强度较高，且价格适中；ZnSe/ZnS量子点，InP/ZnS量子点，CdS/ZnS量子点，CdSe/ZnSde量子点制得的水溶性量子点稳定性高，作为盐酸克伦特罗单克隆抗体的荧光标记物时，最终检测结果的稳定性高。
[0012]可选的，所述水溶性量子点的表面携带有羧基。
[0013]通过采用上述技术方案，表面带有羧基的水溶性量子点比表面带有氨基的水溶性量子点在水溶液中更稳定，且羧基的氢离子比羟基的氢离子在水溶液中更容易解离；因此，表面携带有羧基的水溶性量子点与三氯化物中的阳离子形成的络合物更稳定，使得荧光标记的盐酸克伦特罗单克隆抗体的荧光稳定性更高，最终检测结果的稳定性高。
[0014]可选的，所述水溶性量子点的浓度为0.5
‑
2nmol/mL；盐酸克伦特罗单克隆抗体的浓度为3.5
‑
6mg/mL。
[0015]通过采用上述技术方案，合适浓度的水溶性量子点与盐酸克伦特罗单克隆抗体能够更好的连接，且难以产生水溶性量子点与盐酸克伦特罗单克隆抗体的浪费。
[0016]可选的，所述三氯化物的浓度为10
‑
30nmol/mL。
[0017]通过采用上述技术方案，合适的三氯化物浓度，使得三氯化物添加在荧光标记的盐酸克伦特罗单克隆抗体中，在连接水溶性量子点的同时，难以产生沉淀，保证了荧光标记的盐酸克伦特罗单克隆抗体在硝酸纤维素膜上的流动顺畅性，从而保证了较短的检测时间。
[0018]第二方面，本申请提供一种荧光免疫层析法检测肉糜产品中盐酸克伦特罗的试纸条的使用方法，采用如下的技术方案：一种荧光免疫层析法检测肉糜产品中盐酸克伦特罗的试纸条的使用方法，包括以下步骤：步骤S1：荧光标记的盐酸克伦特罗抗体与检测样品的混合物制备：将水溶性量子点、偶联剂、盐酸克伦特罗单克隆抗体加入血清中，调节pH至7
‑
8，涡旋后静置；再加入检测样品，涡旋；再加入BSA溶液与三氯化铝水溶液，涡旋后在0
‑
4℃的条件下封闭，静置，制得荧光标记的盐酸克伦特罗抗体与检测样品的混合物；步骤S2：试纸条的组装：将硝酸纤维素包被膜和吸水垫分别贴在PVC底板上；在硝酸纤维素包被膜上依次包被盐酸克伦特罗单克隆抗体和羊抗鼠IgG，分别作为检测线和控制线。
[0019]通过采用上述技术方案，制备得到荧光标记的盐酸克伦特罗抗体与检测样品的混合物，组装试纸条，将现有技术中的竞争法检测改为双抗体夹心法检测，使得荧光标记的盐酸克伦特罗抗体与检测样品的混合物只需结合在盐酸克伦特罗单克隆抗体上，一步即可反
应结束。
[0020]可选的，所述步骤S1中，再加入BSA溶液，还包括在35
‑
37℃下反应10
‑
30min的步骤。
[0021]通过采用上述技术方案，在合适的温度与时间内反应，使得BSA能够起到较好的封闭作用，防止盐酸克伦特罗单克隆抗体和非特异性蛋白结合，从而使得盐酸克伦特罗单克隆抗体与盐酸克伦特罗抗原的连接形成一对一的模式，最终检测结果准确。
[0022]可选的，所述偶联剂为N
‑
羟基琥珀酰亚胺与1
‑
乙基
‑3‑
(3
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种荧光免疫层析法检测肉糜产品中盐酸克伦特罗的试纸条，其特征在于，包括PVC底板、检测样品垫、硝酸纤维素膜，检测样品垫与硝酸纤维素膜依次连接在PVC底板上，检测样品垫用于滴加荧光标记的盐酸克伦特罗抗体与检测样品的混合物，硝酸纤维素膜用于包被盐酸克伦特罗单克隆抗体与羊抗鼠IgG；其中，荧光标记的盐酸克伦特罗抗体包括水溶性量子点、三氯化物与盐酸克伦特罗单克隆抗体。2.根据权利要求1所述的一种荧光免疫层析法检测肉糜产品中盐酸克伦特罗的试纸条，其特征在于，所述三氯化物为三氯化铝与三氯化铁中的一种。3.根据权利要求1所述的一种荧光免疫层析法检测肉糜产品中盐酸克伦特罗的试纸条，其特征在于，所述水溶性量子点为ZnSe/ZnS量子点，InP/ZnS量子点，CdS/ZnS量子点，CdSe/ZnS量子点制得的水溶性量子点中的一种。4.根据权利要求3所述的一种荧光免疫层析法检测肉糜产品中盐酸克伦特罗的试纸条，其特征在于，所述水溶性量子点的表面携带有羧基。5.根据权利要求3所述的一种荧光免疫层析法检测肉糜产品中盐酸克伦特罗的试纸条，其特征在于，所述水溶性量子点的浓度为0.5
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2nmol/mL；盐酸克伦特罗单克隆抗体的浓度为3.5
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6mg/mL。6.根据权利要求5所述的一种荧光免疫层析法检测肉糜产品中盐酸克伦特罗的试纸条，其特征在于，所述三氯化物的浓度为10
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【专利技术属性】
技术研发人员：嵇春波，徐丽，许太基，郑丹，
申请(专利权)人：谱尼测试集团深圳有限公司，
类型：发明
国别省市：