HSPA4抑制剂在治疗黑素瘤中的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医学领域，具体涉及HSPA4抑制剂在治疗黑素瘤中的应用。具体地，本发明专利技术通过细胞实验证明了敲降HSPA4可以抑制黑素瘤细胞的增殖，同时，提供了检测HSPA4表达量的试剂在制备诊断黑素瘤、预测黑素瘤患者的预后的产品中的应用。产品中的应用。产品中的应用。

【技术实现步骤摘要】
HSPA4抑制剂在治疗黑素瘤中的应用


[0001]本专利技术属于生物医学领域，具体涉及HSPA4抑制剂在治疗黑素瘤中的应用。

技术介绍

[0002]热休克蛋白Heat Shock Proteins(HSPs)是一种应激蛋白，是细胞在氧化应激、缺氧和热应激等环境刺激下产生的一种功能高度保守的蛋白质，广泛存在于原核及真核生物中。热休克蛋白可以作为分子伴侣，协助蛋白质的正确折叠，保护细胞适应外界环境的刺激，参与到细胞的生长、代谢及信号转导等过程中。HSP首先是在果蝇体内发现的。果蝇幼虫唾液腺的多线染色体比一般染色体粗1～2千倍，故有利于在光学显微镜下进行观察研究。HSP的生成，不仅见于果蝇，而且是普遍存在于从细菌直至人类的整个生物界(包括植物和动物)的一种现象。绝大部分生物细胞生成的HSP分子量都在80～110kD、68～74kD和18～30kD之间。按照蛋白的大小，热休克蛋白共分为五类，分别为HSP110、HSP90、HSP70、HSP60以及小分子热休克蛋白small Heat Shock Proteins(sHSPs)。
[0003]黑素瘤一般指恶性黑素瘤，恶性黑素瘤是由皮肤和其他器官黑素细胞产生的肿瘤。皮肤黑素瘤表现为色素性皮损在数月或数年中发生明显改变。恶性黑素瘤大多发生于成人，巨大性先天性色素痣继发癌变的病例多见于儿童。黑素瘤的病因学尚未完全阐明。一些研究资料提示，其发生与下列危险因素有关：基因、环境及基因/环境共同因素。比如不典型(发育不良)痣或黑色素瘤家族史、光导致色素沉着的皮肤、不容易晒黑皮肤、红色头发人种、强的间断日光暴露、日晒伤、多发黑色素细胞痣等。虽其发病率低，但其恶性度高，转移发生早，死亡率高。
[0004]黑素瘤患者中局部、无淋巴结及远处转移者预后较好。Ⅰ/Ⅱ期女性生存率高于男性，躯干、头颈部原发黑色素瘤比四肢的差。高龄与黑色素瘤存活率成反比，Ⅲ期黑色素瘤具有明显不同的预后：溃疡和淋巴结转移数量多提示预后差，Ⅳ期黑色素瘤重要的预后因素是远处转移的位置，内脏转移比非内脏(皮肤及远端淋巴结)转移预后差。
[0005]综上，黑素瘤的早期诊断、早期治疗尤为重要。

技术实现思路

[0006]黑素瘤发病率低，但其恶性度高，转移发生早，死亡率高；所以早期诊断、早期治疗尤为重要。因此本专利技术要解决的技术问题是，如何诊断黑素瘤、如何预测黑素瘤患者的预后、如何治疗黑素瘤。
[0007]为了解决上述技术问题，本专利技术通过细胞实验首先验证了敲降HSPA4可以抑制黑素瘤细胞的增殖，也就代表了HSPA4可作为黑素瘤的治疗靶点。
[0008]同时，本专利技术通过测序信息验证了HSPA4在黑素瘤中的表达量显著的高于健康对照，且接受者操作特征(ROC曲线)发现HSPA4可以较为准确的诊断黑素瘤；并且，高HSPA4表达量与黑素瘤的预后相关，HSPA4高表达者的生存率低于HSPA4低表达者，高低HSPA4表达量患者之间存在统计学差异。
[0009]基于上述研究发现，本公开提出了如下技术方案：
[0010]应用
[0011]一方面，本专利技术提供了HSPA4的抑制剂在制备治疗黑素瘤的产品中的应用。
[0012]具体地，所述HSPA4的抑制剂即降低HSPA4表达量的物质。
[0013]优选地，所述HSPA4的抑制剂包括针对HSPA4或其表达产物的shRNA、反义寡核苷酸(ASO)、抗体、拮抗剂、阻断剂、siRNA、miRNA。
[0014]更优选地，所述HSPA4的抑制剂是特异性靶向HSPA4的siRNA。
[0015]更优选地，所述特异性靶向HSPA4的siRNA是本专利技术具体实施例中所使用的siRNA2。
[0016]具体地，所述siRNA(Small interfering RNA，小干扰RNA)主要参与RNA干扰，其亦称为短干扰RNA(short interfering RNA)或沉默RNA(silencing RNA)。
[0017]另一方面，本专利技术提供了检测HSPA4表达量的试剂在制备诊断黑素瘤、预测黑素瘤患者的预后的产品中的应用。
[0018]优选地，所述受试者是黑素瘤患者或疑似黑素瘤患者。
[0019]优选地，所述检测是针对来自于受试者的样本进行的检测。
[0020]如本专利技术所使用，所述样本示例性的包括外周血、组织、血液、血清、血浆、尿液、唾液、精液、乳汁、脑脊髓液、泪液、痰等。
[0021]最优选地，本专利技术所述样品是细胞和/或组织。
[0022]本专利技术通过研究发现，HSPA4在患者体内的表达量显著高于健康对照，高表达HSPA4的癌症患者相对于低表达HSPA4者预后更差。
[0023]本专利技术所述“黑素瘤”即皮肤恶性黑色素瘤，cutaneous malignantmelanoma，CMM。本专利技术所述“健康对照”是指不患有黑素瘤的受试者，其可能有痣，但HSPA4在黑素瘤细胞中的表达量相对于痣细胞依然是具有统计学意义的高表达，本专利技术具体实施例中记载了HSPA4在痣细胞和黑素瘤患者之间的表达量差异(图7)，也即证明了本专利技术所提供的HSPA4在诊断黑素瘤时可以区分普通痣细胞和黑素瘤细胞，也即不受痣细胞的影响。
[0024]本专利技术可以利用本领域内已知的任何方法测定基因的表达量。本领域技术人员应当理解，测定基因表达的手段不是本专利技术的重要方面。
[0025]优选地，所述检测HSPA4表达量的试剂包括检测HSPA4蛋白表达量和/或HSPA4mRNA表达量的试剂。
[0026]优选地，所述检测HSPA4mRNA表达量的试剂包括但不限于以下方法中使用到的试剂：基于PCR的检测方法、Southern杂交方法、Northern杂交方法、点杂交方法、荧光原位杂交方法、DNA微阵列方法、ASO法、高通量测序平台方法。
[0027]具体地，所述试剂可以包括但不限于特异性结合目标序列的特异性探针、扩增目标序列的特异性引物等。
[0028]本专利技术所述“特异性探针”可以为单标记的核酸探针，例如放射性核素(如32P、3H、35S等)标记探针、生物素标记探针、辣根过氧化物酶标记探针、地高辛标记探针或荧光基团(如FITC、FAM、TET、HEX、TAMRA、Cy3、Cy5等)标记探针；本专利技术所述“特异性探针”也可以为双标记的核酸探针，例如Taqman探针、分子信标、置换探针、QUAL探针、FRET探针等。
[0029]本专利技术所述“特异性引物”可以在核酸扩增反应中结合目标核酸用于初期核酸合
成和模板处理。所述核酸扩增反应包括PCR，具体地，包括反转录PCR(RT
‑
PCR)、原位PCR、连接酶链反应(Ligase chain reaction，LCR)、标记PCR(Labeled primers，LP
‑
PCR)、反向PCR(reverse PCR，扩增两引物外侧未知序列)、不对称PCR(asymmetric PCR)、降落PCR(touchdown 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.HSPA4的抑制剂在制备治疗黑素瘤的产品中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述HSPA4的抑制剂包括针对HSPA4或其表达产物的shRNA、反义寡核苷酸、抗体、拮抗剂、阻断剂、siRNA、miRNA；更优选地，所述HSPA4的抑制剂是特异性靶向HSPA4的siRNA；更优选地，所述siRNA的序列如SEQ ID NO.:1和SEQ ID NO.:2所示。3.检测HSPA4表达量的试剂在制备诊断黑素瘤、预测黑素瘤患者的预后的产品中的应用；优选地，所述预后的指标包括全因死亡率、疾病特异性生存率；优选地，所述检测HSPA4表达量的试剂包括检测HSPA4蛋白表达量和/或HSPA4 mRNA表达量的试剂；优选地，所述检测HSPA4 mRNA表达量的试剂包括以下方法中使用到的试剂：基于PCR的检测方法、Southern杂交方法、Northern杂交方法、点杂交方法、荧光原位杂交方法、DNA微阵列方法、ASO法、高通量测序平台方法；优选地，所述试剂还包括但不限于特异性结合目标序列的特异性探针、扩增目标序列的特异性引物；优选地，所述试剂还包括提取DNA的试剂、提取RNA并进行反转录的试剂。4.如权利要求3所述的应用，所述检测是针对来自于受试者的样本进行的检测；优选地，所述样本包括外周血、组织、血液、血清、血浆、尿液、唾液、精液、乳汁、脑脊髓液、泪液、痰；最优选地，所述样品是细胞和/或组织。5.一种治疗黑素瘤的药物组合物或其在制备治疗黑素瘤的产品中的应用，所述药物组合物中包括HSPA4的抑制剂；优选地，所述HSPA4的抑制剂包括针对HSPA4或其表达产物的shRNA、反义寡核苷酸、抗体、拮抗剂、阻断剂、siRNA、miRNA；更优选地，所述HSPA4的抑制剂是特异性靶向HSPA4的siRNA；更优选地，所述siRNA的序列如SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：王旭东，徐建洪，王珺，李志勇，徐晓菲，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院京南医疗区，
类型：发明
国别省市：