VWF糖基化蛋白的检测试剂在制备筛查患肺癌风险的试剂盒中的用途制造技术

本发明专利技术提供了VWF糖基化蛋白的检测试剂在制备筛查患肺癌风险的试剂盒中的用途，属于体外诊断试剂领域。本发明专利技术的试剂盒通过检测血浆中VWF糖基化蛋白的水平，可以筛查待检人群患肺癌的风险，可用于临床肺癌的辅助诊断，为患者采取相关的治疗措施或者决策提供有效的依据，临床应用前景良好。临床应用前景良好。临床应用前景良好。

【技术实现步骤摘要】
VWF糖基化蛋白的检测试剂在制备筛查患肺癌风险的试剂盒中的用途


[0001]本专利技术属于体外诊断试剂领域，具体涉及VWF糖基化蛋白的检测试剂在制备筛查患肺癌风险的试剂盒中的用途。

技术介绍

[0002]肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率呈逐年上升趋势，目前发病率居世界首位，严重威胁着人类健康和生命。
[0003]肺癌是一种善于隐匿的疾病，经常在疾病发展到晚期才表现出临床症状，70～80％的肺癌患者在诊断出患有肺癌症状时已是中、晚期，癌细胞已经扩散，错过了最佳治愈时机，五年生存率低。对于早期的肺癌患者，经过及时治疗可大大提高患者的5年及以上生存率和生存质量。因此肺癌的早期诊断和进行有效的筛查至关重要。
[0004]肺癌的筛查，是指对那些没有肺癌相关症状的人群进行常规体检，在出现症状前及时发现肺癌。如果可以找到血浆或其外泌体里面的肺癌分子标志物，用于提示临床医生早期对患者采取相关的治疗措施或者决策具有重要的意义。
[0005]VWF蛋白(UniProtKB编号为:P04275)是一种大分子量的多亚基糖蛋白，由多个220kD的亚基组成。一方面，VWF可以介导血小板粘附于受损的血管壁，形成血栓得以止血；另一方面，正常情况下，VWF与人凝血因子VIII基因(hFVIII)在血浆中紧密结合形成稳定的复合物，VWF复合物的形成在体内阻碍了可能由细胞表面受体介导的hFVIII分解，对维持hFVIII的半衰期至关重要。糖基化(Glycosylation)是一种重要且广泛存在的蛋白质翻译后修饰方式。目前尚未见VWF糖基化蛋白与肺癌相关的报道。

技术实现思路

[0006]本专利技术的第一个目的在于提供VWF糖基化蛋白的检测试剂在制备筛查患肺癌风险的试剂盒中的用途。
[0007]本专利技术的第二个目的在于提供检测VWF糖基化蛋白的仪器在制备筛查患肺癌风险的设备中的用途。
[0008]本专利技术的第三个目的在于提供一种新的筛查患肺癌风险的试剂盒或设备。
[0009]本专利技术提供了检测VWF糖基化蛋白的试剂在制备筛查患肺癌风险的试剂盒中的用途。
[0010]进一步地，所述VWF糖基化蛋白为VWF蛋白的第2357位点上发生N
‑
糖基化修饰后的产物。
[0011]进一步地，所述检测VWF糖基化蛋白的试剂为检测人血浆中VWF糖基化蛋白的试剂。
[0012]进一步地，所述检测VWF糖基化蛋白的试剂为酶联免疫吸附试验用试剂或western blot试剂。
[0013]本专利技术还提供了检测VWF糖基化蛋白的仪器在制备筛查患肺癌风险的设备中的用途。
[0014]进一步地，所述VWF糖基化蛋白为VWF蛋白的第2357位点上发生N
‑
糖基化修饰后的产物。
[0015]进一步地，所述检测VWF糖基化蛋白的仪器为检测人血浆中VWF糖基化蛋白的仪器。
[0016]进一步地，所述检测VWF糖基化蛋白的仪器为液相色谱
‑
质谱联用仪。
[0017]本专利技术还提供了一种筛查患肺癌风险的试剂盒或设备，它包括用于检测VWF糖基化蛋白的试剂或仪器。
[0018]进一步地，所述VWF糖基化蛋白为VWF蛋白的第2357位点上发生N
‑
糖基化修饰后的产物。
[0019]本专利技术通过质谱蛋白组学方法鉴定发现VWF蛋白的第2357位点上能够发生N
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糖基化修饰。
[0020]蛋白质糖基化按照氨基酸和糖的连接方式可以分为四类：O位糖基化、N位糖基化、C位甘露糖化以及GPI(glycophosphatidlyinositol)锚定连接。其中，N位糖基化(N
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linked glycosylation，简称N
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糖基化)是通过糖链的还原端N
‑
乙酰胺基葡萄糖(Glc
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Nac)和肽链中某些Asn侧链酰胺基上的N原子相连，能接有糖链的Asn必须处于Asn
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X
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Ser/Thr(X！＝P)残基构成的基序中。糖为N
‑
乙酰葡糖胺。
[0021]本专利技术的关键在于，确定了人体血浆中VWF糖基化蛋白水平与患肺癌的风险显著相关，因此可以通过检测人体血浆中VWF糖基化蛋白水平来判断患肺癌的风险，至于具体检测人体血浆中VWF糖基化蛋白水平的手段，可以采用现有技术公开的各种手段，本专利技术实施例具体采用液相色谱
‑
质谱联用分析法进行检测，单不仅仅限于该手段，任何能够检测人体血浆中VWF糖基化蛋白水平的方法均可用于肺癌筛查。
[0022]本专利技术提供了一种新的肺癌筛查标记物和一种新的肺癌筛查试剂盒，可以筛查待检人群患肺癌的风险，可用于临床肺癌的辅助诊断，为患者采取相关的治疗措施或者决策提供有效的依据，临床应用前景良好。且能以血浆作为检测样品，对患者伤害很低。
[0023]显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0024]以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
附图说明
[0025]图1：肺癌患者(LC)与健康人群(NC)血浆中VWF糖基化蛋白水平对比图。
[0026]图2：肺癌患者(LC)与健康人群(NC)的ROC分析。
具体实施方式
[0027]本专利技术所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。
[0028]实施例1：VWF糖基化蛋白的检测试剂在制备筛查患肺癌风险的试剂盒中的用途
[0029]1.检测原理
[0030]糖基化是一种重要且广泛存在的蛋白质翻译后修饰方式。血浆N
‑
糖基化检测原理为：提取血浆全蛋白，经胰酶酶解后形成的肽段使用亲水作用色谱富集N糖基化肽段，再用N
‑
糖酰胺酶F(PNGase F)在H2O
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中切除糖链，使得糖基化修饰过的位点引入O
18
，分子量的增加使得在液质联用系统中能够轻松辦别出该位点，从而确定N
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糖基化发生的位点。
[0031]2.检测方法
[0032](1)蛋白提取
[0033]表1.样品来源人群信息
[0034]人群人数肺癌患者20健康人群20
[0035]样品来源于肺癌患者和健康人群血浆，受试人群的年龄范围为29～82岁，男性占32.5％，女性占67.5％。
[0036]样品从
‑
80℃取出，4℃，12000g离心10min，去除红细胞碎片，上清液转移至新的离心管，利用BCA试剂盒进行蛋白浓度测定。
[0037](2)胰酶酶解...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测VWF糖基化蛋白的试剂在制备筛查患肺癌风险的试剂盒中的用途。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述VWF糖基化蛋白为VWF蛋白的第2357位点上发生N
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糖基化修饰后的产物。3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述检测VWF糖基化蛋白的试剂为检测人血浆中VWF糖基化蛋白的试剂。4.如权利要求1
‑
3任一项所述的用途，其特征在于，所述检测VWF糖基化蛋白的试剂为酶联免疫吸附试验用试剂或western blot试剂。5.检测VWF糖基化蛋白的仪器在制备筛查患肺癌风险的设备中的用途。6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述VWF糖基化蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：周斌，张林，王艳云，李芝隆，宋雅平，粟闵，
申请(专利权)人：四川大学华西第二医院，
类型：发明
国别省市：