一种基于自组装DNA核酸链传感器的多种肿瘤标记物化学发光快速检测方法技术

本发明专利技术提供一种基于自组装DNA核酸链传感器的多种肿瘤标记物化学发光快速检测方法，其中利用寡核酸链和适体构建自组装DNA核酸双链，在一种或多种靶目标(不同配体)的存在下，利用适体与配体的强结合力使自组装DNA核酸双链瓦解，释放出相应的单链核酸链与磁性微球载体上的互补DNA单链结合，通过磁性分离，利用不同化学发光探针进行化学发光检测相应的目标物。该自组装DNA核酸双链可以在同一个初始体系中检测多种目标物，为实际应用减少了检测时间、降低了检测成本，且该自组装DNA核酸链可以替换成其他目标物的适体链或检测两个及两个以上的目标物，具有广阔的应用前景。具有广阔的应用前景。具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种基于自组装DNA核酸链传感器的多种肿瘤标记物化学发光快速检测方法


[0001]本专利技术涉及分析化学医学检测
，结合核酸适配体技术，具体涉及一种基于自组装DNA核酸链传感器的多种肿瘤标记物化学发光快速检测方法。

技术介绍

[0002]甲胎蛋白(Alphafetoprotein，AFP)是一种70kDa的糖蛋白，含有约4％的碳水化合物，主要由妊娠期间的胎儿肝脏产生。正常情况下，甲胎蛋白血清浓度在小孩出生后急剧下降，成年后其合成受到极大抑制。然而，70％以上肝癌患者肿瘤排泄的AFP血清浓度较高，故临床将AFP作为肝癌及其他癌症的肿瘤标志物。因此，血清AFP的早期筛查对肿瘤患者临床早期诊断及预后中起着非常重要的作用。
[0003]三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate，ATP)作为细胞代谢的主要能量分子，在调节各种生命活动中起着不可替代的作用。大量研究表明，生物体中的ATP浓度与许多疾病密切相关，如低血糖、心血管疾病和一些恶性肿瘤。此外，ATP可作为细胞代谢的有效指标，实时监测一些肿瘤患者病程状况。因此，敏感、可靠本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于自组装DNA核酸链传感器的多种肿瘤标记物化学发光快速检测方法，其特征在于，涉及三磷酸腺苷适体(Aptl)、甲胎蛋白适体(Apt2)、信号DNA链1(S1)、桥梁DNA链(B)、信号DNA链2(S2)、与S1互补的DNA链(e1)、与S2互补的DNA链(C2)；其中，ATP可与Apt1特异性识别，AFP可与Apt2特异性识别，S1可与C1碱基互补配对，S2可与C2碱基互补配对，B主要用于辅助构造自组装DNA核酸链，C1、C2末端的氨基可与羧基修饰的磁性微球通过酰胺键结合；过程中，还使用了由链霉亲和素(SA)和辣根过氧化物酶(HRP)交联所得的辣根过氧化物酶标记链霉亲和素(SA
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HRP)，化学发光试剂苯甲酰甲醛(PG)；该方法包括以下步骤：1)将Apt1、Apt2、S1、B、S2混匀，充分反应；2)将步骤1)所得产物与AFP及ATP混匀，充分反应；3)通过氨羧反应将氨基修饰的C1固定在羧基磁性微球的表面，得到磁性微球
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C1复合物；4)将步骤2)所得产物与过量的磁性微球
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C1复合物混匀，反应后取固相；5)将步骤4)所得固相与SA
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HRP混匀，充分反应，即得检测AFP的化学发光生物传感器；6)将检测AFP的化学发光生物传感器与鲁米诺
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H2O2试剂混匀，而后检测化学发光CL值；7)通过氨羧反应将氨基修饰的C2固定在羧基磁性微球的表面，得到磁性微球
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C2复合物；8)将步骤4)反应的剩余溶液与过量的磁性微球
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C2复合物混匀，反应后取固相，即得检测ATP的化学发光生物传感器；9)将检测ATP的化学发光生物传感器与PG试剂混匀，而后检测化学发光CL值。2.根据权利要求1所述的一种基于自组装DNA核酸链传感器的多种肿瘤标记物化学发光快速检测方法，其特征在于，步骤1)包括以下步骤：分别取等量6μL、100μmol/L的Apt1、Apt2、S1、B、S2于1.5mL的离心管中，而后加入20μL的BA缓冲液，混匀后于80～100℃水浴锅中孵育4～6min。3.根据权利要求1所述的一种基于自组装DNA核酸链传感器的多种肿瘤标记物化学发光快速检测方法，其特征在于，步骤2)包括以下步骤：取10μL、10
‑8μmol/LAFP和10μL、10
‑8μmol/LATP于步骤1)所得溶液，混匀后于35～39℃震荡反应40～60min。4.根据权利要求1所述的一种基于自组装DNA核酸链传感器的多种肿瘤标记物化学发光快速检测方法，其特征在于，步骤3)包括以下步骤：取磁性微球，利用0.05～0.2M的咪唑缓冲溶液洗涤，而后取固相重悬于含有EDC的咪唑缓冲液中，于35～39℃震荡孵育15～25min，而...

【专利技术属性】
技术研发人员：严喜鸾，王魏，朱娅妃，程诗云，刘阿花，戈文楷，束庆磊，
申请(专利权)人：南昌大学，
类型：发明
国别省市：