一种用于检测早期肝癌的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种用于检测早期肝癌的试剂盒，涉及生物医学技术领域，其通过检测个体样本中ACY1和GP73的水平来确定个体是否有肝癌状况。本发明专利技术将ACY1和GP73这2种分子作为一个组合，检测待确诊肝癌个体血浆中两种生物分子的表达水平，可以有效筛查肝癌早期患者，且该联合检测，对AFP抗体表达阴性的个体也较为灵敏，其检测灵敏度为94.9％，特异性达到89.3％。89.3％。89.3％。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测早期肝癌的试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物医学
，具体涉及一种用于检测早期肝癌的试剂盒。

技术介绍

[0002]肝癌是世界上六大常见癌症之一，也是极易引发肿瘤相关疾病的一种癌症。在临床由于肝癌的起病较为隐匿，早期肝癌诊断困难，预后不良。目前针对肝癌的诊断方法是基于成像，如超声、计算机断层扫描(CT)、磁共振成像(MRI)等，再结合病患血浆中肿瘤标志物甲胎蛋白(AFP)的检测结果来联合判断。然而，就现状而言，肝癌患者中有很大一部分的AFP表达为阴性(AFP＜20ng/ml)，尤其在小肝癌(＜3cm)病患中，AFP阴性的比率高达52％。所以在针对AFP阴性肝癌(ANHC)诊断中，只能仅仅依靠影像学。再者，影像学诊断往往结合多种方式，价格较为昂贵；对病患来说，影像学诊断也存在一定侵入性风险。而利用生物标志物在肝癌诊断中，较为安全、快捷、经济，且可以重复准确检测。因此，我们急需一种或者两种全新生物标志物来提高肝癌的早期诊断。
[0003]氨基酰化酶1(aminoacylase
‑
1，ACY1)是一种位于染色体3P21.1位置上的同源二聚体锌指结合酶，它主要分布在人源细胞的细胞核内。在非小细胞肺癌(SCLC)细胞系以及肿瘤中，ACY1的表达较少，这就说明该在非小细胞肺癌中，ACY1很有可能是一个抑癌基因。高尔基蛋白73(GP73)，也称高尔基膜蛋白1(GOLM1)或者高尔基磷酸化蛋白2(GOLPH2)，位于胆管上皮细胞，且在正常肝细胞是不表达的。只有当患者患有病毒性或者非病毒性肝病时，肝细胞的GP73才会大量表达。临床上常用ELISA方法检测GP73。当血清GP73≥10U/ml(相对值)时，诊断肝细胞癌的敏感性为69％，特异性为75％。需要注意的是，GP73并不是一个肝细胞癌特异性标志物，它在肾细胞癌、前列腺癌中都有表达。同时，血清GP73升高不显著时，需与肝硬化相鉴别除此之外。目前也有很多研究表明，血浆中GP73浓度可以作为评估肝病，尤其是肝癌的指标之一。
[0004]因此，针对目前用于肝癌患者的肿瘤诊断方式单一、价格较为昂贵，且现有的生物分子标记物AFP敏感度和特异性不足以辨别AFP阴性肝癌或者小肝癌等现状，需要开发一类检测试剂盒，用来提示和诊断患者早期肝癌的进程，弥补AFP阴性患者诊断手段缺失的状况，在一定程度上改善肝癌早期诊断困难，具有非常良好的临床应用价值。

技术实现思路

[0005]针对现有肝癌的生物标志物AFP灵敏度和特异性不足以完全筛选肝癌患者，肝癌早期的诊断方式较为匮乏。对此，本专利技术提供一种灵敏度和特异性更高的试剂盒，能够更为精准的发现潜在肝癌对象，为早期肝癌筛查提供一种方便、快捷、经济的方式。
[0006]本专利技术的技术方案如下：
[0007]本专利技术提供了生物分子标志物作为检测靶点在制备用于检测早期肝癌的试剂盒中的应用，所述生物分子标志物为ACY1和GP73。
[0008]作为优选方案，检测的个体为生物标志物甲胎蛋白AFP为阴性的个体。
[0009]作为优选方案，检测的个体为肝癌灶直径小于3cm的个体。
[0010]作为优选方案，生物标志物甲胎蛋白AFP为阴性时，个体样本中生物标志物甲胎蛋白AFP的浓度≤20ng/ml。
[0011]本专利技术还提供了一种用于检测早期肝癌的试剂盒，其通过检测个体样本中ACY1和GP73的水平来确定个体是否为肝癌，所述试剂盒包括：
[0012](1)能够结合ACY1的抗体；
[0013](2)当ACY1结合于(1)中限定的抗体时，能够结合于(1)中限定的抗体或ACY1的标记抗体；
[0014](3)能够结合GP73的抗体；
[0015](4)当GP73结合于(3)中限定的抗体时，能够结合于(3)中限定的抗体或GP73的标记抗体；
[0016](5)由含有已知量ACY1的溶液组成的标准样，以及由含有已知量GP73的溶液组成的标准样。
[0017]优选的，所述样本是血浆或者血清；(5)中作为标准样的ACY1和GP73来源于基因工程细胞表达。
[0018]所述的试剂盒还包含引发剂溶液，如果将上述的(1)中限定的抗体称作ACY1第一抗体，将上述的(2)中限定的标记抗体称作ACY1第二抗体，将上述的(3)中限定的抗体称作GP73第一抗体，将上述的(4)中限定的标记抗体称作GP73第二抗体，所述引发剂溶液用于引发ACY1第二抗体和GP73第二抗体上的标记物与分别作为标记物反应对象的化学发光化合物或显色底物或者荧光染料之间的化学反应；
[0019]其中，ACY1第二抗体和GP73第二抗体上的标记物是过氧化物酶、磷酸酯酶或荧光素酶。
[0020]优选的，所述过氧化物酶为辣根过氧化物酶；ACY1第一抗体和GP73第一抗体固定在不同的固相载体上，所述固相载体是选自下组的固体支持物：微孔板、试管、样品杯、塑料微球、纤维素、纸质或塑料试验条、胶乳粒子、二氧化硅粒子、磁性粒子。
[0021]作为优选方案，所述个体为生物标志物甲胎蛋白AFP为阴性的个体。
[0022]作为优选方案，所述个体为肝癌灶直径小于3cm的个体。
[0023]本专利技术将ACY1和GP73这两种生物标记物作为一个组合检测肝癌患者两种分子的抗体表达水平，利用两种分子的抗体表达水平筛查和诊断肝癌的进展程度，筛选低危风险对象，其检测灵敏度高达94.9％(即受试者为肝癌患者时，这两种分子表达水平联合预测确诊为肝癌的比率为94.9％)，特异性达到了89.3％(即受试者为非肝癌患者时，这两种分子抗体表达水平联合预测为非肝癌患者的比率为89.3％)，因此，本专利技术所述试剂盒具有较高的灵敏度和特异性，可用于早期肝癌的筛查和诊断，对早期病患进行及时的临床干预，一定程度上做到及早发现，提早对症治疗，降低不良预后比例，该试剂盒在临床上具有非常可观的指导意义。
[0024]与现有技术相比，本专利技术的有益效果：
[0025](1)本专利技术将ACY1和GP73这两种生物标记物作为一个组合检测肝癌患者两种分子的抗体表达水平，检测待确诊肝癌个体血浆中两种生物分子的表达水平，可以有效筛查肝癌早期患者，且该联合检测，对AFP抗体表达阴性的个体也较为灵敏，其检测灵敏度为
94.9％，特异性达到89.3％。
[0026](2)本专利技术制备的试剂盒可同时检测个体样品中两种与癌症发展相关的生物分子表达水平，与两种生物分子的单独检测相比，联合检测检出成功率高，结果重现性好，精准度高，成本低，方法便捷，在早期肝癌的筛查和诊断具有参考意义。
附图说明
[0027]图1为试剂盒检测ACY1和GP73表达水平，R语言计算后得出ACY1，GP73或者两者联合的用于筛查和诊断肝癌患者的ROC曲线。
[0028]图2为试剂盒检测ACY1和GP73表达水平，R语言计算后得出ACY1，GP73或者两者联合的用于筛查和诊断AFP阴性肝癌患者的ROC曲线。
[0029]图本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.生物分子标志物作为检测靶点在制备用于检测早期肝癌的试剂盒中的应用，所述生物分子标志物为ACY1和GP73。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，检测的个体为生物标志物甲胎蛋白AFP为阴性的个体。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，检测的个体为肝癌灶直径小于3cm的个体。4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，生物标志物甲胎蛋白AFP为阴性时，个体样本中生物标志物甲胎蛋白AFP的浓度≤20ng/ml。5.一种用于检测早期肝癌的试剂盒，其特征在于，其通过检测个体样本中ACY1和GP73的水平来确定个体是否有肝癌状况，所述试剂盒包括：(1)能够结合ACY1的抗体；(2)当ACY1结合于(1)中限定的抗体时，能够结合于(1)中限定的抗体或ACY1的标记抗体；(3)能够结合GP73的抗体；(4)当GP73结合于(3)中限定的抗体时，能够结合于(3)中限定的抗体或GP73的标记抗体；(5)由含有已知量ACY1的溶液组成的标准样，以及由含有已知量GP73的溶液组成的标准样。6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述样本是血浆或者血清；(5)中作为标准样的ACY1和GP73...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐骁，魏绪勇，潘斌华，吴佳萍，苏仁义，疏文志，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：