灭活病毒污染物的方法技术

描述了本发明专利技术涉及一种用于从培养的细胞开始制备不含病毒污染物的含抗体溶液的方法。该方法包括使含抗体溶液经受溶剂和洗涤剂的混合物或经受高pH的步骤。混合物或经受高pH的步骤。混合物或经受高pH的步骤。

【技术实现步骤摘要】
灭活病毒污染物的方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请是于2018年8月27日提交的申请号为201880054111.7的中国专利申请的分案申请。


[0003]本专利技术涉及病毒灭活的方法。特别地，本专利技术涉及含有治疗性抗体的无病毒溶液的生产。本专利技术还涉及用于生产原料药物质的方法，该方法包括纯化治疗性抗体和病毒灭活处理的步骤。

技术介绍

[0004]当将蛋白类的生物分子用作治疗疾病的药物时，其生产过程被设计为确保人类健康。通常用于生产治疗性蛋白的细胞培养物和其它生物材料可能会被病毒污染，这些病毒可能存在于原料中，也可能在生产过程期间被引入。如果不除去或不可逆转地灭活，病毒污染物代表使用该药物的个体健康的风险。因此，为了制造可安全用于人类的药物，要求了生产的蛋白质不含活性病毒污染物(CPMP/ICH/295/95)。
[0005]为了产生治疗性蛋白，进行纯化过程以将其与其余的起始混合生物材料分离。纯化步骤(例如色谱和过滤)有助于除去病毒，并与特定病毒灭活技术组合以确保病毒清除。病毒灭活的方法是本领域众所周知的。一种用于确保血浆产品中病毒灭活的方法由用溶剂/洗涤剂(S/D)混合物处理所述等离子产品组成，该产品通过溶解病毒脂质包膜而损害病毒活性，如由世界卫生组织(WHO)技术报告附件4指南所建立。已经对该处理进行优化以允许在一次性袋子系统中对血浆产品进行S/D处理(Hsieh,YT等人Transfusion.2016Jun；56(6):1384
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93)；与WHO技术报告附件4指南(WO2012082931)指出的方法相比，在较低温度和较短时间条件下处理重组VIII因子。另外，在非商业领域中，研究规模的S/D处理已被用作含有来自人类杂交瘤细胞系的样品的抗
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D抗体的额外病毒清除步骤(Roberts PL,Biotechnol Prog.2014Nov
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Dec；30(6):1341
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7)。还可以通过用低pH处理(Shukla AA at al.,Pharm.Bioprocess.,2015,3(2):127
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138)或导致病毒蛋白变性的高温(巴氏灭菌)(US4749783)来实现灭活。这些处理针对包膜和非包膜病毒均有效，但它们可能与所有治疗性蛋白均不兼容，因为它们也可能容易变性。
[0006]一类重要的治疗性蛋白是单克隆抗体，该抗体可以具有天然结构，例如由动物体产生的一种抗体，以及已经工程化以多种方式增强其特性的抗体。抗体可用作治疗和诊断多种疾病的药物，包括不同类型的癌症和免疫系统障碍。通常使用转染的细胞系商业生产单克隆抗体，该细胞系包含抗体的编码序列，它们在受控的细胞培养条件下大规模生长，并然后被收获。收获后，将抗体纯化，且在纯化过程中病毒灭活的标准程序包括在低pH下温育样品(WO2010048192；Liu HF等人MAbs.2010 Sep
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Oct；2(5):480
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99)。
[0007]抗体可能易受非生理条件(例如低pH)的影响，并且当设计成具有增强的效应子功能或优先形成异二聚体而不是同二聚体时，它们可能更容易降解。随着基于抗体的疗法继
续扩大以及这些产品的复杂性也在扩大，需要开发新型病毒灭活策略。
[0008]另外，治疗性蛋白(例如抗体)的纯化过程可能与通常用于病毒灭活的低pH不兼容，因此，提供可用的替代病毒灭活方法将有助于纯化过程的开发和改进。
[0009]本专利技术涉及用于商业生产抗体的病毒灭活的新型方法，对于这些方法，现有的病毒灭活方法不起作用或导致抗体产品的降解或导致某些其它不希望的结果或与抗体纯化过程不兼容。

技术实现思路

[0010]本专利技术涉及在治疗性蛋白(例如抗体)的纯化过程中采用的病毒灭活的新方法。抗体纯化过程中所用的经典方法是在低pH下温育含抗体的溶液。然而，纯化过程的优化可能导致与低pH不兼容步骤的开发。另外，已经观察到对于低pH可靠的抗体，该方法不合适，因为它损害了抗体的稳定性。本专利技术提出的病毒灭活的新型方法允许克服这些问题。
[0011]特别地，本专利技术涉及一种用于在抗体纯化过程期间制备无病毒污染的抗体溶液的方法，其中，所述无病毒抗体溶液的制备从表达抗体的转染细胞的培养开始，并且包括以下步骤：(i)收获由转染的细胞产生的抗体材料，和(ii)通过溶剂洗涤剂或高pH处理抗体收获材料。
[0012]更具体地讲，本专利技术涉及一种制备病毒灭活的抗体溶液的方法，其包括以下步骤：(i)收获由转染的细胞产生的抗体材料，所述转染的细胞包含已经过细胞培养的所述抗体的编码序列，(ii)对所述收获的抗体材料进行病毒灭活处理，所述处理选自由与溶剂和洗涤剂的混合物温育或在高pH下温育组成的组。
[0013]在一个实施方式中，本专利技术的收获的抗体材料是在非人类哺乳动物细胞中产生的。
[0014]在另一个实施方式中，本专利技术的收获的抗体材料包含单克隆抗体。在一个更具体的实施方式中，该单克隆抗体是重组抗体。在一个特定方面，所述重组抗体是多特异性的。
[0015]在本专利技术的一个实施方式中，将收获的抗体材料与溶剂和洗涤剂的混合物温育，其中所述溶剂是TnBP，并且其中所述洗涤剂选自由Triton X
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100、聚山梨酯80和聚山梨酯20组成的组。
[0016]在一个更具体的实施方式中，所述TnBP的浓度等于或大于约0.1％(w/w)，并且等于或小于约1％(w/w)，特别地，所述TnBP的浓度选自包含以下的组：约0.1％(w/w)、约0.3％(w/w)、约0.5％(w/w)和约1％(w/w)。
[0017]在另一个具体实施方式中，所述聚山梨酯80或所述聚山梨酯20的浓度等于或大于约0.1％(w/w)，并且等于或小于约2％(w/w)，特别地，所述聚山梨酯80或所述聚山梨酯20的浓度选自包含以下的组：约0.2％、约0.5％(w/w)、约0.75％(w/w)、约1％(w/w)、约1.25％(w/w)。
[0018]在一个更具体的实施方式中，所述溶剂和洗涤剂的混合物选自由0.3％(w/w)TnBP和0.5％(w/w)聚山梨酯80的混合物、以及0.3％(w/w)TnBP和1％(w/w)聚山梨酯80的混合物组成的组。
[0019]更具体地，将所述收获的抗体材料与0.3％(w/w)TnBP和1％(w/w)聚山梨酯80的混合物温育至少5分钟。
[0020]在一个具体实施方式中，首先将所述收获的抗体材料进行蛋白A色谱，并且其中将所得的蛋白A洗脱液与0.3％(w/w)TnBP和1％(w/w)聚山梨酯80的混合物在室温下温育至少10分钟。
[0021]在另一个具体实施方式中，所述收获的抗体材料是澄清收获物，并且与0.3％(w/w)TnBP和1％(w/w)聚山梨酯80的混合物在室温在搅拌下温育约60分钟。
[0022]在本专利技术的一个实施方式中，将收获的抗体材料在高本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于制备病毒灭活的抗体溶液的方法，其包括以下步骤：(i)收获由转染的细胞产生的抗体材料，所述转染的细胞包含已经过细胞培养的所述抗体的编码序列，(ii)对所述收获的抗体材料进行病毒灭活处理，其中所述病毒灭活处理是在高pH下温育。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述收获的抗体材料是在非人类哺乳动物细胞中产生的。3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述收获的抗体材料包含单克隆抗体。4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述单克隆抗体是重组抗体。5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述重组抗体是多特异性的。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的方法，其中，所述高pH为9或更高且12.5或更低。7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述高pH为至少10.5。8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述高pH为约11。9.根据权利要求6
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8中任一项所述的方法，其中，首先将所述收获的抗体材料进行蛋白A色谱，并且其中，将所得的A洗脱液在所述高pH下温育。10.根据权利要求9所述的方法，其中，将所述蛋白A洗脱液用选自以下组的缓冲液滴定至目标高pH并温育：Tris、组氨酸L
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精氨酸、磷酸盐和NaOH。11.根据权利要求6
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7中任一项所述的方法，其中，将所述蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：F，
申请(专利权)人：伊克诺斯科学公司，
类型：发明
国别省市：