狼疮性肾炎疗效评估用标志物及应用制造技术

本发明专利技术涉及狼疮性肾炎诊断治疗领域，尤其公开了一种狼疮性肾炎疗效评估用标志物及应用，本发明专利技术提供了定量检测标志物的试剂在制备用于预后评估、诊断或监测肾脏疾病产品中的应用，所述标志物为DC3细胞，所述DC3为CD1c

【技术实现步骤摘要】
狼疮性肾炎疗效评估用标志物及应用


[0001]本专利技术涉及狼疮性肾炎诊断治疗领域，尤其涉及狼疮性肾炎疗效评估用标志物及应用。

技术介绍

[0002]狼疮性肾炎（LN）是系统性红斑狼疮（SLE）最严重的表现之一，影响50~80%的SLE患者。尽管采用了先进的免疫抑制疗法，但仍有高达60%的LN患者无法获得完全缓解，而这些患者中有10~20%在10年内发展为终末期肾病（ESKD）。即使有精心设计的临床试验，也难以实现新的治疗性策略。这些不令人满意的情况增加了进一步研究疾病进展和个体异质性背后的致病机制的需要。
[0003]目前关于LN发病机制的知识表明，该疾病涉及多种细胞类型以及免疫和非免疫机制。B细胞可通过分泌直接针对结构细胞的自身抗体诱导肾损伤，而细胞毒性CD8
+ T细胞和CD4
+ T辅助（Th）细胞通过直接细胞毒性或促进B细胞分化和活化来驱动肾脏炎症。然而，小鼠研究表明，尽管有IC沉积，但Fcγ受体的缺乏或树突状细胞（DC）耗竭会消除LN肾脏中的T细胞活化和白细胞聚集，这意味着先天免疫细胞在人类疾病的免疫发病机制中的关键作用尚未明确。此外，肾结构细胞诸如内皮细胞、足细胞和肾小管上皮细胞被认为不仅是被动的受害者，而且是局部炎症的积极参与者。它们可在炎症状态期间通过免疫原性基因表达和细胞因子产生重塑肾脏微环境。尽管有多种细胞类型被认为与LN有关，并且它们复杂的细胞相互作用的结果与肾损伤程度密切相关，并可能影响LN患者的治疗结果，但它们的确切表型和在疾病进展中的作用仍不清楚。因此，对LN肾脏进行全面、深入的细胞分析，以鉴定出疾病相关联细胞类型，将有助于更好地理解致病机制，并为治疗性决策提供更精确的患者分层。
[0004]最近的高维转录组学和蛋白质组学分析重新鉴定了人类血液DC，并揭示了2型常规DC（cDC2）谱系中的炎性DC3亚群。这类DC3在SLE的血液中累积并与其疾病活动性相关。然而，DC3亚群是否存在于LN患者的肾脏中尚不清楚。
[0005]另外，单细胞测序可精准剖析样本中的细胞组分，揭示微环境中的细胞类型和不同细胞之间复杂的相互作用关系，既往已有研究通过对肾穿刺样本进行scRNAseq探究了正常情况下固有细胞与免疫细胞的crosstalk，并有scRNAseq解析了LN肾脏免疫细胞及肾小管上皮细胞的功能状态，但是，对LN肾脏微环境的全面解构仍然缺乏，细胞之间如何互作调控免疫网络仍有待探索。

技术实现思路

[0006]本专利技术主要的目的是解决
技术介绍
中存在的问题，为实现该目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了标志物为DC3，所述DC3为 CD1c
+
CD163
+
或CD11c
+
CD163
+
树突细胞，定量检测这些标志物的试剂应用在制备预后评估、诊断或监测肾脏疾病产品中。
[0007]作为一个具体实施例，所述DC3为 CD88
‑
CD1c
+
CD163
+
树突细胞。
[0008]作为一个具体实施例，所述DC3为 CD88
‑
CD11c
+
CD163
+
树突细胞。
[0009]可以理解的是，本专利技术中定量检测这些标志物是指任何可以检测这些标志物的方法或步骤中所使用的试剂，包括但是不限于对照物，标准品和检测试剂等，也可以理解的是检测这些标志物试剂形成的产品是指市场上一切包含检测该标志物的产品，包括但是不限于试剂盒。
[0010]在一些具体的实施例中，所述标志物还包括iPT（受损的近端肾小管上皮细胞）、Th17、Th1、GZMB+或GZMK+活化的细胞毒性T细胞中的一种或多种。
[0011]作为一些优选的实施例，所述标志物选自以下任一细胞群： DC3、Th1和Th17组合；DC3和iPT组合；DC3、GZMB+或GZMK+活化的细胞毒性T细胞。
[0012]作为一种实施方式，所述Th1的标记基因为IFNG。
[0013]作为一种实施方式，所述Th17的标记基因为IL17A。
[0014]作为一种实施方式，所述iPT的标记基因为SOX9和/或VCAM1。
[0015]作为一种区分所述DC3与cDC2的其他亚群及血液中的DC3的方法，可选的，在一些实施例中，可以进一步的检测相对比差异性表达下列标记基因中的一种或者多种：促炎基因、募集T细胞的趋化因子基因、MHC
‑
II分子、共刺激分子，所述促炎基因包括TNF或IL1B；所述募集T细胞的趋化因子基因包括CCL17或CCL22，所述MHC
‑
II分子包括HLA，所述共刺激分子包括CD40、CD80或CD86。
[0016]作为另一种区分所述DC3与cDC2的其他亚族的方法，可选的，在一些实施例中，进一步检测，相对比成熟过程中上调下列标记基因中的一种或者多种：STAT4、RELB。
[0017]在一些实施例中，所述免疫性肾病可选的，为狼疮性肾炎、紫癜性肾炎、IgA肾病或ANCA相关性肾小球肾炎。优选的，所述肾脏疾病为狼疮性肾炎。
[0018]在各种实施方案中，由于在受试者的样品中表征上述任一所述的标志物，通过鉴定/测量在受试者的样品中的存在/数量/水平/比例，可以给出在所述受试者中身体应答，例如狼疮性肾炎的水平/严重度/程度/负荷/攻击性/疾病阶段/疾病状态的指示，具体的，如在受试者中诊断身体应答和/或疾病，确定在所述受试者中身体应答和/或疾病的预后，和确定在所述受试者中身体应答和/或疾病的改善和/或恶化。
[0019]具体的，在一些实施方式中，用于预后评估、诊断或监测狼疮性肾炎的方法为，测定在受试者的样品中所述标志物至少一种的数量，其中所述数量与所述受试者中狼疮性肾炎的严重程度呈正相关。应当可以理解的是此处的正相关与负相关是相对于的，而此处所表达的是本专利技术所提供的标志物是疾病越严重，标志物的数量越多。
[0020]在一些实施方式中，可选的，通过测定受试者样品中至少一种标志物的数量，当其数量大于源自对照样品的阈值时，判断受试者疾病存在或者病理分级。
[0021]可选择的，对照样品可以是满足未患有狼疮性肾炎的临床诊断相关标准的样本(如正常人样本)或已经确定患有狼疮性肾炎的样本中的标志物的表达水平的关键值(如中值、最小值、最大值或其倍数值)为阈值，因对照样品的不同，具体应用时，在一些实施例中，当在测试样品中至少一种标志物的数量大于在来自相同受试者的早期样品中的数量时，鉴定出在受试者疾病的恶化，当在测试样品中标志物数量低于在早期样品中的数量时，鉴定出在受试者中疾病的改善。
[0022]可以理解的是，病理分级可以采用现有国际分级标准，也可以是自定义的某种分级标准，目前优选的，所述病理分级采用2003年国际肾脏病学会和国际病理学学会的分类标准，主要是分为六型，包括Ⅰ型指轻微系膜性狼疮肾炎、Ⅱ型是系膜增生性狼疮肾炎、Ⅲ型是局灶增生本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.定量检测标志物的试剂在制备用于预后评估、诊断或监测免疫性肾病产品中的应用，其特征在于，所述标志物为DC3细胞，所述DC3为 CD1c
+
CD163
+
或CD11c
+
CD163
+
树突细胞。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述DC3为 CD88
‑
CD1c
+
CD163
+
树突细胞或CD88
‑ CD11c
+
CD163
+
树突细胞。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述标志物还包括iPT（受损的近端肾小管上皮细胞）、Th17、Th1、GZMB+或GZMK+活化的细胞毒性T细胞中的一种或多种。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述标志物选自以下任一细胞群： DC3、Th1和Th17组合；DC3和iPT（受损的近端肾小管上皮细胞）组合；DC3、GZMB+或GZMK+活化的细胞毒性T细胞。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述Th1的标记基因为IFNG。6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述Th17的标记基因为IL17A。7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述iPT（受损的近端肾小管上皮细胞）的标记基因为SOX9和/或VCAM1。8.根据权利要求1
‑
7任一所述的应用，其特征在于，所述免疫性肾病包括狼疮性肾炎、紫癜性肾炎、IgA肾病或ANCA相关性肾小球肾炎。9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述免疫性肾病为狼疮性肾炎。10.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品为试剂盒。11.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，用于预后评估、诊断或监测狼疮性肾炎的方法为，测定在受试者的样品中所述标志物至少一种的数量，其中所述数量与所述受试者中狼疮性肾炎的严重程度呈正相关。12.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，测定受试者样品中至少一种标志物的数量，当其数量大于源自对照样品的阈值时，判断受试者疾病存在或者病理分级。13.根据权利要求12所述的应用，其特征在于，所述病理分级采用2003年国际肾脏病学会和国际病理学学会的分类标准，主要是分为六型，包括Ⅰ型指轻微系膜性狼疮肾炎、Ⅱ型是系膜增生性狼疮肾炎、Ⅲ型是局灶增生性狼疮肾炎、Ⅳ型是弥漫增生性狼疮肾炎、
Ⅴ
型指膜性狼疮肾炎、
Ⅵ
型指硬化性狼疮肾炎。14.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，当在测试样品中至少一种标志物的数量大于在来自相同受试者的早期样品中的数量时，鉴定出在受试者疾病的恶化，当在...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋小云，陈崴，彭穗，王芳，
申请(专利权)人：中山大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：