一种基于Q-TOF-MS的姜半夏中掺伪姜虎掌的鉴定方法技术

本发明专利技术公开了一种基于Q

【技术实现步骤摘要】
一种基于Q
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TOF
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MS的姜半夏中掺伪姜虎掌的鉴定方法


[0001]本专利技术涉及半夏鉴别
，特别是涉及一种基于Q
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TOF
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MS的姜半夏中掺伪姜虎掌的鉴定方法。

技术介绍

[0002]半夏为天南星科半夏属植物半夏Pinelliaternata(Thunb.)Breit.的干燥块茎，具有燥湿化痰，降逆止呕，消痞散结的功效；用于湿痰寒痰，呕吐反胃，梅核气等。虎掌作为最常见的半夏伪品，又名掌叶半夏，为天南星科半夏属植物掌叶半夏PinelliapedatisectaSchott的干燥块茎，个小者常冒充半夏使用，两者外观极为相似，经加工炮制后更加难以鉴别。
[0003]半夏和虎掌为同科同属植物，因此所含化学成分的种类极其相近，已有文献报道通过显微鉴别、光谱色谱分析、PCR技术并结合统计学分析，建立半夏及其伪品的指纹谱图谱，寻找DNA特征片段等方法加以区别研究，但均专属性不强，且不能就掺伪进行定量检测。有研究报道水麦冬酸是虎掌具有而半夏不含的特征性成分，可以采用液相色谱法加以鉴别，可是聂黎行等(聂黎行，康帅，张南平，等.高分离度快速液相色谱
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三重串联四极杆质谱快速检查半夏和虎掌中水麦冬酸[J].药物评价研究，2018，41(9)：1640
‑
1643.)采用液相
‑
三重四极杆质谱联用仪对11批半夏和7批虎掌研究证实，半夏中也含有少量水麦冬酸，水麦冬酸并非虎掌的特征性成分，且炮制后虎掌的水麦冬酸也会消失。因此只研究药材的成分差异而不研究其炮制品，存在一定的局限性。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足，提供一种基于Q
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TOF
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MS的姜半夏中掺伪姜虎掌的鉴定方法，基于Q
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TOF采集质谱数据，通过MPP软件对炮制后的半夏和虎掌的差异成分进行研究，为半夏炮制品的掺伪检测提供可靠的依据，为中药质量评价提供有力保障。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0006]一种基于Q
‑
TOF
‑
MS的姜半夏中掺伪姜虎掌的鉴定方法，包括以下步骤：
[0007](1)标准样品溶液制备：分别等量称取来源确切的姜半夏、姜虎掌样品，分别加入甲醇后浸渍、超声处理，冷却至室温，离心、微孔滤膜过滤，各取续滤液，得到各标准样品溶液；
[0008](2)提取标准样品的化合物分子特征，以MFE算法寻找化合物：采用液相色谱
‑
飞行时间质谱联用仪对步骤(2)制备的标准样品溶液进样，采集总离子流数据；通过Profinder软件对总离子流数据进行处理，通过离子精确质量数、同位素簇峰、同位素簇峰间隔与理论值比较的方法，寻找样品中化合物，并将结果生成含有化合物信息的CEF格式文件；
[0009](3)标准样品特征化合物分析及建模：将生成的CEF格式文件导入MPP软件中，进行姜半夏和姜虎掌差异化合物统计分析；创建最小二乘判别分析模型，并检查PLS
‑
DA模型图
和分组的拟合度R2预测能力Q2，建立MPP模型；
[0010](4)待测样品溶液制备：待测样品中加入甲醇后浸渍、超声处理，冷却至室温，离心、微孔滤膜过滤，续滤液即为待测样品溶液；
[0011](5)待测样品特征化合物提取：采用液相色谱
‑
飞行时间质谱联用仪对待测样品溶液进样，采集总离子流数据，进行特征化合物提取；
[0012](6)结果调取与预测：将步骤(5)提取的待测样品特征化合物信息调入MPP模型中进行预测。
[0013]标准样品溶液的具体制备方法为：分别称取标准样品各0.5g，分别加入75v/v％甲醇20mL，浸渍、超声处理，冷却至室温，离心后经微孔滤膜过滤，分别取续滤液，作为标准样品溶液。
[0014]标准样品为10种姜半夏和10种姜虎掌。
[0015]步骤(2)中，设置化合物寻找条件，最小绝对响应值≥5000counts，化合物保留时间偏差
±
0.3min，质量偏差
±
(15ppm+2.0mDa)，化合物元素组成主要为C、H、O、N、S、Cl。
[0016]步骤(3)中，采用MPP软件进行姜半夏和姜虎掌差异化合物统计分析的具体步骤为：(a)根据采集数据信息将文件分成姜半夏和姜虎掌两组，再次对样品中寻找到的化合物进行过滤，设置离子最小绝对响应值≥500000counts，保留时间偏差≤0.15min，质量偏差
±
(15ppm+2.0mDa)，化合物归一化百分偏移值为75％，选择中位值加权各化合物来表示样品偏离程度；(b)对过滤后的数据进行差异分析，建立统计分析实验数据；(c)通过MPP软件的主成分分析方法，建立基于化合物差异的两组数据的差异性，并寻找到两组之间的差异化合物。
[0017]步骤(b)中，软件设置参数为：化合物至少在9个样品有可接受的值，显著性分析中，选择T
‑
检验最大P＜0.01，最小倍数变化值FC＜2.0。
[0018]待测样品溶液的具体制备方法为：称取待测样品0.5g，加入75v/v％甲醇20mL，浸渍、超声处理，冷却至室温，离心后经微孔滤膜过滤，取续滤液作为待测样品溶液。
[0019]标准样品与待测样品的特征化合物提取时，液相色谱条件均为：4.6mm
×
150mm、3μm的Agilent InfinityLabPoroshell 120EC
‑
C
18
色谱柱；流动相为甲醇
‑
5mmol乙酸铵梯度洗脱；流速为0.4mL/min；柱温为40℃；进样体积为3μL；
[0020]质谱条件均为：电喷雾离子化；以氮气为载气，载气流速8L/min，载气温度300℃，鞘气流速11L/min，鞘气温度350℃，碎裂电压135V；离子模式为正离子。
[0021]本专利技术的有益效果是：通过高分辨液质联用仪和MPP统计软件对半夏及其伪品虎掌的姜制炮制品的化学成分进行分析，找到姜虎掌特有的成分，选择含量较高的作为姜半夏掺姜虎掌的鉴别成分，并建立具有一定预测性的数据模型，从而作为高鉴别正确率的掺伪鉴别的手段，应用于半夏炮制品掺伪检测，为中药质量评价提供有力保障。
附图说明
[0022]图1为标准样品姜半夏的总离子流图(A)及MFE寻找到化合物叠加图(B)；
[0023]图2为标准样品姜虎掌的总离子流图(A)及MFE寻找到化合物叠加图(B)；
[0024]图3为姜半夏和姜虎掌两组标准样品的PCA分析结果(A代表姜半夏，B代表姜虎掌)；
[0025]图4为待测样品为100％姜半夏的模型预测结果；
[0026]图5为待测样品为100％姜虎掌的模型预测结果；
[0027]图6本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于Q
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TOF
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MS的姜半夏中掺伪姜虎掌的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)标准样品溶液制备：分别等量称取来源确切的姜半夏、姜虎掌样品，分别加入甲醇后浸渍、超声处理，冷却至室温，离心、微孔滤膜过滤，各取续滤液，得到各标准样品溶液；(2)提取标准样品的化合物分子特征，以MFE算法寻找化合物：采用液相色谱
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飞行时间质谱联用仪对步骤(2)制备的标准样品溶液进样，采集总离子流数据；通过Profinder软件对总离子流数据进行处理，通过离子精确质量数、同位素簇峰、同位素簇峰间隔与理论值比较的方法，寻找样品中化合物，并将结果生成含有化合物信息的CEF格式文件；(3)标准样品特征化合物分析及建模：将生成的CEF格式文件导入MPP软件中，进行姜半夏和姜虎掌差异化合物统计分析；创建最小二乘判别分析模型，并检查PLS
‑
DA模型图和分组的拟合度R2预测能力Q2，建立MPP模型；(4)待测样品溶液制备：待测样品中加入甲醇后浸渍、超声处理，冷却至室温，离心、微孔滤膜过滤，续滤液即为待测样品溶液；(5)待测样品特征化合物提取：采用液相色谱
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飞行时间质谱联用仪对待测样品溶液进样，采集总离子流数据，进行特征化合物提取；(6)结果调取与预测：将步骤(5)提取的待测样品特征化合物信息调入MPP模型中进行预测。2.如权利要求1所述一种基于Q
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TOF
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MS的姜半夏中掺伪姜虎掌的鉴定方法，其特征在于，标准样品溶液的具体制备方法为：分别称取标准样品各0.5g，分别加入75v/v％甲醇20mL，浸渍、超声处理，冷却至室温，离心后经微孔滤膜过滤，分别取续滤液，作为标准样品溶液。3.如权利要求1或2所述一种基于Q
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TOF
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MS的姜半夏中掺伪姜虎掌的鉴定方法，其特征在于，标准样品为10种姜半夏和10种姜虎掌。4.如权利要求1所述一种基于Q
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TOF
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MS的姜半夏中掺伪姜虎掌的鉴定方法，其特征在于，步骤(2)中，设置化合物寻找条件，最小绝对响应值≥5000counts，化合物保留时间偏差
±
0.3min，质量偏差
±
(15ppm+...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢浙裕，毛威，吕林锋，邓俊杰，劳丽莉，
申请(专利权)人：绍兴市食品药品检验研究院，
类型：发明
国别省市：