一种同时测定肉类中多种β-受体激动剂的液质联用检测方法技术

本发明专利技术涉及一种同时测定肉类中多种β

【技术实现步骤摘要】
一种同时测定肉类中多种
β
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受体激动剂的液质联用检测方法


[0001]本专利技术涉及食品检测领域，具体涉及一种测定肉类中β
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受体激动剂的检测方法。

技术介绍

[0002]肉类因其含有丰富的营养价值，一直是人类饮食的基本组成部分，随着生活水平的提高，肉类消费量呈现逐年增长的趋势。近年来人们的健康观念由高脂肪、高能量食物的摄入转向消费低脂、低糖的食物改变，这也给传统的畜禽养殖带来了改变，如瘦肉型的生猪更受到人们的青睐。
[0003]β
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受体激动剂又称β
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兴奋剂，是一类具有肾上腺素功能的苯乙醇胺类人工合成化合物，起初被开发是用于治疗人或动物的子宫、呼吸系统和心血管疾病。后来研究人员发现当β
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受体激动剂的使用剂量超过治疗剂量5
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10倍时，可以减少脂肪沉积、促进蛋白质合成、显著提高胴体的瘦肉率和饲料转换率。因此，不法商家开始在动物饲料中添加β
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受体激动剂以谋取非法利益。
[0004]β
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受体激动剂化学结构稳定，常常在动物体内难以降解，容易经过食物链进一步在人体内残留，当人体积累到一定量时会导致严重的不良反应，如肌肉振颤、头晕、心跳加速或急性中毒，甚至直接导致死亡。
[0005]为了保护消费者的健康，许多国家或组织对β
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受体激动剂的使用做出了相关规定，如欧盟立法禁止所有用于动物促生长作用的β
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受体激动剂，同时限定了各类动物组织中的最大残留限量(MRLs)。中国也明文禁止在饲料和动物饮用水中使用此类药物，并将β
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受体激动剂类药物作为国家农产品质量安全监督抽查和例行监测的物质。美国、加拿大、日本等国家规定了残留标准，但没有禁止使用所有β
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受体激动剂。由此可见，制定科学准确的β
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受体激动剂检测方法不仅保障动物源性食品安全，也是应对国际贸易壁垒的有效措施。
[0006]目前饲料及动物性食品中对β
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受体激动剂类药物的分析方法主要有免疫筛选方法和仪器确证方法。免疫筛选方法包括酶联免疫法(Enzyme
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linked Immunosorbent Assay，ELISA)和胶体金免疫层析法(Gold ImmunochromatographyAssay，GICA)。仪器分析方法有毛细管电泳法(Capillary Electrophoresis，CE)、气相色谱
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串联质谱法(Gas Chromatography
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mass Spectrometry，GC
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MS)、液相/超高效液相色谱
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串联质谱法(Liquid Phase/Ultra High Performance Liquid Chromatography
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Mass Spectrometry，LC/UPLC
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MS/MS)等。此外，近年来又有拉曼、传感器和生物芯片法等方法。其中免疫筛选方法存在抗原抗体制备困难、检测灵敏度不高、易出现假阳性结果的问题，常常只用于市场的日常筛选检测，传感器等新型的检测方法应用较少，有待进一步研究。仪器确证方法中的UPLC
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MS/MS法属于LC
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MS/MS法，因其分析时间更短、灵敏度和准确度更高的优点，已成为目前主流定性和定量手段，其检测过程一般包括酶解、有机溶剂提取、固相萃取净化、上机测定等操作，然而该方法具有前处理操作较为繁琐费时、有机溶剂消耗大、检测种类较少等缺点。
[0007]为有效控制动物源性食品中β
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受体激动剂的残留问题，目前亟待专利技术一种前处理快速简单、能同时准确测定多种β
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受体激动剂的分析检测方法。

技术实现思路

[0008]为解决上述技术问题，本专利技术包括以下几个方面：
[0009]本专利技术的第一方面提供一种同时测定肉类中多种β
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受体激动剂的液质联用分析检测方法，所述方法包括以下步骤：
[0010](1)酶解：称取均质后的肉类，加入乙酸铵和水解酶，混匀后避光酶解，离心取上清液；
[0011](2)提取：在步骤(1)的上清液中加入有机溶剂，提取后加入NaCl沉淀蛋白，涡旋后离心，取上清液；
[0012](3)纯化：取步骤(2)的上清液过一步法萃取柱，将收集的滤液用氮气吹干，用复溶液复溶，充分混匀后过滤，得待测样品；
[0013](4)测定：使用超高效液相色谱
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串联质谱仪对步骤(3)的待测样品进行检测；其中色谱条件为：色谱柱为反相色谱柱，流动相为水
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有机溶剂二元溶剂体系，洗脱方式为梯度洗脱程序。
[0014]优选的，所述步骤(1)中的肉类为猪肉、牛肉或羊肉。
[0015]优选的，所述步骤(1)中的肉类酶解前加入100μg/L的内标工作液。
[0016]优选的，所述步骤(1)中的乙酸铵的浓度为0.2mol/L。
[0017]优选的，所述步骤(1)中的水解酶为β
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葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶。
[0018]优选的，所述步骤(1)中的酶解条件是40℃下酶解2h。
[0019]优选的，所述步骤(1)中的离心条件是10000r/min高速离心机中在4℃下离心5min。
[0020]优选的，所述步骤(2)中的有机溶剂是含1％乙酸的乙腈。
[0021]优选的，所述步骤(2)中的离心条件是4℃下10000r/min离心5min。
[0022]优选的，所述步骤(3)中的萃取柱选自Oasis MCX柱、Oasis HLB柱、Bond Elut C18柱或者Qvet
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AG柱。
[0023]更优选的，所述步骤(3)中的萃取柱是Qvet
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AG柱。
[0024]优选的，所述步骤(3)中的复溶液是体积比为90：10的0.1％甲酸水：甲醇溶液。
[0025]优选的，所述步骤(3)中的过滤是通过0.22μm PTFE有机相滤膜。
[0026]最优选的，所述方法包括如下步骤：准确称取均质后的猪、牛、羊肌肉组织2.00
±
0.02g，置于50mL离心管中，加入浓度为100μg/L的混合内标工作液50μL、0.2mol/L的乙酸铵10mL和40μLβ
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葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶，涡旋混匀1min，置于40℃下避光水酶解2h，酶解后冷却至室温，涡旋1min后于10000r/min高速离心机中在4℃下离心5min，取上清液置于另一洁净50mL离心管中，加入10mL含1％乙酸的乙腈提取，并加入2gNaCl沉淀蛋白，涡旋5min后，4℃下10000r/min离心5min，取上清液2mL过Qvet...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同时测定肉类中多种β
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受体激动剂的液质联用分析检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)酶解：称取均质后的肉类，加入乙酸铵和水解酶，混匀后避光酶解，离心取上清液；(2)提取：在步骤(1)的上清液中加入有机溶剂，提取后加入NaCl沉淀蛋白，涡旋后离心，取上清液；(3)纯化：取步骤(2)的上清液过一步法萃取柱，将收集的滤液用氮气吹干，用复溶液复溶，充分混匀后过滤，得待测样品；(4)测定：使用超高效液相色谱
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串联质谱仪对步骤(3)的待测样品进行检测；其中色谱条件为：色谱柱为反相色谱柱，流动相为水
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有机溶剂二元溶剂体系，洗脱方式为梯度洗脱程序。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的水解酶为β
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葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的有机溶剂是含1％乙酸的乙腈。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中的萃取柱选自Oasis MCX柱、Oasis HLB柱、Bond Elut C18柱或者Qvet
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AG柱。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中的复溶液是体积比为90：10的0.1％甲酸水：甲醇溶液。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)中的色谱柱选自ACQUITY UPLC HSS C18柱、Thermo scientific Hy...

【专利技术属性】
技术研发人员：王玮，鄢永红，成昕，韦田，周嘉明，吕青骎，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：