抗TIGIT抗体制造技术

本发明专利技术属于基因工程领域，具体涉及一种特异性结合具有Ig和ITIM结构域的人T细胞免疫受体(TIGIT)蛋白的抗体或抗原结合片段；本发明专利技术的抗体或抗原结合片段能够特异性结合TIGIT抗原，阻断TIGIT与其配体的结合，具有明显的肿瘤生长抑制作用，并且能够用于制备预防或治疗与TIGIT相关疾病的药物。TIGIT相关疾病的药物。

【技术实现步骤摘要】
抗TIGIT抗体


[0001]本专利技术属于基因工程领域，具体涉及特异性结合TIGIT的抗体或抗原结合片段。

技术介绍

[0002]TIGIT(T cell immunoglobulin and ITIM domain)，具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体，也称为VSIG9，VSTM3或WUCAM，属于免疫球蛋白超家族成员，由免疫球蛋白可变区(IgV)、跨膜区和免疫受体酪氨酸抑制基序(immuno receptor tyrosine
‑
based inhibitor motif，ITIM)组成。TIGIT是表达于NK细胞和T细胞表面的共抑制信号分子，与T细胞、NK细胞及树突状细胞DC等的功能调节密切相关(Stengel KF,et a1.(2012)ProcNatlAcad Sci USA.109)。有研究发现，TIGIT在肿瘤浸润性Treg细胞上高度富集。肿瘤组织中的TIGIT+Treg细胞表现出高度活性和抑制性的Treg细胞表型。
[0003]TIGIT是一种共抑制性受体蛋白，TIGIT与共刺激受体CD226竞争性结合配体CD155(脊髓灰质炎病毒受体PVR)和CD122(脊髓灰质炎病毒受体2)从而介导免疫抑制作用。配体CD155和CD112存在于树突细胞和巨噬细胞上，并且在一些癌细胞中高度表达，例如在黑色素瘤等其他肿瘤细胞上(Inozume et al.(2014)J.Invest,Dermato1.134:S121
‑
Abstract 693)过表达。尽管CD155可与共活化受体CD226相互作用增强T细胞活化，增强肿瘤杀伤，但在TIGIT存在的情况下，高亲和力TIGIT/CD155相互作用会抑制T细胞应答，抑制NK细胞毒性，刺激并增加其分泌IL
‑
10，降低IL
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12分泌水平，减弱抗肿瘤反应。另外，TIGIT表达与其他共抑制分子(包括PD
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1)的表达高度相关。这些表明肿瘤细胞通过上调TIGIT途径以及其他抑制性检查点网络以促进免疫抑制机制，进而保护肿瘤细胞逃避免疫系统攻击。
[0004]已有研究表明，特异性结合人TIGIT的单克隆抗体，在动物模型中显示了显著的抗肿瘤效果(Martinet and Smyth 2015)。在WO2006/124667专利中已经证实阻断人TIGIT的抗体可用于治疗癌症。也有研究表明，TIGIT可增强Tregs稳定性及其对产生γ
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干扰素(IFN
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γ)的T细胞增殖的抑制功能，选择性抑制辅助性T细胞1(Th1)和辅助性T细胞17(Th17)反应——这是驱动自身免疫组织炎症的主要反应。此外，通过抑制NK细胞的细胞溶解活性，TIGIT减少NK细胞细胞因子IFN
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γ的产生，降低其细胞毒性。因此，阻断TIGIT信号转导具有增强自身免疫反应的作用。此外，在WO2009126688、WO2014089113、WO2015009856、WO2015143343、WO2015174439、WO2017053748、WO2017030823、WO2016106302、US20160176963、US20130251720等专利中也报道了TIGIT的抗体及相关应用。
[0005]多个研究表明，TIGIT与癌症、自身免疫、感染等多种疾病相关，TIGIT是极具潜力的多种疾病治疗的新靶点，开发专门针对TIGIT的拮抗抗体将阻断它对T细胞的抑制作用并增强抗击癌症的免疫力。然而，目前国内外还没有针对TIGIT的特异性抗体药物上市，因此亟须研发新型高效特异性TIGIT抗体，尤其是特异性靶向TIGIT的CD155/CD112阻断型抗体，这将给癌症或感染疾病患者提供更多的用药选择。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种分离的抗体，该抗体能够阻断TIGIT/CD155的结合，在人源化小鼠肿瘤模型中，本专利技术的抗体具有抑制肿瘤生长的作用，这表明本专利技术的抗体对肿瘤有积极的治疗作用。
[0007]本专利技术第一方面，提供了结合人/猴TIGIT的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含重链互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述轻链可变区包含轻链互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3包含选自以下群组：
[0008](1)如SEQ ID NO：1、4、7、15、19所示的HCDR1；
[0009](2)如SEQ ID NO：2、5、8、10、11、12、14、16、17、20所示的HCDR2；
[0010](3)如SEQ ID NO：3、6、9、13、18、21所示的HCDR3；
[0011](4)如SEQ ID NO：22、25所示的LCDR1；
[0012](5)如SEQ ID NO：23、26、31所示的LCDR2；以及
[0013](6)如SEQ ID NO：24、27、28、29、30、32所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具有一个或几个氨基酸的保守取代(例如1个，2个或3个氨基酸的保守取代)的序列。
[0014]进一步地，所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3包含选自以下群组：
[0015](1)如SEQ ID NO：1或7所示的HCDR1；如SEQ ID NO：2、8、11、12或17所示的HCDR2；如SEQ ID NO：3、9、13、或18所示的HCDR3；如SEQ ID NO：22所示的LCDR1；如SEQ ID NO：23所示的LCDR2；以及如SEQ ID NO：24或28所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具有一个或几个氨基酸的保守取代(例如1个，2个或3个氨基酸的保守取代)的序列；
[0016](2)如SEQ ID NO：4、15、或19所示的HCDR1；如SEQ ID NO：5、10、14、16或20所示的HCDR2；如SEQ ID NO：6或21所示的HCDR3；如SEQ ID NO：25所示的LCDR1；如SEQ ID NO：26所示的LCDR2；以及如SEQ ID NO：27、29、30或32所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具有一个或几个氨基酸的保守取代(例如1个，2个或3个氨基酸的保守取代)的序列；
[0017](3)氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示的HCDR1，如SEQ ID NO：11所示的HCDR2，如SEQ ID NO：9所示的HCDR3，如SEQ ID NO：22所示的LCDR1，如SEQ ID NO：31所示的LCDR2，和本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种结合TIGIT的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述的抗体或抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含重链互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述轻链可变区包含轻链互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3选自以下群组：(1)如SEQ ID NO：1或7所示的HCDR1；如SEQ ID NO：2、8、11、12或17所示的HCDR2；如SEQ ID NO：3、9、13或18所示的HCDR3；如SEQ ID NO：22所示的LCDR1；如SEQ ID NO：23所示的LCDR2；以及如SEQ ID NO：24或28所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具有1个，2个或3个氨基酸保守取代的序列；(2)如SEQ ID NO：4、15或19所示的HCDR1；如SEQ ID NO：5、10、14、16或20所示的HCDR2；如SEQ ID NO：6或21所示的HCDR3；如SEQ ID NO：25所示的LCDR1；如SEQ ID NO：26所示的LCDR2；以及如SEQ ID NO：27、29、30或32所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具有1个，2个或3个氨基酸保守取代的序列；(3)氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示的HCDR1，如SEQ ID NO：11所示的HCDR2，如SEQ ID NO：9所示的HCDR3，如SEQ ID NO：22所示的LCDR1，如SEQ ID NO：31所示的LCDR2，和如SEQ ID NO：28所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具有1个，2个或3个氨基酸保守取代的序列；(4)氨基酸序列如SEQ ID NO：4或7所示的HCDR1；如SEQ ID NO：14、17或81所示的HCDR2；如SEQ ID NO：6或18所示的HCDR3；如SEQ ID NO：82、85或89所示的LCDR1；如SEQ ID NO：23、26、83或86所示的LCDR2；以及如SEQ ID NO：28、30、84、87、88、90、91、92、93所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具有1个，2个或3个氨基酸保守取代的序列。2.如权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，其中所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3选自以下群组：(1)氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的HCDR1，如SEQ ID NO：2所示的HCDR2，如SEQ ID NO：3所示的HCDR3，如SEQ ID NO：22所示的LCDR1，如SEQ ID NO：23所示的LCDR2，和如SEQ ID NO：24所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具有1个，2个或3个氨基酸保守取代的序列；(2)氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示的HCDR1，如SEQ ID NO：5所示的HCDR2，如SEQ ID NO：6所示的HCDR3，如SEQ ID NO：25所示的LCDR1，如SEQ ID NO：26所示的LCDR2，和如SEQ ID NO：27所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具有1个，2个或3个氨基酸保守取代的序列；(3)氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示的HCDR1，如SEQ ID NO：8所示的HCDR2，如SEQ ID NO：9所示的HCDR3，如SEQ ID NO：22所示的LCDR1，如SEQ ID NO：23所示的LCDR2，和如SEQ ID NO：28所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具有1个，2个或3个氨基酸保守取代的序列；(4)氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示的HCDR1，如SEQ ID NO：10所示的HCDR2，如SEQ ID NO：6所示的HCDR3，如SEQ ID NO：25所示的LCDR1，如SEQ ID NO：26所示的LCDR2，和如SEQ ID NO：29所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具有1个，2个或3个氨基酸保守取代的序列；
(5)氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示的HCDR1，如SEQ ID NO：11所示的HCDR2，如SEQ ID NO：9所示的HCDR3，如SEQ ID NO：22所示的LCDR1，如SEQ ID NO：23所示的LCDR2，和如SEQ ID NO：28所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具有1个，2个或3个氨基酸保守取代的序列；(6)氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示的HCDR1，如SEQ ID NO：12所示的HCDR2，如SEQ ID NO：13所示的HCDR3，如SEQ ID NO：22所示的LCDR1，如SEQ ID NO：23所示的LCDR2，和如SEQ ID NO：28所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具有1个，2个或3个氨基酸保守取代的序列；(7)氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示的HCDR1，如SEQ ID NO：16所示的HCDR2，如SEQ ID NO：6所示的HCDR3，如SEQ ID NO：25所示的LCDR1，如SEQ ID NO：26所示的LCDR2，和如SEQ ID NO：27所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具有1个，2个或3个氨基酸保守取代的序列；(8)氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示的HCDR1，如SEQ ID NO：11所示的HCDR2，如SEQ ID NO：9所示的HCDR3，如SEQ ID NO：22所示的LCDR1，如SEQ ID NO：31所示的LCDR2，和如SEQ ID NO：28所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具有1个，2个或3个氨基酸保守取代的序列；(9)氨基酸序列如SEQ ID NO：19所示的HCDR1，如SEQ ID NO：20所示的HCDR2，如SEQ ID NO：21所示的HCDR3，如SEQ ID NO：25所示的LCDR1，如SEQ ID NO：26所示的LCDR2，和如SEQ ID NO：32所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具有1个，2个或3个氨基酸保守取代的序列；(10)氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示的HCDR1，如SEQ ID NO：17所示的HCDR2，如SEQ ID NO：18所示的HCDR3，如SEQ ID NO：22所示的LCDR1，如SEQ ID NO：23所示的LCDR2，和如SEQ ID NO：28所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具有1个，2个或3个氨基酸保守取代的序列；(11)氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示的HCDR1，如SEQ ID NO：14所示的HCDR2，如SEQ ID NO：6所示的HCDR3，如SEQ ID NO：25所示的LCDR1，如SEQ ID NO：26所示的LCDR2，和如SEQ ID NO：30所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具有1个，2个或3个氨基酸保守取代的序列；(12)氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示的HCDR1，如SEQ ID NO：17所示的HCDR2，如SEQ ID NO：18所示的HCDR3，如SEQ ID NO：82所示的LCDR1，如SEQ ID NO：23所示的LCDR2，和如SEQ ID NO：28所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具有1个，2个或3个氨基酸保守取代的序列；(13)氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示的HCDR1，如SEQ ID NO：17所示的HCDR2，如SEQ ID NO：18所示的HCDR3，如SEQ ID NO：82所示的LCDR1，如SEQ ID NO：83所示的LCDR2，和如SEQ ID NO：28所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具有1个，2个或3个氨基酸保守取代的序列；(14)氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示的HCDR1，如SEQ ID NO：81所示的HCDR2，如SEQ ID NO：18所示的HCDR3，如SEQ ID NO：82所示的LCDR1，如SEQ ID NO：83所示的LCDR2，和如SEQ ID NO：28所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具
有1个，2个或3个氨基酸保守取代的序列；(15)氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示的HCDR1，如SEQ ID NO：81所示的HCDR2，如SEQ ID NO：18所示的HCDR3，如SEQ ID NO：82所示的LCDR1，如SEQ ID NO：83所示的LCDR2，和如SEQ ID NO：84所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具有1个，2个或3个氨基酸保守取代的序列；(16)氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示的HCDR1，如SEQ ID NO：81所示的HCDR2，如SEQ ID NO：18所示的HCDR3，如SEQ ID NO：82所示的LCDR1，如SEQ ID NO：83所示的LCDR2，和如SEQ ID NO：88所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具有1个，2个或3个氨基酸保守取代的序列；(17)氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示的HCDR1，如SEQ ID NO：81所示的HCDR2，如SEQ ID NO：18所示的HCDR3，如SEQ ID NO：89所示的LCDR1，如SEQ ID NO：83所示的LCDR2，和如SEQ ID NO：90所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具有1个，2个或3个氨基酸保守取代的序列；(18)氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示的HCDR1，如SEQ ID NO：81所示的HCDR2，如SEQ ID NO：18所示的HCDR3，如SEQ ID NO：82所示的LCDR1，如SEQ ID NO：83所示的LCDR2，和如SEQ ID NO：91所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具有1个，2个或3个氨基酸保守取代的序列；(19)氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示的HCDR1，如SEQ ID NO：14所示的HCDR2，如SEQ ID NO：6所示的HCDR3，如SEQ ID NO：85所示的LCDR1，如SEQ ID NO：26所示的LCDR2，和如SEQ ID NO：30所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具有1个，2个或3个氨基酸保守取代的序列；(20)氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示的HCDR1，如SEQ ID NO：14所示的HCDR2，如SEQ ID NO：6所示的HCDR3，如SEQ ID NO：85所示的LCDR1，如SEQ ID NO：86所示的LCDR2，和如SEQ ID NO：30所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具有1个，2个或3个氨基酸保守取代的序列；(21)氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示的HCDR1，如SEQ ID NO：14所示的HCDR2，如SEQ ID NO：6所示的HCDR3，如SEQ ID NO：85所示的LCDR1，如SEQ ID NO：86所示的LCDR2，和如SEQ ID NO：87所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具有1个，2个或3个氨基酸保守取代的序列；(22)氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示的HCDR1，如SEQ ID NO：14所示的HCDR2，如SEQ ID NO：6所示的HCDR3，如SEQ ID NO：85所示的LCDR1，如SEQ ID NO：86所示的LCDR2，和如SEQ ID NO：92所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具有1个，2个或3个氨基酸保守取代的序列；(23)氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示的HCDR1，如SEQ ID NO：14所示的HCDR2，如SEQ ID NO：6所示的HCDR3，如SEQ ID NO：85所示的LCDR1，如SEQ ID NO：86所示的LCDR2，和如SEQ ID NO：93所示的LCDR3；或者与所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3序列相比具有1个，2个或3个氨基酸保守取代的序列。3.如权利要求2所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，其中所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3选自以下群组：
(1)氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示的HCDR1，如SEQ ID NO：5所示的HCDR2，如SEQ ID NO：6所示的HCDR3，如SEQ ID NO：25所示的LCDR1，如SEQ ID NO：26所示的LCDR2，和如SEQ ID NO：27所示的LCDR3；(2)氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示的HCDR1，如SEQ ID NO：11所示的HCDR2，如SEQ ID NO：9所示的HCDR3，如SEQ ID NO：22所示的LCDR1，如SEQ ID NO：23所示的LCDR2，和如SEQ ID NO：28所示的LCDR3；(3)氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示的HCDR1，如SEQ ID NO：12所示的HCDR2，如SEQ ID NO：13所示的HCDR3，如SEQ ID NO：22所示的LCDR1，如SEQ ID NO：23所示的LCDR2，和如SEQ ID NO：28所示的LCDR3；(4)氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示的HCDR1，如SEQ ID NO：11所示的HCDR2，如SEQ ID NO：9所示的HCDR3，如SEQ ID NO：22所示的LCDR1，如SEQ ID NO：31所示的LCDR2，和如SEQ ID NO：28所示的LCDR3；(5)氨基酸序列如SEQ ID NO：19所示的HCDR1，如SEQ ID NO：20所示的HCDR2，如SEQ ID NO：21所示的HCDR3，如SEQ ID NO：25所示的LCDR1，如SEQ I...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵丽丽，刘忠，李振宇，朱中松，李斌，彭伟，王仕利，张娜，
申请(专利权)人：山东新时代药业有限公司，
类型：发明
国别省市：