一种基于模拟漆酶纳米酶快速检测食品中喹诺酮药物残留的方法技术

本发明专利技术涉及化学分析检测技术领域，具体为一种基于模拟漆酶纳米酶快速检测食品中喹诺酮药物残留的方法。本发明专利技术以Cu2O八面体为模板及铈离子为供体，四(4

【技术实现步骤摘要】
一种基于模拟漆酶纳米酶快速检测食品中喹诺酮药物残留的方法


[0001]本专利技术涉及化学分析检测
，具体为一种基于模拟漆酶纳米酶快速检测食品中喹诺酮药物残留的方法。

技术介绍

[0002]喹诺酮类药物以其抗菌谱广、吸收好、价格低廉等特点，被广泛应用在畜、禽养殖业，这类抗生素具有新型高效广谱低毒的特点，抗菌效果好，但是由于这类药物的半衰期较长，所以当用药量过大时便会在动物体内有部分残留，给人们身体健康带来了极大的危害。目前，测定方法多为高效液相色谱法、液相色谱
‑
质谱联用法、酶联免疫法等。
[0003]纳米酶是指具有天然酶催化活性的纳米材料，其成本低、易储存、酶活性可调节控制。其中，漆酶是一种以铜离子为催化中心的多酚氧化酶，它可以通过电子的转移来催化多种酚类和酚胺类底物氧化并产生无害的水，独特的环保特性使其在纳米酶的研究中备受瞩目。近年来纳米酶包括漆酶模拟酶已在食品分析、生物传感、医学诊断和工业生产中得到广泛的应用。现有报道将拟过氧化酶纳米酶用于喹诺酮类药物的测定，而基于模拟漆酶纳米酶测定喹诺酮类药物，现并未有相关报道，由于漆酶通过电子的转移来催化酚类和酚胺类底物，氧化底物及氧化能力有限，干扰大大降低。
[0004]本专利技术以Cu2O八面体为模板及铈离子为供体，四(4
‑
羧基苯基)卟啉(TCPP)为配体，制备Cu2O
‑
Ce
‑
TCPP纳米材料，Cu2O
‑
Ce
‑
TCPP表现类漆酶纳米酶活性，亚硝酸盐提高了Cu2O
‑
Ce
‑
TCPP催化4
‑
氨基安替比林（4
‑
AP）和邻氯酚（2,4
‑
DP）偶联显色氧化反应，而喹诺酮加入抑制了上述反应，基于喹诺酮浓度与吸光度呈线性关系，建立高灵敏、选择性强喹诺酮检测新方法，检出限为0.2 μg/kg。将本方法应用于食品中氟喹诺酮药物残留的检测分析，结果与相关标准方法测定相符。方法具有灵敏度高、特异性强、操作简单、快速等特点。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种拟漆酶结合亚硝酸盐的加速氧化作用检测喹诺酮类药的方法，利用喹诺酮类药抑制亚硝酸盐加速4
‑
氨基安替比林（4
‑
AP）和邻氯酚（2,4
‑
DP）偶联显色氧化反应，建立喹诺酮类药检测新方法。
[0006]一种基于模拟漆酶纳米酶快速检测食品中喹诺酮药物残留的方法，包括以下步骤：（1）在氧氟沙星标准溶液中加入Cu2O/Ce
‑
TCPP纳米酶、2,4
‑
二氯苯酚(2,4
‑
DP)、4
‑
氨基安替比林(4
‑
AP)及亚硝酸盐溶液，并用pH 6.2 MES 缓冲溶液定容，制得的氧氟沙星溶液浓度范围在0.66
‑
100μg/L，摇匀，静置5
‑
10 min，离心，取上清液置于506 nm波长处测定吸光度，建立吸光度与氧氟沙星浓度的定量关系，绘制标准曲线，得到回归方程；（2）提取净化检测样品中喹诺酮，获得样品测定液，在样品测定液中加入Cu2O/Ce
‑
TCPP纳米酶、2,4
‑
DP、4
‑
AP及亚硝酸盐溶液，并用pH 6.2 MES 缓冲溶液定容，摇匀，静置5
‑
10 min，离心，取上清液置于506 nm波长处测定吸光度，吸光度代入步骤（1）回归方程中，获得样品中喹诺酮含量。
[0007]所述Cu2O/Ce
‑
TCPP纳米酶制备如下： Cu2O的制备：在2mol/L 10
ꢀ‑
15 mL的NaOH溶液中加入0.01 mol/L 100
‑
120 mL CuCl2，5
‑
10g聚乙烯基吡咯烷酮（PVP），室温搅拌30
‑
40 min，然后加入0.6mol/L 5
ꢀ‑
10 mL抗坏血酸，在55℃水浴中搅拌5
‑
6 h，用去离子水洗涤2
‑
3次，真空干燥，即得。
[0008]②ꢀ
Cu2O/Ce
‑
TCPP的制备：取上述制备的Cu2O颗粒30
‑
35mg，加入0.1 mol/L 20
‑
25 mL Ce(NO3)
3 的DMF溶液，超声处理20
‑
30 min，加入到0.02gTCPP溶解在DMF溶液10mL中，120 ℃搅拌6
‑
8 h，离心，用乙醇和去离子水交替洗涤2
‑
3次，真空干燥，即得。
[0009]所述的样品测定液制备如下： 动物组织样品：称取均质试样1.0g（精确至0.1g），置于10mL离心管中，加入5mL 0.1mol/L EDTA
‑
Mcllvaine缓冲溶液，涡旋混合1min，超声提取10
‑
15min，离心，提取3次，合并上清液，向上清液中少量2
‑
3次加入20mL正庚烷，振荡，使脂溶性物质溶于正庚烷，弃去上层烷层除脂。将下层清液减压挥干溶剂，之后用水溶至容量瓶中，得样品液。
[0010] 牛奶和鸡蛋样品：称取1.00mL均质试样，加入1:4 (V/V) 的乙酸盐缓冲液
‑
乙腈混合溶液10.00mL，涡旋混合1min，离心，除去蛋白质。向上清液中少量2
‑
3次加入20mL正庚烷，振荡，使脂溶性物质溶于正庚烷，弃去上层烷层除脂。将下层清液减压挥干溶剂，之后用水溶至容量瓶中，得样品液。
[0011]100
µ
g/mL Cu2O/Ce
‑
TCPP纳米酶添加量为50~100
µ
L，1mg/mL 2,4
‑
DP添加量为100
‑
150
ꢀµ
L，1mg/mL 4
‑
AP添加量为100
‑
150
ꢀµ
L，200 μg/mL 亚硝酸盐溶液添加量为50
‑
100
ꢀµ
L，离心条件为离心时间5
‑
10 min，离心速率1000
‑
3000 r/min。
[0012]本专利技术的优点在于：1、本专利技术利用亚硝酸盐加速Cu2O/Ce
‑
TCPP的拟漆酶氧化4
‑
氨基安替比林（4
‑
AP）和邻氯酚（2,4
‑
DP）偶联显色氧化反应，基于喹诺酮类药对氧化反应的抑制作用，其浓度与吸光度降低呈线性关系，建立高灵敏、选择性强喹诺酮类药检测新方法，方法具有灵敏度高、操作简便、特异性强特点。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于模拟漆酶纳米酶快速检测食品中喹诺酮药物残留的方法，包括以下步骤：（1）在氧氟沙星标准溶液中加入Cu2O/Ce
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TCPP纳米酶、2,4
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二氯苯酚(2,4
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DP)、4
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氨基安替比林(4
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AP)及亚硝酸盐溶液，并用pH 6.2 MES 缓冲溶液定容，制得的氧氟沙星溶液浓度范围在0.66
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100μg/L，摇匀，静置5
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10 min，离心，取上清液置于506 nm波长处测定吸光度，建立吸光度与氧氟沙星浓度的定量关系，绘制标准曲线，得到回归方程；（2）提取净化检测样品中喹诺酮，获得样品测定液，在样品测定液中加入Cu2O/Ce
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TCPP纳米酶、2,4
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DP、4
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AP及亚硝酸盐溶液，并用pH 6.2 MES 缓冲溶液定容，摇匀，静置5
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10 min，离心，取上清液置于506 nm波长处测定吸光度，吸光度代入步骤（1）回归方程中，获得样品中喹诺酮含量；所述Cu2O/Ce
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TCPP纳米酶制备如下： Cu2O的制备：在2mol/L 10
ꢀ‑
15 mL的NaOH溶液中加入0.01 mol/L 100
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120 mL CuCl2，5
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10g聚乙烯基吡咯烷酮（PVP），室温搅拌30
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40 min，然后加入0.6mol/L 5
ꢀ‑
10 mL抗坏血酸，在55℃水浴中搅拌5
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6 h，用去离子水洗涤2
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3次，真空干燥，即得；
②ꢀ
Cu2O/Ce
‑
TCPP的制备：取上述制备的Cu2O颗粒30
‑
35mg，加入0.1 mol/L 20
‑
25 mL Ce(NO3)
3 的DMF溶液，超声处理2...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨亚玲，李秋兰，杨德志，
申请(专利权)人：云南伦扬科技有限公司，
类型：发明
国别省市：