模块化合成受体和使用方法技术

提供了模块化合成受体。合成受体可以包括能够与一种或更多种配体分子结合并且可以在结合后从合成受体释放的细胞外结构域、源自Notch受体的跨膜结构域和细胞内结构域，该细胞内结构域在从合成受体释放时可以具有一种或更多种功能活性。还提供了使用合成受体的方法，其中在细胞外结构域与特定配体结合后，合成受体经受蛋白水解裂解以释放细胞外结构域和细胞内结构域之一或两者。细胞外结合结构域如果被释放，可以继续与其同源配体结合并且可以行使一种或更多种另外的功能活性，细胞内结构域如果被释放，可以刺激或抑制一种或更多种细胞内活性。细胞内活性。细胞内活性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】模块化合成受体和使用方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年4月6日提交的美国临时申请号63/005,739的优先权，其全部内容并入本文。


[0003]本申请涉及新型受体，特别是设计用于移植、肿瘤学和自身免疫疗法的Notch或CTLA
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4合成受体。

技术介绍

[0004]哺乳动物细胞具有能够识别细胞外分子并诱导细胞内应答的跨膜受体。Notch受体是进化上保守的信号受体家族，其利用蛋白水解裂解来释放细胞外和细胞内结构域，以响应与同源配体的接合。进行蛋白水解裂解的能力包含在Notch受体的有限区域内，该区域包含跨膜结构域和裂解事件的识别位点。响应配体接合而进行裂解的能力是可转移的，允许产生具有多种配体特异性的合成受体，这些合成受体在结合后可以释放多种工程化细胞外和细胞内亚结构域。
[0005]专利技术简述
[0006]本公开提供了一种包括至少三个结构域的合成受体。在本公开的某些方面，合成受体可以包括：a)至少一个包含细胞外结构域的结构域，该细胞外结构域被配置为与一种或更多种配体特异性结合并且在与所述配体结合后选择性地从该合成受体释放，b)至少一个包含跨膜结构域的结构域，该跨膜结构域包含或源自Notch受体，和c)至少一个包含细胞内结构域的结构域，该细胞内结构域被配置为在从该合成受体释放时选择性地启动一种或更多种功能活性。
[0007]在一些实施方案中，在细胞外结构域与特定配体结合后，该合成受体可以经受蛋白水解裂解以释放细胞外结构域和细胞内结构域之一或两者。尽管被释放，细胞外结合结构域可以继续与同源配体结合并且行使一种或更多种功能活性。功能活性可以包括抗体依赖性细胞毒性、补体依赖性细胞毒性、细胞凋亡或酶功能中的至少一种。此外，作为说明而非限制，该活性可以是阻断或诱导蛋白
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蛋白相互作用或分泌细胞外功能分子中的至少一种。在一些实施方案中，细胞外功能分子可以是细胞因子或趋化因子中的至少一种。
[0008]合成受体的细胞内结构域如果被释放，可以刺激或抑制一种或更多种细胞内活性。在本公开的某些方面，细胞内结构域是分泌蛋白，如果被释放，其刺激或抑制一种或更多种细胞外活性。
[0009]这些细胞外活性可以包括信号传导、运输、粘附、阻断蛋白
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蛋白相互作用和/或稳定性中的至少一种，但不限于此。该一种或更多种细胞内活性包括信号传导、基因表达、运输和/或稳定性中的至少一种。
[0010]细胞外结构域可以包含抗体或其片段。例如，在一些实施方案中，细胞外结构域可以是与人IgG1的Fc区融合的结合糖脂二唾液酸神经节苷脂(GD2)的抗体的单链可变片段
(scFV)分子。
[0011]细胞内活性还可以包括至少一种由人CTLA4细胞外结构域与人免疫球蛋白G(IgG)的野生型或修饰的Fc区融合的分泌融合蛋白。在某些实施方案中并且作为说明，人IgG可以是IgG1、IgG2或IgG4中的至少一种。
[0012]细胞内结构域活性还可以包括至少一种人白介素的转基因。
[0013]例如，在某些实施方案中，细胞内活性包括至少一种编码人白介素2的转基因。在又一个实施方案中，至少一种转基因可以编码人白介素12。在一些实施方案中，至少一种转基因可以编码IL
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1、IL
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39或IL
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40中的任一种。
[0014]在本公开的某些方面，合成受体的Notch受体可以是人Notch受体家族的成员。在合成受体的其他实施方案中，Notch受体是来自蝇、蠕虫、猪或小鼠中的至少一种的Notch受体家族的成员。
[0015]受体可以包含与人IgG1的Fc区融合的人CD3特异性单链Fv分子。在这些实施方案中，受体可以包括与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3具有至少85％、至少90％、至少95％或至少98％氨基酸序列同一性的多肽序列。受体还可以包含与人IgG1的Fc区融合的小鼠CD3特异性单链Fv分子。在这些实施方案中，转基因包含与SEQ ID NO:3具有至少85％氨基酸序列同一性的多肽序列。
[0016]在一些实施方案中，合成受体还可以包含与人IgGl的Fc区融合的源自达妥昔单抗的单链Fv分子。在这些实施方案中，受体包含与SEQ ID NO:2具有至少85％氨基酸序列同一性的多肽序列。
[0017]在一些实施方案中，受体进一步包含编码由人CTLA4细胞外结构域与人IgG1的Fc区融合而成的融合蛋白的转基因。
[0018]在某些其他实施方案中，受体进一步包包含编码与人IgG1的Fc区融合的人白介素2分子的转基因。在这些实施方案中，转基因包含与SEQ ID NO:4具有至少85％氨基酸序列同一性的多肽序列。
[0019]在进一步的实施方案中，受体包含编码与人IgG1的Fc区融合的工程化单链人白介素12分子的转基因。在这些实施方案中，转基因包含与SEQ ID NO:5具有至少85％氨基酸序列同一性的多肽序列。
[0020]本文还提供了一种使用合成受体调节靶细胞活性的方法。该方法可以包括使合成受体与靶细胞上的受体接触，在细胞外结合结构域仍与靶细胞结合时允许合成受体被裂解，使细胞内结构域释放到细胞核中，并在细胞核中诱导基因表达。在本公开的一些方面，细胞外结构域可以是抗体或其片段。在某些实施方案中，细胞外结构域还可以是与人IgG1的Fc区融合的结合糖脂二唾液酸神经节苷脂的抗体的单链Fv分子。
[0021]本方法的细胞内活性可以包括至少一种由人CTLA4细胞外结构域与人IgG的野生本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.模块化合成受体，其包括至少三个结构域，其中：a)至少一个结构域包含细胞外结构域，该细胞外结构域被配置为与一种或更多种配体特异性结合并且在与所述配体结合后选择性地从所述合成受体释放，b)至少一个结构域包含跨膜结构域，该跨膜结构域源自Notch受体，以及c)至少一个结构域包含细胞内结构域，该细胞内结构域被配置为在从所述合成受体释放时选择性地启动功能活性的细胞内结构域。2.根据权利要求1所述的合成受体，其中在细胞外结构域与特定配体结合后，所述合成受体经受蛋白水解裂解以释放所述细胞外结构域和所述细胞内结构域之一或两者。3.根据权利要求1所述的合成受体，其中所述细胞外结合结构域被释放后继续与同源配体结合并且行使一种或更多种功能活性。4.根据权利要求3所述的合成受体，其中所述功能活性包括抗体依赖性细胞毒性、补体依赖性细胞毒性或酶功能中的至少一种。5.根据权利要求4所述的合成受体，其中所述活性包括阻断或诱导蛋白
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蛋白相互作用或分泌细胞外功能分子中的至少一种。6.根据权利要求5所述的合成受体，其中所述细胞外功能分子包括细胞因子或趋化因子中的至少一种。7.根据权利要求1所述的合成受体，其中所述细胞内结构域被释放后刺激或抑制一种或更多种细胞内活性。8.根据权利要求1所述的合成受体，其中所述细胞内结构域是分泌蛋白，其被释放后刺激或抑制一种或更多种细胞外活性。9.根据权利要求8所述的合成受体，其中所述细胞外活性包括信号传导、运输、粘附、阻断蛋白
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蛋白相互作用和/或稳定性中的至少一种。10.根据权利要求7所述的合成受体，其中所述一种或更多种细胞内活性包括信号传导、基因表达、运输和/或稳定性中的至少一种。11.根据权利要求1所述的合成受体，其中所述细胞外结构域包含抗体或其片段。12.根据权利要求11所述的合成受体，其中所述细胞外结构域包含与人IgG1的Fc区融合的结合糖脂二唾液酸神经节苷脂(GD2)的抗体的单链Fv分子。13.根据权利要求1所述的合成受体，其中所述细胞内活性包括至少一种由人CTLA4细胞外结构域与人免疫球蛋白G(IgG)的野生型或修饰的Fc区融合的分泌融合蛋白。14.根据权利要求13所述的合成受体，其中所述人IgG包括IgG1、IgG2或IgG4。15.根据权利要求1所述的合成受体，其中所述细胞内结构域活性包括至少一种人白介素的转基因。16.根据权利要求7所述的合成受体，其中所述细胞内活性包括至少一种编码人白介素2的转基因。17.根据权利要求7所述的合成受体，其中所述细胞内活性包括至少一种编码人白介素12的转基因。18.根据权利要求1所述的合成受体，其中所述Notch受体是人Notch受体家族的成员。19.根据权利要求1所述的合成受体，其中所述Notch受体是来自蝇...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：朗格生物技术公共公益股份有限公司，
类型：发明
国别省市：