增加PD-L1亲和度的PD-1变异体制造技术

本发明专利技术涉及具有用于增强与PD

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】增加PD
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L1亲和度的PD
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1变异体


[0001]本专利技术涉及提高对PD
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L1的亲和度的PD
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1变异体。

技术介绍

[0002]用于治疗癌症的药品大体分为低分子药品和高分子药品，与因没有特异性而副作用相对大的低分子药品相比，有特异性的高分子药品作为治疗剂备受关注。癌细胞为了回避通过免疫细胞的杀伤作用机制，在细胞表面表达正常细胞在抑制免疫细胞激活时利用的免疫检查点(immune checkpoint)蛋白，近来，正活跃地有关免疫检查点抑制蛋白的研究，以期将其作为用于治疗癌症的方法。
[0003]在免疫检查点抑制蛋白中，尤其是PD
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1/PD
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L1结合的阻断在癌症治疗中具有很大效果，学术界报告了副作用比其他免疫检查点抑制蛋白低的结果(J.Naidoo et al.(2015)Annals of Oncology,Lucia Gelao et al.(2014)Toxins,Gorge K.Philips et al(2015)International Immunology)。PD
‑
1受体在包括T细胞、B细胞、自然杀伤(natural killer；NK)细胞/自然杀伤T(natural killer T；NKT)细胞等在内的被激活的免疫细胞类型的表面表达(Goodman,Patel&Kurzrock,PD
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PD
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L1 immune
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checkpoint blockade in B
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cell lymphomas,Nature Reviews Clinical Oncology,14:203
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220,2017.)。PD
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1为T细胞活性的阴性调节因子，在肿瘤表面，PD
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1与作为其配体之一的PD
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L1的相互作用表现出减少产生有效免疫反应的被激活的T细胞的能力的免疫检查点阻断。肿瘤细胞表面的高水平的PD
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L1的表达抑制包括细胞毒性活性在内的T细胞功能，能够使其从抗肿瘤反应中摆脱出来。PD
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L1在许多癌症中过度表达，与种种不良预后相关(Okazaki T et al.,Intern.Immun.2007 19(7):813；Thompson RH et al.,Cancer Res 2006,66(7):3381)。有趣的是，与正常组织内的T淋巴细胞及外周血的T淋巴细胞作为对照，大多数的肿瘤浸润T淋巴细胞优势地表达PD
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1，这暗示肿瘤反应性T细胞上的PD
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1的上调会对受损的抗肿瘤免疫反应有利(Blood 2009 114(8):1537)。这可能起因于通过与PD
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1表达T细胞相互作用引起T细胞激活的弱化及免疫监视的回避的PD
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L1表达肿瘤细胞介导的PD
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L1信号传递的使用(Sharpe et al.,Nat Rev 2002,Keir ME et al.,2008Annu.Rev.Immunol.26:677)。因此，PD
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L1/PD
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1相互作用的抑制可以提高肿瘤的CD8+T细胞介导的凋亡。因此将PD
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L1信号传递的抑制建议为提高对癌症治疗(例如肿瘤免疫)以及包括急性肝炎和慢性(例如持续性)肝炎二者在内的肝炎的T细胞免疫的方案。最佳治疗性治疗可以为联合使用PD
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1受体/配体相互作用的阻断与直接抑制肿瘤生长的物质。仍有待于开发用于多种癌症的治疗、稳定、预防和/或发病延迟的最优治疗方法。
[0004]以PD
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1或PD
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L1为靶向的治疗用抗体阻断配体
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受体相互作用，在肿瘤微环境中恢复免疫功能。这样的单克隆抗体(mAb)的使用在许多癌症类型中表现出令人感兴趣的临床反应，逐渐有更多数量的单克隆抗体进入临床开发当中。在市面上出售有多种靶向PD
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1及PD
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L1的治疗用单克隆抗体(monoclonal antibodies；mAb)，在美国食品药品管理局(FDA)和欧洲药品管理局(EMA)中正在研讨12种以上的传统且双特异性的单克隆抗体。作为抑制
PD
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1与PD
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L1的结合力的Anti
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PD1抗体治疗剂的BMS公司的Opdivo(nivolumab)、Merck公司的Keytruda(Pembrolizumab)、Regeneron公司开发的Libtayo(Cemiplimab)等以及作为Anti
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PD
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L1抗体治疗剂的Roche公司的Tecentriq(Atezolizumab)、AstraZeneca公司的Imfinzi(Durvalumab)、Merck Sereno公司的Bavencio(Avelumab)等最近得到美国食品食品药品管理局(US FDA)的认证，在临床中给难治性癌症的治疗带来革新。这样的PD
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1/PD
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L1相互作用抑制抗体治疗剂在临床上的需求呈爆发式增长，2018年，Opdivo的销售额为75亿美元(7.5billion US$)，Keytruda的销售额为71亿美元(7.1billion US$)，在以销售额为基准的处方药排名中分别拍第4名和第6名，这样的免疫检查点抑制治疗用抗体的临床需要有望在将来进一步扩大。
[0005]但是，抗体为分子量达150000的巨大分子蛋白质，因此，难以进入癌组织内部，具有难以抑制肿瘤微环境(tumor micro
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environment)内部肿瘤细胞与免疫细胞的PD
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1/PD
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L1结合的缺点。为了更为有效的治疗，开发比抗体的尺寸小得多且易于进入癌症组织的蛋白质治疗剂的必要性正日益抬头。
[0006]然而，暴露于人T细胞的胞外域(ectodomain)的PD
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1蛋白质具有尺寸小，能够与肿瘤中表达的PD
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L1分子结合的特性，为了通过有效免疫检查点抑制的癌症治疗，因尺寸比PD
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L1小而细胞渗透力优秀的PD
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1更为合适，但野生型PD
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1具有与PD
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L1以非常低的亲和度(平衡解离常数＝～8.7μM)结合的问题。

技术实现思路

[0007]技术问题
[0008]本专利技术的目的在于，提供增强与PD
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L1的结合力的PD
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1变异体。
[0009]并且，本专利技术的目的在于，提供PD
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种增强与PD
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L1的结合力的PD
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1变异体，其特征在于，在序列1的野生型PD
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1的氨基酸中包含F13I、M46I、C69T及G100V的氨基酸取代。2.根据权利要求1所述的增强与PD
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L1的结合力的PD
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1变异体，其特征在于，包含序列2的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的增强与PD
‑
L1的结合力的PD
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1变异体，其特征在于，还包含N25Q、N34Q、N50Q及N92Q的氨基酸取代中的一种以上的氨基酸取代。4.根据权利要求3所述的增强与PD
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L1的结合力的PD
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1变异体，其特征在于，上述变异体为非糖基化变异体。5.根据权利要求3所述的增强与PD
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L1的结合力的PD
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1变异体，其特征在于，包含选自由序列3至序列7的氨基酸序列组成的组中的一种。6.根据权利要求1所述的增强与PD
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L1的结合力的PD
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1变异体，其特征在于，还包含W8L、N9D、E37K、A108V及G140C的氨基酸取代。7.根据权利要求6所述的增强与PD
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L1的结合力的PD
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1变异体，其特征在于，还包含N25Q、N34Q、N50Q及N92Q的氨基酸取代中的一种以上的氨基酸取代。8.根据权利要求6所述的增强与PD
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L1的结合力的PD
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1变异体，其特征在于，包含选自由序列8至序列11的氨基酸序列组成的组中的一种。9.一种核酸分子，其特征在于，编码权利要求1所述的PD
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1变异体。10.一种载体，其特征在于，包含权利要求9所述的核酸分子。11.一种宿主细胞，其特征在于，包含权利要求10所述的载体。12.一种PD
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L1与PD
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1的结合抑制剂，其特征在于，包含权利要求1所述的PD
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1变异体、权利要求9所述的核酸分子或者权利要求10所述的载体。13.一种用于检测PD
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L1的组合物，其特征在于，包含权利要求1所述的PD
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1变异体。14.根据权利要求13所述的用于检测PD
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L1的组合物，其特征在于，PD
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1变异体由选自由显色酶、放射性同位素、发色团、发光物质及荧光物质组成的组中的一种标记。15.一种用于治疗或预防癌症的药物组合物，其特征在于，包含权利要求1所述的PD
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L1变异体、权利要求9所述的核酸分子或权利要求10所述的载体作为有效成分。16.根据权利要求15所述的用于治疗或预防癌症的药物组合物，...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑相泽，河志妍，
申请(专利权)人：高丽大学校产学协力团，
类型：发明
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