一种快速检测临床样本中抗癫痫药物浓度的方法技术

本发明专利技术涉及抗癫痫药物检测领域，具体涉及一种快速检测临床样本中抗癫痫药物浓度的方法。所述抗癫痫药物包括左乙拉西坦、卡马西平、拉莫三嗪、加巴喷丁、唑尼沙胺、扑米酮、氯硝西泮、拉科酰胺、丙戊酸、苯妥英、吡仑帕奈、卡马西平

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测临床样本中抗癫痫药物浓度的方法


[0001]本专利技术涉及抗癫痫药物检测领域，具体涉及一种快速检测临床样本中抗癫痫药物浓度的方法，所述抗癫痫药物包括左乙拉西坦（Levetiracetam, LEV）、卡马西平（Carbamazepine, CBZ）、拉莫三嗪（Lamotrigine, LTG）、加巴喷丁（Gabapentin, GBP）、唑尼沙胺（Zonisamide, ZNS）、扑米酮（Primidone, PMD）、氯硝西泮（Clonazepan, CLN）、拉科酰胺（Lacosamide, LAC）、丙戊酸（valproic acid, VPA）、苯妥英（Phenytoin, PHT）、吡仑帕奈（Perampanel, PER）、卡马西平的代谢产物卡马西平
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10, 11
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环氧化物（Carbamazepine
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10,11
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epoxide，CBZO）和奥卡西平的代谢产物10, 11
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二氢
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10
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羟基卡马西平（也称利卡西平（Licarbazepine, LC））中的一种或多种。

技术介绍

[0002]癫痫是一种由脑神经元高度同步化异常放电引起的脑功能失调的慢性神经疾病，以发作性、短暂性、反复性和刻板性为临床特征。癫痫的发病机制复杂多样，包括脑部结构异常（外部损伤、肿瘤和感染等）、遗传变异、免疫和代谢系统异常以及其他未知原因。癫痫发作会使患者脑部受到严重损伤，影响儿童智力发育，造成患者记忆力衰退和认知障碍。癫痫发作过程中易引发呕吐或窒息，危及患者生命。癫痫长期发作还会对患者的心理和性格产生负面作用，影响正常生活。
[0003]目前癫痫的治疗以药物治疗为主，迄今已有20余种抗癫痫药物应用于临床。我国的癫痫患者人数已逾千万，每年新增的癫痫患者约40万人，其中约有25%的患者因未能接受个体化治疗而导致癫痫控制不佳或产生毒副反应和并发症。此外，由于癫痫患者需要长期服药治疗，其“依从性”也是影响疗效的重要因素。在成人癫痫患者中，约有25%～50%的患者服药依从性差；在新诊断的儿童癫痫患者中，高达60%以上的患者在开始服药的前6个月内存在不同程度的依从性差。因此，根据患者的类型和病程发展来制定和调整个体化给药策略，并及时了解和干预患者服药依从性成为抗癫痫治疗的关键。
[0004]临床中常见的一些第一代抗癫痫药物治疗窗较窄，具有非线性药动学特征，易引发毒副作用。例如，苯妥英的有效血浆浓度为10
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20 μg/mL，当其血药浓度高于20 μg/mL时，苯妥英服用者会产生眩晕、眼球震颤、恶心、呕吐、头痛、精神错乱等中毒症状。此外，大多数抗癫痫药物经由肝CYP450酶代谢，同时也是CYP450的酶诱导剂或抑制剂（例如苯妥英、卡马西平、丙戊酸等）。对于单药无法控制的难治性癫痫患者，往往需要联合用药，存在药物
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药物相互作用的风险，影响治疗效果。此外，在儿童、孕妇、老年以及肝肾功能异常患者等特殊群体中，药物代谢和清除能力会发生一定变化，从而引起体内药物浓度异常，存在中毒或治疗不足的风险。研究表明，第二代抗癫痫药物（例如拉莫三嗪、奥卡西平、左乙拉西坦等）的安全性虽然得到了一定改善，但其血药浓度依然会受到患者年龄、肾功能和妊娠与否等因素的影响。
[0005]因此，在癫痫患者（尤其是上述特殊群体）中进行治疗药物监测（TDM）、及时获得患者体内的抗癫痫药物浓度以及评估药物
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药物相互作用和服药依从性，对实现癫痫的精准
治疗具有重要意义。
[0006]中国专利CN111812216A公开了一种利用超高效液相色谱串联质谱技术检测经过预处理的血清中的10种抗癫痫药物的方法，其不仅覆盖的抗癫痫药物类型较少，而且定量下限较高，无法满足对各类型癫痫患者（例如，普通癫痫患者，采用复杂用药方案的癫痫患者，服药依从性较差的癫痫患者，儿童、老年、肝肾功能不全以及孕妇等特殊群体等）进行抗癫痫药物检测的需求。中国专利CN115326960A公开了一种同时检测人血浆中8种抗癫痫药物及1种活性代谢物浓度的分析方法，其不仅覆盖的抗癫痫药物类型较少，而且定量上限较高，其定量上限几乎为治疗浓度范围的上限，因此无法准确地检测超量服用抗癫痫药物或受药物相互作用影响的患者的体内药物浓度。而且，中国专利CN115326960A的技术方案存在多种分析物共用同一种内标物的情况，实际测量中可能会产生色谱或质谱行为的差异，影响实际测量结果。此外，中国专利CN115326960A公开的技术方案的分析时间长（大于10 min），且所需血浆样品量大（100 μL），同样无法满足对各类型癫痫患者进行抗癫痫药物检测的需求。

技术实现思路

[0007]本专利技术提供了一种快速检测临床样本中抗癫痫药物浓度的方法，所述抗癫痫药物包括左乙拉西坦、卡马西平、拉莫三嗪、加巴喷丁、唑尼沙胺、扑米酮、氯硝西泮、拉科酰胺、丙戊酸、苯妥英、吡仑帕奈、卡马西平
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环氧化物和利卡西平中的一种或多种，其特征在于，所述方法包括：S1 采用稳定同位素内标定量法，以所述抗癫痫药物的标准品与所述抗癫痫药物的内标物的浓度比为X轴，以所述抗癫痫药物的标准品与所述抗癫痫药物的内标物的峰面积比为Y轴，建立校准曲线。
[0008]本专利技术提供了一种简单、快速同时测定生物基质（例如血浆、唾液）中临床常用抗癫痫药物以及活性代谢产物的方法，可以检测第一代到第三代抗癫痫药物，具体包括：第一代抗癫痫药物：卡马西平、苯妥英、丙戊酸、奥卡西平、扑米酮和氯硝西泮；第二代抗癫痫药物：唑尼沙胺、加巴喷丁、拉莫三嗪和左乙拉西坦；第三代抗癫痫药物：拉科酰胺、吡仑帕奈。
[0009]由于被服用后，奥卡西平在体内几乎完全转化为其活性代谢产物10, 11
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二氢
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羟基卡马西平（也称利卡西平）来发挥药理作用，因此本专利技术以利卡西平作为奥卡西平的替代检测物质。卡马西平在体内产生活性代谢产物卡马西平
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环氧化物，两者共同发挥抗癫痫的药理作用，但卡马西平
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环氧化物在体内的含量低于母药卡马西平，因此本专利技术对两者均进行了检测分析。
[0010]在一些实施例中，所述抗癫痫药物对应的内标物包括：左乙拉西坦
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d6（LEV
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d6）、卡马西平
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d10（CBZ
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d10，对应CBZ和CBZO）、拉莫三嗪
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13
C, 15
N4（LTG
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C13）、加巴喷丁
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d6（GBP
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d6）、唑尼沙胺
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d4（ZNS
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d4）、扑米酮
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速检测临床样本中抗癫痫药物浓度的方法，所述抗癫痫药物包括左乙拉西坦、卡马西平、拉莫三嗪、加巴喷丁、唑尼沙胺、扑米酮、氯硝西泮、拉科酰胺、丙戊酸、苯妥英、吡仑帕奈、卡马西平
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环氧化物和利卡西平中的一种或多种，其特征在于，所述方法包括：S1 采用稳定同位素内标定量法，以所述抗癫痫药物的标准品与所述抗癫痫药物的内标物的浓度比为X轴，以所述抗癫痫药物的标准品与所述抗癫痫药物的内标物的峰面积比为Y轴，建立校准曲线；S2 将经处理的所述临床样本通过超高效液相色谱串联质谱进行检测，所述临床样本包括血浆或唾液，所述色谱的条件包括：以含5 mM乙酸铵和0.1%甲酸的水溶液为流动相A、以乙腈为流动相B进行梯度洗脱，所述梯度洗脱的初始流动相为所述流动相A与所述流动相B的体积比为90:10；所述经处理的所述临床样本为被稀释剂稀释5倍的预处理后的所述临床样本；所述稀释剂为所述流动相A；所述质谱的条件包括：采用以电喷雾正负离子切换的检测模式，其中，所述左乙拉西坦、所述卡马西平、所述拉莫三嗪、所述加巴喷丁、所述扑米酮、所述氯硝西泮、所述拉科酰胺、所述苯妥英、所述吡仑帕奈、所述卡马西平
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环氧化物和所述利卡西平采用正离子模式，对应的碰撞电压分别为45V、60V、25V、32V、22V、25V、34V、38V、35V、30V和28V；所述唑尼沙胺、所述丙戊酸采用负离子模式，对应的碰撞电压分别为
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12V和
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11V；S3 利用所述校准曲线，计算并获得所述临床样本中的所述抗癫痫药物的浓度。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗癫痫药物的内标物包括左乙拉西坦
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d6、卡马西平
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d10、拉莫三嗪
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C, 15
N4、加巴喷丁
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d6、唑尼沙胺
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d4、扑米酮
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d5、氯硝西泮
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d4、拉科酰胺
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d3、丙戊酸
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d6、苯妥英
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d10、吡仑帕奈
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d5和利卡西平
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d4中的一种或多种。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述预处理的方法包括将所述临床样本与含所述内标物的蛋白沉淀剂混合均匀后离心，获得上清液，所述上清液即为所述预处理后的所述临床样本。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述蛋白沉淀剂包括乙腈。5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述质谱的条件还包括：所述左乙拉西坦
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d6、所述卡马西平
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d10、所述拉莫三嗪
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【专利技术属性】
技术研发人员：陈蕾，王振磊，张梦雨，金瑛，杨茜蒙，邸相杰，贺超群，段亦非，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：