一种新污染物转化效应的评估系统技术方案

本发明专利技术公开了一种新污染物转化效应的评估系统，所述系统包括制备以用于体外识别新污染物代谢产物的原代肝细胞，设有靶向、可疑筛选及非靶向结合的化合物筛查策略，设有靶向和非靶向脂质组学筛选。通过本发明专利技术构建了适用于细胞中新污染物及其代谢产物的高精度、高灵敏度、高通量、智能化的靶向、可疑和非靶向(特征质谱碎片)的识别；构建了适用于细胞中脂类及脂质小分子的高精度、高灵敏度、高通量、智能化的靶向和非靶向筛选。的靶向和非靶向筛选。的靶向和非靶向筛选。

【技术实现步骤摘要】
一种新污染物转化效应的评估系统


[0001]本专利技术涉及新污染物代谢产物识别的
，具体涉及一种新污染物转化效应的评估系统。

技术介绍

[0002]新污染物是指新近发现或被关注，对生态环境或人体健康存在风险，尚未纳入管理或者现有管理措施不足以有效防控其风险的污染物。因此，新污染物在人类群体中的代谢规律和潜在毒性已经成为关注的热点。
[0003]现有识别新污染物代谢产物的主要策略是利用肝微粒体、细胞或酶来检测分析已知的或预测的化合物，基于这种策略已经获得了大量关于人体中新污染物生物转化和生物暴露效应的信息。但仅通过这种有针对性的策略只能检测有限数量的化合物代谢产物，无法完成对未知或新的新污染物代谢产物的筛选和识别。
[0004]目前针对新污染物对人体毒性机制的研究主要的思路是基于代谢组学及脂质组学来分析人体样品中新污染物对人体的健康影响。但这一研究方法受到供体材料的可获得性以及供体之间的变异性的限制，无法快速分析各种新污染物对脂质代谢的影响。因此，建立一种高通量评估化合物在人类体内的生物转化和毒性效应的体外模型是十分有必要的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新污染物转化效应的评估系统，其特征在于，所述系统包括制备以用于体外识别新污染物代谢产物的原代肝细胞，设有靶向、可疑筛选及非靶向结合的化合物筛查策略，设有靶向和非靶向脂质组学筛选；其中，在所述靶向、可疑筛选及非靶向结合的化合物筛查策略中：靶向部分通过LC
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HRMS对具有参考标准的母体化合物进行准确定量；可疑筛选是建立了一个包含一项和二项代谢产物的可疑清单，再基于可疑清单和Trace Finder 4.1软件，通过匹配准确质量MS1及MS2与预测值筛选潜在的新污染物代谢产物；非靶向的筛选是依赖特征官能团，利用获得质谱碎片以推测新污染物的代谢产物结构。2.根据权利要求1所述的新污染物转化效应的评估系统，其特征在于，在制备所述原代肝细胞中，包括在提取肝细胞之前，需要将小鼠肝中的血洗尽并进行充分消化；将小鼠麻醉后，用剪刀分别剪开其第一层毛皮和第二层筋膜，露出肝脏的上腔静脉和下腔静脉；将针头扎入下腔静脉，同时输入灌洗缓冲液PB并剪断上腔静脉，冲洗至上腔静脉没有血液流出；将缓冲液PB替换为提取酶稀释缓冲液后继续灌肝，在此过程中每间隔1min夹住上腔静脉，使肝脏充盈膨胀，得到充分消化；充盈3
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4次后，发现肝脏完全肿胀且底部有透明液体积聚，则停止消化；将小鼠肝脏取出放至装有预冷的DMEM培养基的培养皿中。在取出小鼠肝脏后，在培养皿中用镊子和细胞铲将从小鼠肝脏中的细胞扩散至DMEM培养基，并用70μm细胞筛过滤到50mL离心管中；用5mL DMEM培养基再次润洗培养皿，过滤至离心管；离心后，去除上清液并加入5mL DMEM培养基轻旋悬浮细胞；5mL 90％的percoll溶液同样加入上述细胞悬浮液，混匀离心；再次去除上清液并加入20mL DMEM培养基轻旋悬浮细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏冠勇，陈倩羽，李建华，徐奕鸣，
申请(专利权)人：南京理工大学，
类型：发明
国别省市：