一种基于二代测序和蛋白质组学的纳米抗体生产及其应用方法技术

一种基于二代测序和蛋白质组学的纳米抗体生产方法及其应用，要点是利用AP

【技术实现步骤摘要】
一种基于二代测序和蛋白质组学的纳米抗体生产及其应用方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种基于二代测序和蛋白质组学的纳米抗体生产及其应用方法。

技术介绍

[0002]目前鉴定和生产纳米抗体一般通过噬菌体展示技术来实现，具体流程如下：按照一定的时间间隔给骆驼科动物注射特定抗原以刺激其体内免疫反应的发生。从外周血淋巴细胞分离mRNA后，用PCR扩增VHHs(抗原结合功能区)并连接到克隆载体中。连接成功后的DNA材料随后转化大肠杆菌构建VHH文库。经过2至3轮的生物筛选后，用噬菌体ELISA法检测抗体与抗原的特异性结合。对ELISA阳性克隆的核酸序列进行测序，进而推断纳米抗体的蛋白序列。图中空心的红色菱形表示抗原。
[0003]但是通过噬菌体展示鉴定和生产纳米抗体的技术方案存在筛选阳性克隆效率低、噬菌体文库容量小的缺点。因为在现有方案中，选择最适合的阳性克隆是至关重要的，这一步通常使用体外检测(即ELISA)，通常需要两到三轮筛选才能得到预期的阳性噬菌体。但是，如果选择纳米抗体的特异性标准较高，获得阳性噬菌体所需的轮数可能会本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于二代测序和蛋白质组学的纳米抗体生产方法，包含以下步骤：1)抗原制备和免疫动物；2)抗体的亲和纯化；3)免疫后骆驼B细胞总mRNA的提取以及纳米抗体参考蛋白库的制备；4)高亲和力纳米抗体的酶切以及蛋白质谱检测；5)纳米抗体参考蛋白库的搜库和高置信度纳米抗体cDNA的确定；6)高亲和力纳米抗体的基因工程表达。2.如权利要求1所述的基于二代测序和蛋白质组学的纳米抗体生产方法，其特征在于，步骤3)中的动物为骆驼。3.如权利要求1所述的基于二代测序和蛋白质组学的纳米抗体生产方法，其特征在于，步骤3)中使用NGS测序制备纳米抗体参考蛋白库。4.如权利要求1所述的基于二代测序和蛋白质组学的纳米抗体生产方法，其特征在于，步骤4)中使用多酶切的方法进行高亲和力纳米抗体的酶切。5.如权利要求1所述的基于二代测序和蛋白质组学的纳米抗体生产方法，其特征在于，步骤4)中使用LC
‑
MS/MS进行蛋白质谱的检测。6.如权利要求1所述的基于二代测序和...

【专利技术属性】
技术研发人员：高海东，方雷，武小龙，
申请(专利权)人：南京集思慧远生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：