一种槭叶铁线莲的组织培养方法技术

本发明专利技术公开了一种槭叶铁线莲的组织培养方法。该方法包括如下步骤：1)将槭叶铁线莲种子依次经过乙醇溶液和次氯酸钠溶液处理，得到消毒处理后的槭叶铁线莲种子；2)将所述消毒处理后的槭叶铁线莲种子在发芽培养基中进行发芽培养，待培养至槭叶铁线莲种苗根部与茎部的连接处出现黑褐色时，在黑褐色连接处的最下端进行切割，并以切除根部的种苗作为外植体；3)将所述外植体依次在初代培养基和继代培养基中进行增殖培养，得到槭叶铁线莲不定芽；所述初代培养基和所述继代培养基均为含有6BA、NAA和ZT的WPM培养基。本发明专利技术组织培养方法的芽增殖系数大于7，对于短时间内增加槭叶铁线莲数量，保护槭叶铁线莲，具有重要意义。具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
一种槭叶铁线莲的组织培养方法


[0001]本专利技术涉及组织培养
，具体涉及一种槭叶铁线莲的组织培养方法。

技术介绍

[0002]槭叶铁线莲(Clematis acerifolia Maxim.)是毛茛科，铁线莲属植物，主要分布在北京地区，在河北偶有分布报道。不同于铁线莲属的其它植物，槭叶铁线莲典型生境是太行山脉的悬崖(图1)。在北京地区，每年4月起，就能看到房山、门头沟等地的悬崖上，一株株美丽的槭叶铁线莲迎风绽放，彰显着北京地域特色。
[0003]作为一种珍稀、生境特殊、分布狭窄的植物，对槭叶铁线莲进行保护是保护自然环境、保护生物多样性的必然要求。同时，槭叶铁线莲作为一种乡土植物，在园林绿化中的垂直绿化中有较好的应用前景，又是非常难得的早春植物材料。人工繁殖是增加植株数量、保护植物的重要途径，然而目前还未见有关于槭叶铁线莲组织培养的相关报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术要解决的技术问题是提供一种槭叶铁线莲的组织培养方法。
[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种槭叶铁线莲的组织培养方法。
[0006]本专利技术提供的槭叶铁线莲的组织培养方法包括如下步骤：
[0007]1)将槭叶铁线莲种子依次经过乙醇溶液和次氯酸钠溶液处理，得到消毒处理后的槭叶铁线莲种子；
[0008]2)将所述消毒处理后的槭叶铁线莲种子在发芽培养基中进行发芽培养，待培养至槭叶铁线莲种苗根部与茎部的连接处出现黑褐色时，在黑褐色连接处的最下端进行切割，并以切除根部的种苗作为外植体；
[0009]3)将所述外植体依次在初代培养基和继代培养基中进行增殖培养，得到槭叶铁线莲不定芽；
[0010]所述初代培养基和所述继代培养基均为含有6BA、NAA和ZT的WPM培养基。
[0011]上述组织培养方法中，所述乙醇溶液可为体积分数为70％的乙醇溶液。
[0012]所述乙醇溶液处理的时间可为20
‑
40s，优选为30s。
[0013]所述次氯酸钠溶液可为浓度为0.1％的次氯酸钠溶液。
[0014]所述次氯酸钠溶液处理的时间可为12
‑
18min，优选为15min。
[0015]上述组织培养方法中，所述步骤2)中，所述发芽培养基优选为White培养基。
[0016]上述组织培养方法中，所述步骤3)中，所述6BA在所述初代培养基中的终浓度可为3.8
‑
4.2mg/mL，优选为4mg/mL。
[0017]所述NAA在所述初代培养基中的终浓度为0.1mg/mL。
[0018]所述ZT在所述初代培养基中的终浓度为0.5mg/mL。
[0019]所述6BA在所述继代培养基中的终浓度可为4.3
‑
4.7mg/mL，优选为4.5mg/mL。
[0020]所述NAA在所述继代培养基中的终浓度为0.1mg/mL。
[0021]所述ZT在所述继代培养基中的终浓度为0.8mg/mL。
[0022]上述组织培养方法中，所述步骤3)包括如下步骤：
[0023]3‑
1)将所述外植体在初代培养基中进行培养，得到带有初步分化的芽的愈伤组织；
[0024]3‑
2)将所述带有初步分化的芽的愈伤组织在继代培养基中进行培养，得到槭叶铁线莲不定芽。
[0025]进一步的，所述步骤3
‑
1)中，所述外植体在初代培养基中培养也可获得不带芽的愈伤组织，该不带芽的愈伤组织在继代培养基中也可以进一步分化，得到槭叶铁线莲不定芽。
[0026]更进一步的，所述步骤3
‑
1)和所述步骤3
‑
2)中，所述培养的时间均可为1
‑
3个月，优选为3个月。
[0027]上述组织培养方法中，所述步骤3)后还包括将所述槭叶铁线莲不定芽在生根培养基中进行生根培养的步骤；所述生根培养基为含有6BA和IAA的1/2WPM培养基。
[0028]进一步的，所述6BA在所述生根培养基中的终浓度为0.2mg/mL。
[0029]所述IAA在所述生根培养基中的终浓度为0.1mg/mL。
[0030]更进一步的，所述生根培养的时间可为25
‑
30天，优选为30天。
[0031]上述组织培养方法中，所述初代培养基和所述继代培养基均由6BA、NAA、ZT和WPM培养基组成。
[0032]所述生根培养基由6BA、IAA和1/2WPM培养基组成。
[0033]上述组织培养方法中，所述培养的条件均为温度为25℃，光照黑暗时间为12h/12h。
[0034]为了解决上述技术问题，本专利技术还提供了用于槭叶铁线莲组织培养的试剂盒。
[0035]本专利技术提供的用于槭叶铁线莲组织培养的试剂盒包括上述发芽培养基、上述初代培养基和上述继代培养基。
[0036]进一步的，所述试剂盒还包括上述生根培养基。
[0037]更进一步的，所述试剂盒还包括上述乙醇溶液和上述次氯酸钠溶液。
[0038]上述试剂盒在如下X1)
‑
X4)任一种中的应用也属于本专利技术的保护范围：
[0039]X1)槭叶铁线莲组织培养；
[0040]X2)制备槭叶铁线莲组织培养的产品；
[0041]X3)保护槭叶铁线莲；
[0042]X4)制备保护槭叶铁线莲的产品。
[0043]本专利技术提供的槭叶铁线莲组织培养方法具有以下优点：
[0044]第一，本专利技术以槭叶铁线莲种子为材料，并以其发芽培养后获得的种苗为研究对象，比较了在根茎连接处不同部位切割获得的切除根部的种苗作为外植体的增殖效果。与茎段、根尖等相比，本专利技术使用种子作为材料获取外植体可以最大程度的避免植株受到伤害，最大程度的保护植物，同时种子繁殖能够较好的保持植物的遗传多样性，尤其对分布狭窄的珍稀植物种群的繁殖有重要意义。
[0045]第二，本专利技术的初代培养基起到的作用有两个：一个是诱导产生愈伤组织，另一个是初步诱导出芽。与仅诱导出愈伤组织的培养基配方相比，可提高分化速率，快速成苗。这
对于生长速度极慢的槭叶铁线莲繁殖有非常重要的意义，是解决槭叶铁线莲繁育的一个突破点。同时本专利技术中的继代培养基又可以进一步促进芽的增殖，并起到壮苗的作用，加速成苗过程。
[0046]第三，本专利技术通过大量实验研究发现：与“MS培养基是铁线莲属植物的最基本培养基”，“6BA、NAA、KT是最常用激素”和“在两种大花组铁线莲组织培养中加入玉米素ZT没有反应”等铁线莲属植物组织培养相关研究和报道不同，在槭叶铁线莲组织培养中，White培养基在发芽培养阶段有较好的效果，而在愈伤组织诱导和不定芽的增殖过程中，玉米素ZT的效果优于只使用6BA、NAA，也优于KT。
[0047]第四，本专利技术组织培养方法以槭叶铁线莲种子为材料经过发芽培养、初代培养、继代培养和生根本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种槭叶铁线莲的组织培养方法，包括如下步骤：1)将槭叶铁线莲种子依次经过乙醇溶液和次氯酸钠溶液处理，得到消毒处理后的槭叶铁线莲种子；2)将所述消毒处理后的槭叶铁线莲种子在发芽培养基中进行发芽培养，待培养至槭叶铁线莲种苗根部与茎部的连接处出现黑褐色时，在黑褐色连接处的最下端进行切割，并以切除根部的种苗作为外植体；3)将所述外植体依次在初代培养基和继代培养基中进行增殖培养，得到槭叶铁线莲不定芽；所述初代培养基和所述继代培养基均为含有6BA、NAA和ZT的WPM培养基。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述乙醇溶液为体积分数为70％的乙醇溶液；所述乙醇溶液处理的时间为20
‑
40s；所述次氯酸钠溶液为浓度为0.1％的次氯酸钠溶液；所述次氯酸钠溶液处理的时间为12
‑
18min。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，所述发芽培养基为White培养基。4.根据权利要求1
‑
3任一所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中，所述6BA在所述初代培养基中的终浓度为3.8
‑
4.2mg/mL；所述NAA在所述初代培养基中的终浓度为0.1mg/mL；所述ZT在所述初代培养基中的终浓度为0.5mg/mL。5.根据权利要求1
‑
4任一所述的方法，其特征在于：所述步骤3)...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵正楠，赵世伟，张红伟，孙宏彦，陈晓，
申请(专利权)人：北京市园林绿化科学研究院，
类型：发明
国别省市：