一种茶树红色愈伤组织培养的方法技术

本发明专利技术公开了一种安吉白茶叶片诱导红色愈伤及增殖的方法，以安吉白茶叶片为外植体，使用含6

【技术实现步骤摘要】
一种茶树红色愈伤组织培养的方法


本专利技术属于植物组织培养
，特别涉及一种安吉白茶红色愈伤组织培养的方法。

技术介绍

花青苷是一种次生代谢物，作为天然的抗氧化剂，能清除人体内的自由基、活性氧等有害物质；作为营养健康成分能够减少肥胖、增强人们的抵抗力、预防心血管疾病和恢复视力障碍。因此花青苷提取物逐渐被添加到食品、化妆品和饲料中开发功能产品。但普通茶树品种叶片中的花青苷含量较低。采用组织培养的技术快速增殖茶树红色愈伤组织，使得提取茶树花青苷的原料不受限制，实现花青苷生产的周年供应，是目前难以实现的一个技术难题。

技术实现思路

本专利技术的目的是克服茶树花青苷生产原料受限的难题，提供一种茶树红色愈伤组织诱导和增殖的方法。实现茶树红色愈伤组织大量扩繁，显著提高茶树花青苷生产原料的供应。本专利技术提供了一种安吉白茶红色愈伤组织快速繁殖的方法，包括以下步骤：A外植体选择，选用无病虫害叶片作为外植体；B外植体消毒，流水清洗后，用消毒液浸泡，然后经无菌水漂洗，获得消毒的外植体；C抑制外植体褐化，将步骤B获得的消毒的外植体接种到含抗氧化剂PVP的培养基上。D诱导愈伤组织，将步骤C获得的消毒的外植体接种到诱导培养基，诱导愈伤组织；E愈伤组织增殖培养，将步骤D诱导获得的愈伤组织接种于增殖培养基中，获得大量愈伤组织。优选的，所述步骤A所述叶片为当年生新梢上生长良好的幼嫩叶片。优选的，步骤B所述消毒的方法具体指用含洗洁精的清水浸泡叶片后，用清水清洗，然后依次用70％酒精和2％次氯酸钠处理，最后用无菌水清洗。优选的，所述外植体消毒的方法具体为：外植体在含洗洁精的清水中浸泡15min，在流水下小心冲洗1
‑
2h，然后在超净工作台中切割成0.5
×
0.5cm大小的叶盘，用无菌水清洗3次；接着用70％酒精处理40s，用无菌水清洗3
‑
4次；再用2％次氯酸钠溶液处理25min，最后用无菌水清洗3
‑
4次。优选的，步骤C所述抗氧化剂PVP的浓度为2.0g L
‑1。优选的，步骤D所述诱导培养基为MS+6
‑
BA 4.0mg
·
L
‑1+IBA 1.5mg
·
L
‑1+PVP 2.0g
·
L
‑1+蔗糖30g
·
L
‑1+琼脂8g
·
L
‑1，pH为5.8，用于诱导愈伤组织。
优选的，步骤E所述增殖培养基为MS+TDZ 2.0mg
·
L
‑1+IBA 0.2mg
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L
‑1+PVP 2.0g
·
L
‑1+蔗糖30
·
g L
‑1+琼脂8
·
g L
‑1，pH为5.8，用于愈伤组织增殖培养。优选的，所述步骤D和步骤E中培养条件均为每天光照培养16h，光照强度90μmol
·
m
‑2·
s
‑1条件下，温度为25
‑
28℃；黑暗培养8h，温度为23
‑
25℃，相对湿度为70％
‑
85％。本专利技术提供了一种安吉白茶红色愈伤组织培养和快繁的方法，包括诱导培养，增殖培养。该技术能够快速高效的繁殖安吉白茶红色愈伤组织，为提取花青苷提供大量优质原料，并为培育茶树新品种提供材料。因此实用性强、应用前景大。
附图说明
图1为安吉白茶愈伤组织。图2为安吉白茶愈伤组织花青苷含量
具体实施方式
下面结合实施例对本专利技术提供的技术方案进行详细的说明，应当理解本专利技术的保护范围并不受具体实施方式的限制。实施例1(1)外植体预处理选择安吉白茶当年生新梢上生长良好的幼嫩叶片，用0.5％洗洁精溶液中浸泡15min，冲洗干净后，在自来水下冲洗1h。(2)外植体消毒叶片消毒：将预处理的外植体移至超净工作台中，用70％酒精消毒40s，无菌水清洗3
‑
4次后，用2％次氯酸钠消毒25min，无菌水清洗5
‑
6次。将消毒后的外植体放入带有滤纸的培养皿内(均灭菌)，吸干表面水分，切割成0.5
×
0.5cm大小的叶盘，平铺于培养基中。(3)抑制外植体褐化将消毒后的叶片接种于不同浓度的PVP培养基，20天后统计褐化率，筛选出抑制外植体褐化的最适浓度为2.0g
·
L
‑1。(4)诱导愈伤组织将消毒后的叶片接种到愈伤组织诱导培养基中进行培养，诱导培养基为MS+6
‑
BA 4.0mg
·
L
‑1+IBA 1.5mg
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L
‑1+PVP 2.0g
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‑1+蔗糖30g
·
L
‑1+琼脂8g
·
L
‑1，pH为5.8，培养20天后叶片边缘脱分化出颗粒状红色愈伤组织，选用诱导30天后的愈伤组织进行增殖培养(图1A)。(5)愈伤组织增殖培养选取诱导的愈伤组织放置于增殖培养基上，进行增殖培养，培养基为MS+TDZ 0.5mg
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L
‑1+PVP 2.0g
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L
‑1+蔗糖30g
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‑1+琼脂8g
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L
‑1，pH为5.8，培养30天后获得大量愈伤组织。(图1B)步骤(4)和(5)培养条件均为每天光照培养16h，光照强度90μmol
·
m
‑2·
s
‑1条件下，温度为25
‑
28℃；黑暗培养8h，温度为23
‑
25℃，相对湿度为70％
‑
85％。实施例2(1)外植体预处理
选择安吉白茶当年生新梢上生长良好的幼嫩叶片，用0.5％洗洁精溶液中浸泡15min，冲洗干净后，在自来水下冲洗1h。(2)外植体消毒叶片消毒：将预处理的外植体移至超净工作台中，用70％酒精消毒40s，无菌水清洗3
‑
4次后，用2％次氯酸钠消毒25min，无菌水清洗5
‑
6次。将消毒后的外植体放入带有滤纸的培养皿内(均灭菌)，吸干表面水分，切割成0.5
×
0.5cm大小的叶盘，平铺于培养基中。(3)抑制外植体褐化将消毒后的茎段接种于不同浓度的PVP培养基，20天后统计褐化率，筛选出抑制外植体褐化的最适浓度为2.0g
·
L
‑1。(4)诱导愈伤组织将消毒后的叶片接种到愈伤组织诱导培养基中进行培养，诱导培养基为MS+6
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BA 4.0mg
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‑1+IBA 1.5mg
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‑1+PVP 2.0g
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‑1+蔗糖30g
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‑1+琼脂8g
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L...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种安吉白茶叶片诱导红色愈伤及增殖的方法，其特征在于，包括以下步骤：A外植体选择，选用无病虫害叶片作为外植体；B外植体消毒，流水清洗后，用消毒液浸泡，然后经无菌水漂洗，获得消毒的外植体；C抑制外植体褐化，将步骤B获得的消毒的外植体接种到含抗氧化剂PVP的培养基上；D诱导愈伤组织，将步骤C获得的消毒的外植体接种到诱导培养基，诱导愈伤组织；E愈伤增殖培养，将步骤D诱导获得的愈伤组织接种于增殖培养基中，获得大量愈伤组织。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤A所述叶片为当年生新梢上生长良好的幼嫩叶片。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤B所述获得消毒的外植体具体指用含洗洁精的清水浸泡叶片后，用清水清洗，然后依次用70％酒精和2％次氯酸钠处理，最后用无菌水清洗。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述获得消毒的外植体具体为：外植体在含洗洁精的清水中浸泡15min，在流水下小心冲洗1
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2h，然后在超净工作台中切割成0.5
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0.5cm大小的叶盘，用无菌水清洗3次；接着用70％酒精处理40s，用无菌水清洗3
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4次；再用2％次氯酸钠溶液处理25min，最后用无菌水清洗3
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4次。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤C抗氧化剂PVP的浓度为2.0g L
‑1。6.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：李敏，刘卫敏，张凯悦，刘思妍，任亚楠，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：