一种粪胰弹性蛋白酶1的检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种粪胰弹性蛋白酶1的检测试剂盒及其制备方法，属于医学检验和体外诊断技术领域。所述的试剂盒中包括六偏磷酸钠和柠檬酸钾作为分析缓冲液的成分，使得整体反应体系更加稳定，减小了粪胰弹性蛋白酶1检测试剂盒的批内差和批间差，并在一定程度上提高了试剂盒的灵敏度，具有较好的临床应用前景。具有较好的临床应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种粪胰弹性蛋白酶1的检测试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术属于医学检验和体外诊断
，涉及一种测定人粪便中胰弹性蛋白酶1的试剂盒，具体地说涉及一种利用化学发光法测定人粪便中胰弹性蛋白酶1的试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]粪胰弹性蛋白酶1(Fecal elastase 1，FE
‑
1)是由胰腺腺泡分泌的蛋白水解酶，与胰腺外分泌功能密切相关，已作为胰腺功能的一个非侵入性指标被广泛应用，可监测胰腺的中重度分泌不足，因此检测粪胰弹性蛋白酶1的含量具有临床意义。
[0003]早期胰腺外分泌功能试验是检测胰腺外分泌功能不全的金标准，但因其检测过程复杂、费用高，目前在临床基本放弃应用。间接胰腺外分泌功能试验也很少应用，当前最好的方法是粪胰弹力蛋白酶检测。对于粪胰弹性蛋白酶1的检测有多种方法，如乳胶增强免疫比浊法、免疫层析法、化学发光法等。
[0004]中国专利201910850314.3中公开了将单克隆抗体结合到乳胶增强免疫比浊法中，用于人粪便中胰弹性蛋白酶1的检测，用于诊断慢性胰腺炎或者胰腺外分泌功能障碍，采用特异性识别胰弹性蛋白酶1的单抗，显著提高了检测灵敏度和特异性。
[0005]中国专利201811024574.7中公开了一种定量测定粪便中胰弹性蛋白酶1的试剂盒，包括R1试剂，R2试剂和胰弹性蛋白酶1抗原校准品溶液；R1试剂包括电解质，稳定剂，表面活性剂，防腐剂和缓冲液；R2试剂包括包被抗人胰弹性蛋白酶1多克隆抗体的胶乳颗粒，电解质，稳定剂，表面活性剂，防腐剂，缓冲液；胰弹性蛋白酶1抗原校准品溶液包括胰弹性蛋白酶1和稳定剂。该试剂盒是一种用胶乳增强免疫比浊法测定粪便中胰弹性蛋白酶1的装置，稳定准确，省时省力，可实现全自动快速测定样品的临床检测分析的效果，与传统免疫比浊试剂相比，检测灵敏度提高了10倍以上，多克隆抗体通过化学交联的方法偶联于胶乳颗粒表面，有效保护了抗体与抗原结合的活性区域，提高了检测灵敏度。
[0006]但现有技术对粪胰弹性蛋白酶1进行检测时，发现仍存在着一些缺陷：如无法准确定量，检测时结果不稳定等情况。因此，对检测粪胰弹性蛋白酶1的方法进行改进十分必要。

技术实现思路

[0007]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种化学发光法测定粪胰弹性蛋白酶1检测试剂盒、其制备及使用方法，解决了现有技术中检测粪胰弹性蛋白酶1的方法灵敏度低、检测容易受环境干扰等问题。
[0008]术语：
[0009]本专利技术中，“EDC”为碳二亚胺的一种，即1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐。是可溶于水的碳二亚胺，在酰胺合成中用作羧基的活化试剂，也用于活化磷酸酯基团、蛋白质与核酸的交联和免疫偶连物的制取。使用时的pH范围为4.0
‑
6.0，常和N
‑
羟基琥珀酰亚胺(NHS)或N
‑
羟基硫代琥珀酰亚胺联用，以提高偶联效率。有机化学中用EDC和催化
剂4
‑
二甲氨基吡啶(DMAP)使羧酸与醇发生酯化。
[0010]本专利技术中，“Sulfo
‑
NHS”即N
‑
羟基硫代琥珀酰亚胺，常用作多肽缩合剂，可形成稳定的活泼酯中间体；用于制备亲水性活泼酯，比如作为蛋白交联剂。
[0011]本专利技术中，“PBS”即PBS缓冲液，主要成分为Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl，一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用。由于Na2HPO4和KH2PO4有二级解离，缓冲的pH值范围很广，而NaCl和KCl主要作用为增加盐离子浓度。
[0012]本专利技术中，“HEPES”指4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸。4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸是分子式为C8H
18
N2O4S的化学物质。
[0013]本专利技术中，“Triton X
‑
100”指聚乙二醇辛基苯基醚。聚乙二醇辛基苯基醚是一种有机高分子化合物，结构式为C
14
H
22
O(C2H4O)
n
。
[0014]一方面，本专利技术提供了六偏磷酸钠和柠檬酸钾在制备粪胰弹性蛋白酶1检测试剂盒中的应用。
[0015]所述的试剂盒中包括抗粪胰弹性蛋白酶1抗体偶联的发光微球、亲和素标记感光微球；所述的抗粪胰弹性蛋白酶1抗体上标记有生物素；所述的试剂盒中还包括六偏磷酸钠和柠檬酸钾。
[0016]所述的六偏磷酸钠的使用浓度为5
‑
10g/L；所述的柠檬酸钾的使用浓度为1
‑
6g/L。
[0017]优选地，所述的六偏磷酸钠的使用浓度为8g/L；所述的柠檬酸钾的使用浓度为4g/L。
[0018]另一方面，本专利技术提供了一种粪胰弹性蛋白酶1的检测试剂盒。
[0019]所述的试剂盒中包括抗粪胰弹性蛋白酶1抗体偶联的发光微球、亲和素标记感光微球；所述的抗粪胰弹性蛋白酶1抗体上标记有生物素；所述的试剂盒中还包括六偏磷酸钠和柠檬酸钾。
[0020]所述的六偏磷酸钠的使用浓度为5
‑
10g/L；所述的柠檬酸钾的使用浓度为1
‑
6g/L。
[0021]优选地，所述的六偏磷酸钠的使用浓度为5
‑
8g/L、6
‑
8g/L、5
‑
9g/L、6
‑
9g/L、8
‑
9g/L。
[0022]优选地，所述的柠檬酸钾的使用浓度为1
‑
5g/L、1
‑
3g/L、1
‑
4g/L、3
‑
4g/L、3
‑
5g/L、4
‑
5g/L。
[0023]在一些实施例中，所述的六偏磷酸钠的使用浓度为5g/L；所述的柠檬酸钾的使用浓度为5g/L。
[0024]在一些实施例中，所述的六偏磷酸钠的使用浓度为8g/L；所述的柠檬酸钾的使用浓度为4g/L。
[0025]所述的六偏磷酸钠和柠檬酸钾作为分析缓冲液的组分。
[0026]所述的分析缓冲液中还包括HEPES、Triton X
‑
100、酪蛋白、右旋糖酐。
[0027]所述的分析缓冲液用于样品和药品的稀释。
[0028]所述的抗粪胰弹性蛋白酶1抗体偶联的发光微球的制备方法为：将抗粪胰弹性蛋白酶1单克隆抗体与活化的发光微球混合反应以偶联抗体到微球上，并且在混合抗体和活化微球的同时加入新鲜配制的碳二亚胺。
[0029]所述的发光微球的活化方法为：将发光微球通过配制的碳二亚胺及Sulfo
‑
NHS溶液在PBS缓冲液中活化。
[0030]所述的发光微球为羧基修饰发光微球，所述发光微球中包被有二甲基噻吩、蒽、红荧烯且带有铕螯合物。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.六偏磷酸钠和柠檬酸钾在制备粪胰弹性蛋白酶1检测试剂盒中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的六偏磷酸钠的使用浓度为5
‑
10g/L；所述的柠檬酸钾的使用浓度为1
‑
6g/L。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的六偏磷酸钠的使用浓度为8g/L；所述的柠檬酸钾的使用浓度为4g/L。4.一种粪胰弹性蛋白酶1检测试剂盒，其特征在于，包括抗粪胰弹性蛋白酶1抗体偶联的发光微球、亲和素标记感光微球；所述的抗粪胰弹性蛋白酶1抗体上标记有生物素；所述的试剂盒中还包括六偏磷酸钠和柠檬酸钾。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的六偏磷酸钠的使用浓度为5
‑
10g/L；所述的柠檬酸钾的使用浓度为1
‑
6g/L；所述的六偏磷酸钠和柠檬酸钾用于配制分析缓冲液。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述的六偏磷酸钠的使用浓度为8g/L；所述的柠檬酸钾的使用浓度为4g/L。7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述的分析缓冲液中还包括HEPES、Triton X
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：王元略，刘妍，杨洪沣，常辉，汪鑫鑫，仝慧，
申请(专利权)人：山东和佰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：