胶体金及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种胶体金及其制备方法和应用，制备方法包括如下步骤：加热胶体金晶核溶液至沸腾后进入第一阶段煮沸，加入还原剂溶液a，制备混合物A；加热所述混合物A至沸腾后进入第二阶段煮沸，加入氯金酸溶液b，制备混合物B；加热所述混合物B至沸腾后进入第三阶段煮沸，第三阶段煮沸至所得混合物C颜色稳定，制备胶体金；所述还原剂溶液a中所含的还原剂a为柠檬酸钠；第一阶段煮沸的时间为2min

【技术实现步骤摘要】
胶体金及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于胶体金免疫检测
，特别涉及一种胶体金及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]胶体金是一种在溶液中具有稳定分散性质的胶体溶液，其主要组分是具有一定形态和尺寸且表面带负电荷的纳米金颗粒，这些金颗粒对蛋白质具有很强的吸附性，可以将蛋白质牢固地结合在金颗粒表面，且这种吸附连接，无论是在液态还是固态，都能长久稳定的保持蛋白质固有的生物活性，故，胶体金常被用作免疫检测试剂的显色指示剂。
[0003]纳米金颗粒的形成主要经过“成核和连续生长”两个阶段，以柠檬酸钠还原法制备胶体金为例：第一阶段（成核）：氯金酸（HAuCl4）经过柠檬酸钠还原作用，溶液中很快出现金原子，其浓度很快升高直至过饱和，随着发生凝集即形成晶核；第二阶段（连续生长）：晶核一旦形成，溶液中的其它金原子就不断结合到金核上，直至溶液中所有金原子消失，形成粒径尺寸和形态稳定的金颗粒。
[0004]胶体金颗粒的形态和尺寸会影响纳米离子的性质，颗粒形貌不同、尺寸的差异以及电解质和表面吸附情况等不同，均会导致离子表面等离子共振（SPR）吸收峰位置发生改变。根据Mie理论，球形金属纳米离子只有一个SPR峰，可通过分析紫外
‑
可见光吸收谱（UV
‑
vis）的峰值强度、半波峰宽和吸收峰位置来判定胶体金性质，最大吸收波长取决于粒子大小，半波峰的宽窄取决于离子尺寸的分布，半波峰越窄，表明离子尺寸分布越窄，粒径均一。吸光值越高、峰形尖窄是单分散性纳米胶体金的象征。
[0005]粒径均一、且形态稳定的性质优良胶体金，是维持连接标记蛋白质性能稳定的关键，形状不规则或者粒径不均一，会导致胶体金
‑
蛋白结合物不稳定，相应的在免疫检测试剂应用中，胶体金标记结合物容易解离和沉淀，进而产生层析不完全，显示本底过高或出现假阳性的结果。
[0006]目前，胶体金的制备例如CN105067807 B中记载的一种免疫检测用纳米胶体金的制备方法，该制备方法包括以下步骤：S1采用传统方法制备小粒径的纳米金颗粒作为晶种：加热氯金酸溶液至沸腾，快速加入还原剂，继续沸腾一段时间后，停止搅拌加热，冷却至室温；S2晶种的生长：将小粒径的晶种液稀释到一定浓度后置于三口烧瓶中，在室温下，通过两个加料管分别慢速滴加氯金酸溶液和另一种还原剂抗坏血酸溶液，滴加完毕后加热沸腾反应产物并维持沸腾一段时间，然后撤去人员冷却至室温得到粒径增大的纳米金；重复S2可依次得到从小到大各种粒径的大粒径的纳米金；所述S2中，在金纳米离子生长过程中，所述晶种液、氯金酸和还原剂的质量分数比为（8
‑
10）:(4
‑
2):1。
[0007]然而，目前的胶体金的制备方法存在的问题包括制备过程繁琐、耗时长且标记效
果欠佳等问题。
[0008]有鉴于此，特提出本申请。

技术实现思路

[0009]本申请实施例的目的之一包括提供一种胶体金的制备方法，采用该制备方法制备胶体金，步骤简单，耗时短，且免疫检测中标记效果好。
[0010]在本申请的第一方面，提供一种胶体金的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：加热胶体金晶核溶液至沸腾后进入第一阶段煮沸，加入还原剂溶液a，制备混合物A；加热所述混合物A至沸腾后进入第二阶段煮沸，加入氯金酸溶液b，制备混合物B；加热所述混合物B至沸腾后进入第三阶段煮沸，第三阶段煮沸至所得混合物C颜色稳定，制备胶体金；所述还原剂溶液a中所含的还原剂a为柠檬酸钠；第一阶段煮沸的时间为2min
‑
5min。
[0011]在本申请的一些实施方式中，所述还原剂溶液a中所述柠檬酸钠的浓度为1wt%
‑
10wt%，所述氯金酸溶液b中氯金酸的浓度为1wt%
‑
10wt%，所述还原剂溶液a和所述氯金酸溶液b的体积比为1：（1
‑
2）。
[0012]在本申请的一些实施方式中，第二阶段煮沸的时间为2min
‑
5min。
[0013]在本申请的一些实施方式中，第三阶段煮沸的时间为10min
‑
30min。
[0014]在本申请的一些实施方式中，所述胶体金晶核溶液具有如下技术特征中的一个或者多个：（1）所述胶体金晶核溶液中胶体金晶核的平均粒径为15nm
‑
20nm；和，（2）所述胶体金晶核溶液的制备步骤包括：加热氯金酸溶液b
’
至沸腾，继续煮沸，加入还原剂溶液a
’
，制备混合物D；加热所述混合物D至沸腾，继续煮沸，直至所得混合物E颜色稳定，制备胶体金晶核溶液。
[0015]在本申请的一些实施方式中，所述胶体金晶核溶液的制备步骤具有如下技术特征中的一个或者多个：（1）所述氯金酸溶液b
’
和所述还原剂溶液a
’
的体积比为1：（2
‑
3），所述氯金酸溶液b
’
中氯金酸的浓度为1wt%
‑
10wt%，所述还原剂溶液a
’
中还原剂a
’
的浓度为1wt%
‑
10wt%；（2）所述氯金酸溶液b
’
沸腾后继续煮沸的时间为2min
‑
5min；和，（3）所述混合物D沸腾后继续煮沸的时间为10min
‑
30min。
[0016]在本申请的一些实施方式中，所述还原剂a
’
为柠檬酸钠。
[0017]在本申请的一些实施方式中，所述胶体金中颗粒的平均粒径为40nm
‑
60nm，分散指数为0.1
‑
0.3。
[0018]在本申请的第二方面，提供第一方面所述的制备方法制备的胶体金。
[0019]在本申请的第三方面，提供一种免疫层析试纸条，所述试纸条包含第二方面中所述的胶体金。
[0020]在本申请的一些实施方式中，所述试纸条为新型冠状病毒抗原、甲型流感病毒抗
原和乙型流感病毒抗原的抗原联检试纸条。
[0021]在本申请的一些实施方式中，所述抗原联检试纸条包括底板以及设于所述底板上的样本垫，沿所述底板的延伸方向，所述样本垫的一侧设有第一检测功能区，对侧设有第二检测功能区；所述第一检测功能区包括依次连接的第一标记耦合物垫、第一分析膜和第一吸水垫，所述第一标记耦合物垫与所述样本垫连接，所述第一分析膜上设有第一检测线和第一质控线；所述第二检测功能区包括依次连接的第二标记耦合物垫、第二分析膜和第二吸水垫，所述第二标记耦合物垫与所述样本垫连接，所述第二分析膜上设有第二检测线和第二质控线；所述第一检测功能区和所述第二检测功能区中的一个用于检测新型冠状病毒抗原，另一个用于检测所述甲型流感病毒抗原和乙型流感病毒抗原。
[0022]在本申请的一些实施方式中，所述第一检测功能区用于检测所述新型冠状病毒抗原，所述第一标记耦合物本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胶体金的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：加热胶体金晶核溶液至沸腾后进入第一阶段煮沸，加入还原剂溶液a，制备混合物A；加热所述混合物A至沸腾后进入第二阶段煮沸，加入氯金酸溶液b，制备混合物B；加热所述混合物B至沸腾后进入第三阶段煮沸，第三阶段煮沸至所得混合物C颜色稳定，制备胶体金；所述还原剂溶液a中所含的还原剂a为柠檬酸钠；第一阶段煮沸的时间为2min
‑
5min。2.根据权利要求1所述的胶体金的制备方法，其特征在于，所述还原剂溶液a中所述柠檬酸钠的浓度为1wt%
‑
10wt%，所述氯金酸溶液b中氯金酸的浓度为1wt%
‑
10wt%，所述还原剂溶液a和所述氯金酸溶液b的体积比为1：（1
‑
2）。3.根据权利要求1所述的胶体金的制备方法，其特征在于，第二阶段煮沸的时间为2min
‑
5min。4.根据权利要求1至3中任一项所述的胶体金的制备方法，其特征在于，第三阶段煮沸的时间为10min
‑
30min。5.根据权利要求1至3中任一项所述的胶体金的制备方法，其特征在于，所述胶体金晶核溶液具有如下技术特征中的一个或者多个：（1）所述胶体金晶核溶液中胶体金晶核的平均粒径为15nm
‑
20nm；和，（2）所述胶体金晶核溶液的制备步骤包括：加热氯金酸溶液b
’
至沸腾，继续煮沸，加入还原剂溶液a
’
，制备混合物D；加热所述混合物D至沸腾，继续煮沸，直至所得混合物E颜色稳定，制备胶体金晶核溶液。6.根据权利要求5所述的胶体金的制备方法，其特征在于，所述胶体金晶核溶液的制备步骤具有如下技术特征中的一个或者多个：（1）所述氯金酸溶液b
’
和所述还原剂溶液a
’
的体积比为1：（2
‑
3），所述氯金酸溶液b
’
中氯金酸的浓度为1wt%
‑
10wt%，所述还原剂溶液a
’
中还原剂a
’
的浓度为1wt%
‑
10wt%；（2）所述氯金酸溶液b
’
沸腾后继续煮沸的时间为2min
‑
5min；和，（3）所述混合物D沸腾后继续煮沸的时间为10min
‑
30min。7.根据权利要求6所述的胶体金的制备方法，其特征在于，所述还原剂a
’
为柠檬酸钠。8.根据权利要求1至3、6和7中任一项所述的胶体金的制备方法，其特征在于，所述胶体金中颗粒的平均粒径为40nm
‑
60nm，分散指数为0.1
‑
0.3。9.权利要求1至8任一项所述的制备方法制备的胶体金。10.一种免疫层析试纸条，其特征在于，所述试纸条包含有权利要求9所述的胶体金。11.根据权利要求10所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述试纸条为新型冠状病毒抗原、甲型流感病毒抗原和乙型流感病毒抗原的抗原联检试纸条。12.根据权利要求11所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述抗原联检试纸条包括底板以及设于所述底板上的样本垫，沿所述底板的延伸方向，所述样本垫的一侧设有第一检测功能区，对侧设有第二检测功能区；所述第一检测功能区包括依次连接的第一标记耦合物垫、第一分析膜和第一吸水垫，
所述第一标记耦合物垫与所述样本垫连接，所述第一分析膜上设有第一检测线和第一质控线；所述第二检测功能区包括依次连接的第二标记耦合物垫、第二分析膜和第二吸水垫，所述第二标记耦合物垫与所述样本垫连接，所述第二分析膜上设有第二检测线和第二质控线；所述第一检测功能区和所述第二检测功能区中的一个用于检测新型冠状病毒抗原，另一个用于检测所述甲型流感病毒抗原和乙型流感病毒抗原。13.根据权利要求12所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述第一检测功能区用于检测所述新型冠状病毒抗原，所述第一标记耦合物垫包被有所述胶体金标记的抗新型冠状病毒抗体1和所述胶体金标记的合成多肽a，所述第一检测线上包被另一抗新型冠状病毒抗体2，所述第一质控线上包被抗所述合成多肽a抗体。14.根据权利要求13所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述第一检测功能区具有如下技术特征中的一个或者多个：（1）所述抗所述合成多肽a抗体为鼠抗；和，（2）所述第一检测线和第一质控线之间的间距为3mm
‑
5mm。15.根据权利要求12所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述第二检测功能区用于检测所述甲型流感病毒抗原和乙型流感病毒抗原，所述第二标记耦合物垫包被有所述胶体金标记的抗甲型流感病毒抗体1、所述胶体金标记的抗乙型流感病毒抗体1和所述胶体金标记的合成多肽b，所述第二检测线的数量大于等于2，其中一条第二检测线上包被另一抗甲型流感病毒抗体2，另一条第二检测线上包被另一抗乙型流感病毒抗体2，所述第二质控线上包被抗所述合成多肽b抗体。16.根据权利要求15所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述第二检测功能区具有如下技术特征中的一个或者多个：（1）所述抗所述合成多肽b抗体为鼠抗；和，（2）所述第二检测线之间以及所述第二检测线和所述第二质控线之间的间距为3mm
‑
5mm。17.根据权利要求12至16中任一项所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述第一检测功能区和所述第二检测功能区域呈轴对称。18.根据权利要求12至16中任一项所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述抗原联检试纸条具有如下技术特征中的一个或者多个：（1）所述底板为PVC板；（2）所述第一分析膜或/和所述第二分析膜为硝酸纤维素膜；（3）所述第一标记耦合物垫或/和所述第二标记耦合物垫各自独立地选自玻璃纤维膜或者醋酸纤维膜；（4）所述样本垫为经过封闭处理的玻璃纤维膜或者醋酸纤维膜；（5）所述第一吸水垫或/和所述第二吸水垫为滤纸；和，
（6）所述抗原联检试纸条的宽度为2.5mm
‑
4mm。19.免疫层析试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括试纸盒，所述试纸盒包括盒体以及安装在所述盒体中的权利要求12至18任一项所述的免疫层析试纸条，所述盒体上设有加样孔、第一检测窗口和第二检测窗口，所述加样孔与所述免疫层析试纸条上的所述样本垫对应，用于向所述样本垫滴加检测样本；所述第一检测窗口与所述免疫层析试纸条上的所述第一分析膜对应，用于观察所述第一检测功能区的检测结果，所述第二...

【专利技术属性】
技术研发人员：张赛，向乐，何凡，钱纯亘，
申请(专利权)人：深圳市卓润生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：