一种乳胶微球试剂冻干工艺以及在免疫比浊试剂上的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种乳胶微球试剂冻干工艺以及在免疫比浊试剂上的应用，微球试剂冻干配方由冻干保护剂和偶联有抗体标记物的微球组成，冻干保护剂主要包括糖类和两性离子聚合物组成，微球标记物是以羧基微球为基础，利用羧基基团和抗体上的氨基进行反应的。微球冻干试剂的制备方法采用将冻干微球试剂配方，通过注射泵精确控制体积，滴加到液氮后进行速冻，同时利用固定速圆周运动液氮容器，将微球制剂均匀分散在容器底部。最后去除多余液氮，收集球形固体制剂，转移到小瓶中在冻干机中进行冻干处理。采用本发明专利技术的冻干微球试剂，在免疫比浊平台上进行功能性验证，能够不降低试剂性能的前提下，显著提高偶联有抗体微球试剂的稳定性。性。性。

【技术实现步骤摘要】
一种乳胶微球试剂冻干工艺以及在免疫比浊试剂上的应用


[0001]本专利技术涉及一种乳胶微球试剂冻干工艺，具体涉及一种乳胶微球试剂冻干工艺以及在免疫比浊试剂上的应用。

技术介绍

[0002]胶乳增强免疫比浊法利用粒径均匀的聚合物胶乳颗粒作为固相载体，微球通过吸附或者固定特异性抗体，在检测时与少量的抗原待测物反应，形成的免疫复合物会产品相应的浊度变化。由于聚合物胶乳复合物的粒径要比单纯抗原抗体复合物的粒径大得多，可在反应前后形成更大的浊度变化，既吸光度的变化。
[0003]免疫反应中使用到的乳胶微球试剂通常保存在水溶液中，而水溶液中的生物活性物质，例如抗体，抗原等极易受稳定性的影响，造成例如受热分解，染菌等问题，致使试剂长期存放后性能的下降，最终影响到试剂检测的准确性。因此保存在水溶液中的试剂溶液，需要保持长期2
‑
8℃的低温保存，以及冷链运输，这不仅仅使得试剂的应用存储中产生很多限制，并且大大增加了试剂的运输储存成本，是如今体外诊断测定中的一个挑战。
[0004]冻干试剂由于保存条件简单，可实现常温保存和常温运输。并且冻干试剂操作简单，可实现手工操作，无需复杂的仪器设备，成本低廉，可覆盖各种终端应用场景。是诊断试剂的一个新发展方向。对于胶乳增强免疫比浊的项目，对微球试剂做冻干或者烘干处理后，生物活性物质不受水分影响，不会额外产生降解或者生物分解的因素影响，试剂的稳定性会大大延长。但是微球试剂类产品由于自身带有较多的表面电荷，在冷冻或者干燥过程中水分的缺失会破坏体系中微球原有自身电荷平和，导致微球由于电荷不平衡发生凝集。并且微球试剂冷冻过程中，逐步形成的表面锋利的冰结晶结构会破坏微球微观结构，导致微球试剂在复溶应用时产生不可逆的结构破坏或者性能的大幅下降。如免疫层析试剂应用中，微球试剂就通过干燥的形式分布在酥松多孔的玻璃纤维表面，但是层析试剂性在加入样本液体进行复溶后，性能会较大的损失和降低，常常在终端表现不佳，呈现检测CV的波动很大。
[0005]因此，急需要对微球冻干工艺试剂进行开发改进，需要满足一方面可简化试剂的保存条件，另一方面尽量避免或降低冻干对试剂性能的损失。

技术实现思路

[0006]为解决现有微球偶联抗体后的溶液在液态中保存稳定性差的问题，本专利技术提供一种乳胶微球试剂冻干工艺。
[0007]本专利技术提供如下技术方案：一种乳胶微球试剂冻干工艺，包括以下步骤：S1、利用羧基乳胶微球进行抗体的固定，利用羧基基团与抗体上的氨基进行反应，羧基含量在0.15
‑
0.2mmol/mg之间，所得微球试剂保存在pH为7.5
±
0.5的缓冲液中，缓冲液包含离子对、牛血清白蛋白、表面活性剂和防腐剂；
S2、向乳胶微球试剂溶液中添加冻干保护剂，冻干保护剂由糖类物质和两性离子型聚合物组合，冻干保护剂添加比例是乳胶微球试剂溶液质量的20%
‑
50%，优选在30
‑
40%之间，得乳胶微球混合溶液；S3、通过注射泵将乳胶微球混合溶液缓慢滴加到液氮容器中进行速冻，液氮溶液中的保留时间大于15min，以确保冷冻试剂定型，注射泵注射速度在1
‑
10mm/min，获得质量均一的固体球形试剂；S4、液氮容器置于可进行固定速圆周运动的馏分收集器装置上，单位时间通过注射泵滴落到液体容器中的微球试剂可均匀的分散在液体容器底部，固体球形试剂不发生黏连或互相堆积而发生变形；S5、将球形固体试剂通过镊子转移至冻干容器中，放入冻干机进行冷冻干燥。
[0008]进一步的，冻干保护剂由糖类物质和两性离子型聚合物组合。
[0009]在上述技术方案中，糖类物质优选单糖类物质，单糖类物质为海藻糖、甘露醇、葡聚糖、果糖、半乳糖、核苷二磷酸糖中的一种或者多种组合，其组分含量占冻干保护剂的10
‑
30%。
[0010]在上述技术方案中，所述两性离子型聚合物中两性离子基团同时含有碱性阳离子和酸性基阴离子，所述碱性阳离子为胺基盐离子、季铵或吡啶阳离子，所述酸性基阴离子为羧酸基、磺酸基、磷酸基或硫酸酯基，其组分含量占冻干保护剂的5
‑
15%。
[0011]进一步的，所述两性离子基团为磷酸基类两性离子单体、磺酸基类两性离子单体、羧酸基类两性离子单体中的一种或多种。
[0012]进一步的，所述两性离子基团为2
‑
甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱、磷酸胆碱乙二醇丙烯酸酯，甘油磷酰基胆碱（例如N,N
‑
二甲基
‑
N
‑
甲基丙烯酰胺基丙基
‑
N
‑
丙烷磺酸内盐），磺酸基甜菜碱和羧酸基甜菜碱（例如N,N
‑
二甲基
‑
N
‑
甲基丙烯酰氧乙基
‑
N
‑
乙酸内盐）中的一种或多种。
[0013]本专利技术通过优化工艺路线，来提高冻干微球制剂的生产效率和自动化程度，主要通过使用注射泵将具有一定粘度的微球混合液按照恒定速度通过针管挤压形成大小均匀的液滴，注射泵的速度为1
‑
10mm/min，平均在5
‑
15s内形成小液滴流下。可同时控制多个注射泵完成多个试剂液滴的形成。其次，通过液氮对形成的小液滴进行速冻处理，装有液氮的容器放置在进行缓慢圆周运动的转盘上，固体小液滴经冷冻后形成后尺寸大小均一，球状完整的固体试剂，球状固体试剂在形成后可形成间隔排布，避免固体球状制剂互相堆叠导致形变和黏连。在大量制备固体微球制剂时，可在转盘旋转一周后，及时倒出多余的液氮溶液，并更换液氮容器，实现连续生产。最后使用镊子在容器底部收集凝固了的微球制剂，转入袋盖试剂管中，称量每个固体微球制剂的重量，对质量偏差较大的部分进行剔除，保证后继产品的性能恒定，并转移到冻干机中进行下一步的处理。
[0014]一种乳胶微球试剂冻干工艺以及在免疫比浊试剂上的应用，步骤S4中冷冻干燥的工艺，如下：S41、预冻：设定冻干机温度为
‑
5℃；S42、装料：待设定温度到达后，将固体球形试剂装入塑料离心管中，打开管盖，放入冻干机隔板中层，方便后继压盖步骤；S43、冷冻：设置降温时间为20～40min，冻干机隔板温度降至
‑
50℃后，继续冷冻持
续1～5h；S44、抽真空：设置真空度50Pa，真空开启后，设置制冷温度为
‑
60℃,降温时间为45～60min；S45、干燥阶段：
‑
60℃持续7h，真空度10～20Pa；
‑
40℃持续10h，真空度5～10Pa；
‑
20℃持续1h，真空度10～20Pa；
‑
0℃持续1h，真空度10～20Pa；
‑
20℃持续1h，真空度10～20Pa；S46、压盖：通过冻干机隔板进行压盖操作，压盖后恢复压力至常压。
[0015]一种乳胶微球试剂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种乳胶微球试剂冻干工艺，其特征在于，包括以下步骤：S1、利用羧基乳胶微球进行抗体的固定，利用羧基基团与抗体上的氨基进行反应，羧基含量在0.15
‑
0.2mmol/mg之间，所得微球试剂保存在pH为7.5
±
0.5的缓冲液中，缓冲液包含离子对、牛血清白蛋白、表面活性剂和防腐剂；S2、向乳胶微球试剂溶液中添加冻干保护剂，冻干保护剂由糖类物质和两性离子型聚合物组合，冻干保护剂添加比例是乳胶微球试剂溶液质量的20%
‑
50%，得乳胶微球混合溶液；S3、通过注射泵将乳胶微球混合溶液缓慢滴加到液氮容器中进行速冻，液氮溶液中的保留时间大于15min，注射泵注射速度在1
‑
10mm/min，获得质量均一的固体球形试剂；S4、液氮容器置于可进行固定速圆周运动的馏分收集器装置上，单位时间通过注射泵滴落到液体容器中的微球试剂可均匀的分散在液体容器底部，固体球形试剂不发生黏连或互相堆积而发生变形；S5、将球形固体试剂通过镊子转移至冻干容器中，放入冻干机进行冷冻干燥。2.根据权利要求1所述的一种乳胶微球试剂冻干工艺，其特征在于：糖类物质中选择单糖类物质，单糖类物质为海藻糖、甘露醇、葡聚糖、果糖、半乳糖、核苷二磷酸糖中的一种或者多种组合，其组分含量占冻干保护剂的10
‑
30%。3.根据权利要求1所述的一种乳胶微球试剂冻干工艺，其特征在于：所述两性离子型聚合物同时含有碱性阳离子和酸性基阴离子，所述碱性阳离子为胺基盐离子、季铵或吡啶阳离子，所述酸性基阴离子为羧酸基、磺酸基、磷酸基或硫酸酯基，其组分含量占冻干保护剂的5
‑
15%...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱宗哲，
申请(专利权)人：南京珀立科技有限公司，
类型：发明
国别省市：