一种重组人源化III型胶原蛋白、制备方法及应用技术

本发明专利技术属于基因工程技术领域，具体涉及一种重组人源化III型胶原蛋白、制备方法及应用。本发明专利技术所述的重组人源化III型胶原蛋白包括与人III型胶原蛋白100％相同序列的肽段，100％严格遵守Gly

【技术实现步骤摘要】
一种重组人源化III型胶原蛋白、制备方法及应用


[0001]本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种重组人源化III型胶原蛋白、制备方法及应用。

技术介绍

[0002]胶原蛋白是人体内含量最丰富的一个蛋白质家族，是细胞外基质的主要组成成分。Ⅲ型胶原蛋白是一种成纤维胶原蛋白，它由3条α1(Ⅲ)肽链组成。III型胶原蛋白是血管、子宫和肠等中空器官的主要结构蛋白，它还经常与Ⅰ型胶原蛋白共生，广泛存在于皮肤、筋膜、肌腱等组织中。III型胶原蛋白为许多器官提供抗张强度和结构完整性，并参与调控细胞的黏附、增殖、迁移、分化等基本活动。III型胶原蛋白在伤口愈合、组织修复等过程中发挥关键作用，它被作为一种主要功能成分，被广泛应用于皮肤修复敷料中。
[0003]III型胶原蛋白因为与其他类型胶原蛋白共生，含量较低，因此，从动物组织提取III胶原蛋白存在难度大、纯度低、成本高等严峻问题。重组表达制备的胶原蛋白具有分子量单一、纯度高、无病毒传播隐患等优点，因此开始被用来替代动物胶原蛋白用于护肤品、敷料等领域。转基因植物、哺乳动物细胞等表达体系被用来制备重组胶原蛋白，但是它们存在培养条件严苛、生产周期长、成本高、表达量低等缺陷。大肠杆菌表达系统具有培养周期短、成本低等优点，在重组III型胶原蛋白的表达制备方面越来越受关注。
[0004]中国专利CN103122027A公开了一种以大肠杆菌为表达载体制备重组人源胶原蛋白的方法，该方法制备的重组胶原蛋白包括8或16次重复的III型胶原蛋白肽段和部分II型胶原蛋白肽段，并不是100％完全的III型胶原蛋白序列，同时该序列缺乏III型胶原蛋白与其他蛋白质相互作用的功能基序；中国专利CN110194795A制备包括8次重复的III型胶原蛋白肽段GERGGPGGPGPQGPPGKNGETGPQGPPGPT，该序列同样缺乏III型胶原蛋白与其他蛋白质相互作用的功能基序。中国专利CN111087463A和CN111087464A制备包括III型胶原蛋白N
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端和C
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端的肽段，但是该序列破坏了胶原蛋白特征性的Gly
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X
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Y重复序列；人体内的III型胶原蛋白要求100％严格遵守Gly
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X
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Y重复序列，即使单个破坏Gly
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X
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Y重复序列的突变也会导致疾病。
[0005]针对上述技术问题，本专利技术首先获得一种人III型胶原蛋白片段，所述生物活性高；其次，本专利技术提供了一种重组人源化III型胶原蛋白，所述重组人源化III型胶原蛋白包括人III型胶原蛋白片段，且与人III型胶原蛋白具有100％相同序列的肽段，同源性高；同时，所述重组人源化III型胶原蛋白100％严格遵守Gly
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X
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Y重复序列，不存在突变导致的疾病风险；而且，所述重组人源化III型胶原蛋白具有多个人III型胶原蛋白的重要功能位点，生物活性高；最后，本专利技术构建了一种重组人源化III型胶原蛋白的大肠杆菌表达体系，表达量高，易于纯化，制备的重组人源化III型胶原蛋白水溶性好，质量稳定，可广泛应用于护肤品、皮肤修复敷料、医学美容、保健食品等领域。

技术实现思路

[0006]针对上述技术问题，本专利技术的目的在于提供一种生物活性高的重组人源化III型胶原蛋白，具体包括以下内容：
[0007]第一方面，本专利技术提供了一种重组人源化III型胶原蛋白，所述重组人源化III型胶原蛋白的氨基酸序列包括至少一段如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列。
[0008]优选地，所述编码SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的基因序列如SEQ ID NO.8所示。
[0009]优选地，所述重组人源化III型胶原蛋白的氨基酸序列包括1
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10段如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列重复。
[0010]优选地，所述重组人源化III型胶原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2
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7任一所示。
[0011]优选地，所述重组人源化III型胶原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
[0012]优选地，所述编码SEQ ID NO.3所示氨基酸序列的基因序列如SQE ID NO.9所示。
[0013]优选地，所述重组人源化III型胶原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。
[0014]优选地，所述编码SEQ ID NO.7所示氨基酸序列的基因序列如SQE ID NO.10所示。
[0015]第二方面，本专利技术提供了编码上述第一方面所述重组人源化III型胶原蛋白的基因序列，所述基因序列如SEQ ID NO.8
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10任一所示。
[0016]第三方面，本专利技术提供了一种携带上述第二方面所述基因的重组质粒、重组载体或重组细菌。
[0017]优选地，所述质粒包括pColdIII或pET质粒。
[0018]优选地，所述细菌为大肠杆菌。
[0019]第四方面，本专利技术提供了上述第一方面所述的重组人源化III型胶原蛋白在制备护肤品、皮肤修复敷料、植入剂、人工皮肤、医疗器械、保健食品中的应用。
[0020]第五方面，本专利技术提供了一种含有上述第一方面所述重组人源化III型胶原蛋白的胶原蛋白敷料，所述胶原蛋白敷料包括以下质量分数的组分：权利要求1
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3任一所述重组人源化III型胶原蛋白0.1％～5％；甘油0.1％～10％；透明质酸钠0.1％～1％；防腐剂0.01％
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0.4％。
[0021]优选地，所述胶原蛋白敷料类型包括胶原蛋白敷料贴、胶原蛋白冻干粉敷料、胶原蛋白凝胶敷料、胶原蛋白喷雾敷料。
[0022]第六方面，本专利技术提供了一种含有上述第一方面所述重组人源化III型胶原蛋白的护肤品，所述护肤品包括以下质量分数的组分：权利要求1所述重组人源化III型胶原蛋白0.1％～5％；甘油0.1％～3％；透明质酸钠0.1％～2％；β
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葡聚糖0.01％
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2％；尿囊素0.01％
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2％；积雪草提取物0.01％
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5％；红景天提取物0.01％
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2％；野菊花提取物0.01％
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2％；马齿苋提取物0.01％
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2％；茶树纯露0.01％
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2％；赤藓糖醇0.01％
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2％；雪莲花提取物0.01％
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2％；生物糖胶0.01％
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2％；防腐剂0.01％
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0.4％；余量为水。
[0023]第七方面，本专利技术提供了上述第一方面所述的重组人源化III型胶原蛋白的制备方法，所述方法包括如下步骤：
[0024](1)合成编码上述第一方面所述重组人源化III型胶原蛋白的基因序列；
[0025](2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组人源化III型胶原蛋白，其特征在于，所述重组人源化III型胶原蛋白的氨基酸序列包括至少一段如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列。2.如权利要求1所述的重组人源化III型胶原蛋白，其特征在于，所述重组人源化III型胶原蛋白的氨基酸序列包括1
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10段如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列重复。3.如权利要求2所述的重组人源化III型胶原蛋白，其特征在于，所述重组人源化III型胶原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2
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7任一所示。4.一种编码权利要求1所述的重组人源化III型胶原蛋白的基因序列，其特征在于，所述基因序列如SEQ ID NO.8
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10任一所示。5.一种携带权利要求4所述基因的重组质粒、重组载体或重组细菌。6.如权利要求1
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3任一所述的重组人源化III型胶原蛋白在制备护肤品、皮肤修复敷料、植入剂、人工皮肤、医疗器械、保健食品中的应用。7.一种含有权利要求1
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3任一所述重组人源化III型胶原蛋白的胶原蛋白敷料，其特征在于，所述胶原蛋白敷料包括以下质量分数的组分：权利要求1
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3任一所述重组人源化III型胶原蛋白0.1％～5％；甘油0.1％～10％；透明质酸钠0.1％～1％；防腐剂0.01％
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0.4％。8.一种含有权利要求1
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3任一所述重组人源化III型胶原蛋白的护肤品，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖建喜，付彩虹，
申请(专利权)人：胶原蛋白武汉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：