一种高生物相容性、高稳定性的胶原蛋白纤维、制备方法及应用技术

本发明专利技术属于生物医用材料技术领域，具体涉及一种高生物相容性、高稳定性的胶原蛋白纤维、制备方法及应用，包括如下步骤：(1)构建胶原蛋白纤维；(2)交联剂交联胶原蛋白纤维；(3)透析、均质、离心、收集沉淀；制备的交联胶原蛋白纤维紧密堆积并且高度交联，具有良好的热稳定性和抗酶解能力；所述交联胶原蛋白纤维具有高生物相容性，促进成纤维细胞的增殖；具有高生物安全性，植入体内后引起的炎症反应显著轻微并快速消除；所述交联胶原蛋白纤维植入后未出现钙化结点，具有优异的抗钙化效果；本发明专利技术提供的交联胶原蛋白纤维植入剂，显著促进新的胶原蛋白产生，可应用于植入剂、人工皮肤、止血海绵、支架材料、医疗器械等领域，应用前景广阔。阔。阔。

【技术实现步骤摘要】
一种高生物相容性、高稳定性的胶原蛋白纤维、制备方法及应用


[0001]本专利技术属于生物医用材料
，具体涉及一种高生物相容、高稳定的胶原蛋白纤维、制备方法及应用。

技术介绍

[0002]胶原蛋白是真皮的主要结构成分，随着年龄的增长，皮肤中胶原蛋白的含量会显著降低，导致皮肤皱纹等各种衰老现象。因此，利用胶原蛋白纤维制备可注射胶原蛋白植入剂，被广泛用于皮肤医学领域。但是，未交联的胶原蛋白植入剂植入人体后,稳定性较差，会被体内胶原酶快速降解，严重影响了其使用效果。
[0003]化学交联是目前用来交联胶原蛋白的主要方法。中国专利CN113384748A公开了一种采用戊二醛交联胶原蛋白水凝胶制备胶原蛋白植入剂的方法；中国专利CN109385682A公开了一种采用EDC/NHS交联制备拉伸强度较好的胶原蛋白纤维的方法。中国专利CN101234216B公开了一种采用醛化多糖交联制备热稳定性较好的胶原蛋白凝胶的方法。但是，这些专利中戊二醛等交联剂的残留会导致健康风险，制备的交联胶原蛋白的稳定性有待进一步改善。
[0004]针对上述技术问题，专利技术人意外的发现了一种高生物相容性、高稳定性的胶原蛋白纤维制备方法。所述方法制备的交联胶原蛋白纤维紧密堆积并且高度交联，具有良好的热稳定性和抗酶解能力；所述交联胶原蛋白纤维具有高生物相容性，可以显著促进成纤维细胞的增殖；所述交联胶原蛋白纤维植入后未出现钙化结点，具有优异的抗钙化效果；本专利技术提供的交联胶原蛋白纤维植入剂，显著促进胶原蛋白再生，可应用于植入剂、人工皮肤、止血海绵、支架材料、医疗器械等领域，应用前景广阔。

技术实现思路

[0005]针对上述技术问题，本专利技术的目的在于提供一种胶原蛋白纤维制备方法，包括如下步骤：(1)构建胶原蛋白纤维；(2)交联剂交联胶原蛋白纤维；(3)透析、均匀并收集沉淀；
[0006]步骤(1)所述的构建胶原蛋白纤维的方法如下：
[0007]配制浓度为0.1
‑
5mg/mL胶原蛋白溶液，加入10mM
‑
100mM磷酸氢二钠/磷酸二氢钠溶液(pH为6
‑
8)，离心收集沉淀；采用20mM磷酸氢二钠/磷酸二氢钠溶液(pH为6
‑
9)，将得到的沉淀分散均匀，使胶原浓度为3mg/mL后，17℃
‑
25℃孵育8
‑
19h；将温育后的胶原4℃，10000rpm均质20min；离心得到胶原蛋白纤维。
[0008]优选的，步骤(2)所述的交联剂为碳二亚胺、环氧氯丙烷、偏磷酸钠、1,4
‑
丁二醇二缩水甘油醚、乙二醇二缩水甘油醚、原花青素、橙皮苷、单宁酸、京尼平、核黄素、柚皮素、槲皮素、表没食子儿茶素没食子酸酯、橄榄苦苷、L
–
苏糖(LT)、植酸、异氰酸盐、酰基叠氮及二苯基磷酸盐和二(N
‑
羟基琥珀酰亚胺)辛二酸酯(NHS
‑
SA)中的一种或几种。
[0009]优选的，步骤(2)所述的交联剂为二(N
‑
羟基琥珀酰亚胺)辛二酸酯。
[0010]优选的，步骤(2)所述的交联剂浓度0.01
‑
5mg/mL。
[0011]优选地，步骤(2)所述的交联剂添加量为4
‑
5mg/mL。
[0012]优选的，步骤(2)所述的交联剂的反应温度为4
‑
25℃，反应时间为12
‑
24h。
[0013]优选地，步骤(2)所述的交联剂的反应温度为8℃
‑
25℃。
[0014]优选地，步骤(2)所述的交联剂的反应温度为8℃。
[0015]优选地，步骤(2)所述的交联剂的反应时间为24h。
[0016]优选的，步骤(1)所述的胶原蛋白为动物胶原蛋白，包括I型，II型，III型。
[0017]优选的，步骤(1)所述的胶原蛋白为I型胶原蛋白。
[0018]优选的，步骤(3)所述的透析是交联后加入甘氨酸进行的，在4℃
‑
25℃缓冲中透析48
‑
72h，在4℃
‑
25℃，20
‑
30min，转速为10000rpm后离心收集沉淀。
[0019]本专利技术的第二目的是提供所述的制备方法制备得到的胶原蛋白纤维。
[0020]本专利技术的第三目的是提供所述的胶原蛋白纤维在制备植入剂、人工皮肤、止血海绵、支架材料、医疗器械中的应用。
[0021]本专利技术的第四目的是提供一种胶原蛋白纤维植入剂，所述的植入剂通过所述的胶原蛋白纤维制备得到。
[0022]本专利技术的第五目的是提供二(N
‑
羟基琥珀酰亚胺)辛二酸酯作为胶原蛋白交联剂的应用。
[0023]本专利技术的有益效果是：(1)本专利技术提供了一种胶原蛋白纤维的制备方法，所述方法简单方便，制备得到的交联胶原蛋白纤维紧密堆积并且高度交联，具有良好的热稳定性和抗酶解能力；(2)所述交联胶原蛋白纤维具有高生物相容性，可以显著促进成纤维细胞的增殖；交联胶原蛋白纤维具有高生物安全性，植入体内后引起的炎症反应显著轻微并快速消除；(3)所述交联胶原蛋白纤维植入后未出现钙化结点，具有优异的抗钙化效果；(4)所述交联胶原蛋白纤维植入剂，显著促进胶原蛋白再生，可应用于植入剂、人工皮肤、止血海绵、支架材料、医疗器械等领域，应用前景广阔；(5)本专利技术还提供了二(N
‑
羟基琥珀酰亚胺)辛二酸酯作为胶原蛋白交联剂的新用途，以及使用二(N
‑
羟基琥珀酰亚胺)辛二酸酯交联得到的胶原蛋白纤维。
附图说明
[0024]图1不同浓度NHS
‑
SA交联胶原蛋白纤维的效果
[0025]图2不同温度NHS
‑
SA交联胶原蛋白纤维的扫描电镜图
[0026]图3 NHS
‑
SA交联胶原蛋白纤维的抗酶解能力
[0027]图4 NHS
‑
SA交联胶原蛋白纤维的变性检测
[0028]图5 NHS
‑
SA交联胶原蛋白纤维的热稳定性
[0029]图6 NHS
‑
SA交联胶原蛋白纤维的细胞活性
[0030]图7 NHS
‑
SA交联胶原蛋白纤维的活细胞/死细胞染色图
[0031]图8 NHS
‑
SA交联胶原蛋白纤维植入小鼠皮肤的实物照片
[0032]图9 NHS
‑
SA交联胶原蛋白纤维植入小鼠皮肤的组织HE染色
[0033]图10 NHS
‑
SA交联胶原蛋白纤维植入小鼠皮肤的组织Masson染色
[0034]图11 NHS
‑
SA交联胶原蛋白纤维植入小鼠皮肤的组织茜素红染色
具体实施方式
[0035]下面通过具体实施例本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高生物相容性、高稳定性胶原蛋白纤维的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)构建胶原蛋白纤维；(2)交联剂交联胶原蛋白纤维；(3)透析、均质、离心并收集沉淀；步骤(1)所述的构建胶原蛋白纤维的方法如下：配制浓度为0.1
‑
5mg/mL胶原蛋白溶液，加入10mM
‑
100mM磷酸氢二钠/磷酸二氢钠溶液，离心收集沉淀；采用20mM磷酸氢二钠/磷酸二氢钠溶液，将得到的沉淀分散均匀，使胶原浓度为3mg/mL后，17℃
‑
25℃孵育8
‑
19hrs；将温育后的胶原4℃，10000rpm均质20min；离心得到胶原蛋白纤维。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述的交联剂为碳二亚胺、环氧氯丙烷、偏磷酸钠、1,4
‑
丁二醇二缩水甘油醚、乙二醇二缩水甘油醚、原花青素、橙皮苷、单宁酸、京尼平、核黄素、柚皮素、槲皮素、表没食子儿茶素没食子酸酯、橄榄苦苷、L
–
苏糖(LT)、植酸、异氰酸盐、酰基叠氮及二苯基磷酸盐和二(N
‑
羟基琥珀酰亚胺)辛二酸酯(NHS
‑
SA)中的一种或几种。3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖建喜，王琪，
申请(专利权)人：胶原蛋白武汉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：