一种免疫组化质控品的制备方法及其应用技术

本申请涉及一种免疫组化质控品的制备方法及其应用，包括以下步骤：S1:分别培养肿瘤细胞株；S2：制备细胞块；S3：制备对应的色标块；S4:将细胞块和色标块分别进行固定和脱水，然后按照每一种肿瘤细胞块对应一个颜色的色标块，将细胞块和色标块一起进行浸蜡和包埋，即可得到细胞蜡块质控品。本申请中采用了来源稳定的肿瘤细胞作为培养对象，制作成质量稳定且可长期使用的细胞蜡块质控品，可以实现组织学对照目的：经过验证后染色结果符合实际预期，能够实时帮助判读者确认免疫组化结果的真实性(真假阴、阳性)。本申请的细胞蜡块中还包含有色标块，可以在更清楚的明确细胞形态定位特征(核、浆、膜)，便于判读者区分的特征标识或形态。态。态。

【技术实现步骤摘要】
一种免疫组化质控品的制备方法及其应用


[0001]本申请涉及生物医学检验
，尤其是涉及一种免疫组化质控品的制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]免疫组织化学检测简称免疫组化检测，在检测中使用特定一抗与生物组织切片样本中的抗原特异性结合，进一步使用一个通用性二抗与前述一抗结合，并通过连接在二抗上的显色分子进行显色。在免疫组化检测(抗原抗体反应)过程中，步骤冗长复杂，使用的试剂种类繁多，同时受到多因素的影响(包括温湿度、浓度、批间差和人员操作等)，极易发生变化而导致结果偏差。在检测过程中，为了实验结果的准确性，用质控品作为阴性和阳性对照是不可或缺的部分。
[0003]由于商业化抗体的序列保密，抗体质量(良莠不一)无法实现统一，因此需要对临床免疫组化用途的(抗人)抗体质量采用质控品确认，故迫切需要质控品来监控免疫组化检测过程的质量问题。由于抗体销售商没有提供质控品，检测方也无法提供，目前大部分实验室的免疫组化检测结果仅凭判读者对结果“现象”的主观解读，常出现结果不一致的情况。
[0004]目前医院的病理科常选用人体或动物的器官或组织制成蜡块作为质控品，例如在专利公开号为CN114719777A“免疫组织染色的质控方法和质控品”中采用了器官或组织作为质控蜡块，其组织或器官中必须选取至少有两种不同增殖细胞抗原密度的部位，质控时主要是根据颜色的深浅判断阴性和阳性，因而其需要特别还需要控制染色过程，染色过深或过浅，对结果都是存在影响的。病理科有时也会采用病人的组织蜡块作为质控，但是病人来源的组织结构复杂，结果不稳定。因而作为质控品的时候，这种人体的病变组织存在一定的个体差异，来源同样不稳定。由于质控品是来源于患者人体组织，其归属权属于患者，严格来说使用患者的蜡块用于制作质控品存在伦理以及法律归属权上的风险。
[0005]针对上述相关技术，专利技术人认为存在提供一种稳定可靠的质控品，对提高免疫组化结果的准确性是有重大的意义。

技术实现思路

[0006]为了进一步免疫组化结果的准确性，本申请提供一种免疫组化质控品的制备方法及其应用。
[0007]本申请提供的一种免疫组化质控品的制备方法，采用如下的技术方案：一种免疫组化质控品的制备方法，包括以下步骤：S1:分别培养HER2分别为0、1+、2+、3+的肿瘤细胞株，和/或ER/PR为阴性和阳性的肿瘤细胞株；将培养后细胞分别进行离心去除上清液，分别得到细胞沉淀，将细胞沉淀分别进行重悬，得到对应细胞悬液；S2：分别向步骤S1中的细胞悬液中加入熔融的样品稀释液，混匀后，趁热倒入模具，冷却，得到对应的细胞块；
S3：根据S1中肿瘤细胞种类的数量，选择对应数量的不同颜色的色标剂，分别向不同颜色的色标剂中加入样品稀释液，混匀后，趁热倒入模具，冷却，得到对应的色标块；S4:将步骤S2中的细胞块和步骤S3的色标块分别进行固定和脱水，然后按照每一种肿瘤细胞块对应一个颜色的色标块，将细胞块和色标块一起进行浸蜡和包埋，即可得到细胞蜡块质控品。
[0008]通过采用上述技术方案，本申请中是以肿瘤细胞为对象，制备成细胞蜡块，为免疫组化实验提供形态一致的质控品，保证实验结果的可靠性及可重复性；可以很好保证细胞形态的一致性的同时能够长久地保存质控品，减少因为缺少质控品，造成测试结果不确定性的发生几率。而且其相对于组织或器官为了进一步提高免疫组化结果的准确性，本申请中在质控品中引入了色标块，不同等级的肿瘤细胞会对应上不同的色标块，因而可以避IHC染色过程中只能根据颜色的深浅进行判断的问题，在本申请中可以根据肿瘤细胞的不同颜色对其进行判断，能够更好的帮助判读者确认免疫组化结果的真实性(真假阴、阳性)；因而可以进一步提高免疫组化的准确性。
[0009]作为优选，所述步骤S1中，HER2为0、1+、2+、3+的肿瘤细胞株分别为MDA
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MB
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231、MCF
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7、T47D、SK
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BR
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3细胞株；ER/PR为阴性和阳性肿瘤细胞株为MDA
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MB
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231、T47D；肿瘤细胞需要培养细胞块中细胞个数为(6～8)
×
107个，培养好的细胞需要用酶进行消化，并用质量浓度为10％的福尔马林溶液进行固定，然后在进行离心。
[0010]通过采用上述技术方案，本申请中采用上述的肿瘤细胞作为质控细胞，可以更好保证蜡块质量的稳定性。细胞块中细胞个数过多细会使得切片细胞过密，造成细胞叠加，影响染色结果观察；而细胞过少，会使得切片中的细胞密度过小，影响染色结果判读；通过酶消化后，可以使细胞与杂质更好的分离开；通过福尔马林固定后，可以更好的保持细胞的形态。
[0011]作为优选，所述步骤S1中，加入PBS缓冲液重悬细胞，其中PBS缓冲液的加入体积为细胞沉淀体积的1～1.5倍；离心转速为800～1200转，离心时间为4～6min。
[0012]通过采用上述的技术方案，本申请中加入PBS缓冲液重悬细胞，可以增大细胞的分散性，避免细胞的叠加。
[0013]作为优选，所述步骤S2中，样品稀释液为琼脂加热到70～80℃后获得的熔融液，样品稀释液的加入量为细胞沉淀体积的1～2倍。
[0014]通过采用上述技术方案，本申请中按照上述比例加入样品稀释液，可以保证细胞沉淀可以形成稳定的细胞块的同时，不会将细胞浓度稀释到过低。
[0015]作为优选，所述细胞块为方块状或者锥形块状；其中：方块状的细胞块的制备方法，包括以下步骤：将细胞悬液和样品稀释液置于方形的包埋模具中，用移液枪头将细胞悬液和融化的样本稀释液搅拌混匀，立刻放入
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20℃冰箱冷却，让样本稀释液凝固，然后用注射器针头轻轻挑起，即可制得方块状的细胞块；锥形块状的细胞块的制备方法，包括以下步骤：将细胞悬液和熔融的样品稀释液置于离心管中，再放入离心机内2500转离心，结束后，立马放入
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20℃冰箱冷却，让样本稀释液凝固，然后用注射器针头轻轻挑出，将没有细胞的琼脂块部位切去，即可制得圆锥块状的细胞块。
[0016]通过采用上述技术方案，本申请中方块状的细胞块细胞分散度高，圆锥块状的细
胞块，细胞更集中，含水量更少，可以根据质控品的要求进行选择。
[0017]作为优选，所述步骤S3中，样品稀释液的加入量为色标剂体积的1～2倍；色标块为方块状或者锥形块状，其中：方块状的色标块的制备方法，包括以下步骤：将色标剂和样品稀释液置于方形的包埋模具中，用移液枪头将色标剂和融化的样本稀释液搅拌混匀，立刻放入
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20℃冰箱冷却，让样本稀释液凝固，然后用注射器针头轻轻挑起，即可制得方块状的色标块；锥形块状的色标块的制备方法，包括以下步骤：将色标剂和熔融的样品稀释液置于离心管中，再放入离心机内2500转离心，结束后，立马放入
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20℃冰箱冷却，让样本稀释液凝固，然后用注射器针头轻轻挑出，将没有细胞的琼脂块部本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种免疫组化质控品的制备方法，包括以下步骤：S1:分别培养HER2分别为0、1+、2+、3+的肿瘤细胞株，和/或ER/PR为阴性和阳性的肿瘤细胞株；将培养后细胞分别进行离心去除上清液，分别得到细胞沉淀，将细胞沉淀分别进行重悬，得到对应细胞悬液；S2：分别向步骤S1中的细胞悬液中加入熔融的样品稀释液，混匀后，趁热倒入模具，冷却，得到对应的细胞块；S3：根据S1中肿瘤细胞种类的数量，选择对应数量的不同颜色的色标剂，分别向不同颜色的色标剂中加入样品稀释液，混匀后，趁热倒入模具，冷却，得到对应的色标块；S4: 将步骤S2中的细胞块和步骤S3的色标块分别进行固定和脱水，然后按照每一种肿瘤细胞块对应一个颜色的色标块，将细胞块和色标块一起进行浸蜡和包埋， 即可得到细胞蜡块质控品。2.根据权利要求1所述的免疫组化质控品的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，HER2为0、1+、2+、3+的肿瘤细胞株分别为MDA
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231、MCF
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7、T47D、SK
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3细胞株；ER/PR为阴性和阳性肿瘤细胞株分别为MDA
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231、T47D；肿瘤细胞需要培养细胞块中细胞个数为(6~8)
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107个，培养好的细胞需要用酶进行消化，并用质量浓度为10%的福尔马林溶液进行固定，然后在进行离心。3.根据权利要求1所述的免疫组化质控品的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，加入PBS缓冲液重悬细胞，其中PBS缓冲液的加入体积为细胞沉淀体积的1~1.5倍；离心转速为800~1200转，离心时间为4~6min。4.根据权利要求1所述的免疫组化质控品的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中，样品稀释液为琼脂加热到70~80℃后获得的熔融液，样品稀释液的加入量为细胞沉淀体积的1~2倍。5.根据权利要求4所述的免疫组化质控品的制备方法，其特征在于，所述细胞块为方块状或者锥形块状；其中：方块状的细胞块的制备方法，包括以下步骤：将细胞悬液和样品稀释液置于方形的包埋模具中，用移液枪头将...

【专利技术属性】
技术研发人员：张锋，吴金荣，宋祖义，
申请(专利权)人：浙江峻山生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：