一种免疫组化多重顺次染色用串色阻断剂及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种免疫组化多重顺次染色用串色阻断剂及其应用，属于生物医学技术领域。本发明专利技术的串色阻断剂主要由缓冲剂、氧化剂、洗脱剂组成。采用本发明专利技术串色阻断剂进行免疫组化多重顺次染色，可有效的防止交叉染色，且该串色阻断剂适用于全自动免疫组化机，条件温和，不会对组织带来损伤，可广泛应用于免疫组化病理检验的全自动多重顺次染色中。理检验的全自动多重顺次染色中。理检验的全自动多重顺次染色中。

【技术实现步骤摘要】
一种免疫组化多重顺次染色用串色阻断剂及其应用


[0001]本专利技术涉及一种免疫组化多重顺次染色用串色阻断剂及其应用，属于生物医学


技术介绍

[0002]免疫组化病理利用了抗原抗体特异性结合的原理，通过鼠抗人(可根据实际进行选择)相应一抗与组织目标抗原进行特异性结合后；使用一抗后放大剂(兔抗鼠抗体)与一抗结合，起到放大作用；再使用HRP或AP标记的羊抗兔二抗，与一抗后放大剂结合，最后用相应的显色剂进行显色。通过抗原抗体反应及呈色反应，显示细胞或组织中的化学成分，从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。
[0003]目前，常规的单染免疫组化的缺点是：
①
单个样本的染色切片数量多，需要判读多张切片的染色结果，综合分析，得到病理诊断结果；
②
IHC对取材样本的大小要求高，而随着技术的迭代发展，患者的肿瘤组织样本变成小活检或细针穿刺术，得到的石蜡块只有有限的肿瘤含量。从这些有限的部分中，病理学实验室必须制作对主要亚型进行诊断所必需的HE玻片(通常是两个)以及支持该诊断的其他玻片，所以存在很大的弊端。
[0004]针对这种现象，多重顺次染技术问世，其原理是将HRP和AP两种体系依次进行免疫组化的一个流程，该技术的改进在于：
①
在同一张组织切片上可以呈现两种颜色，标记至少2种抗原靶标；
②
对于所需的一抗的种属没有限制；
③
减少组织使用量和医生阅片的工作量。但是，该技术仍然存在一个致命的问题，在同一张切片上检测多个抗原靶标时，前一个抗体染色会受到下一抗体染色过程的影响，导致第一个抗体的染色出现串色现象，非常容易是结果判读错误。
[0005]在多重顺次染色中造成串色的原因有：
①
第1染色程序中一抗与第2染色程序中一抗后放大剂出现结合造成交叉染色；
②
第1染色程序中一抗后放大剂与第2染色程序中一抗出现结合造成交叉染色；
③
第1染色程序中标记二抗与第2染色程序中一抗后放大剂出现结合造成交叉染色。目前通过单纯的常规方法不能有效解决串色问题，例如血清、鼠IgG、兔IgG封闭处理等。

技术实现思路

[0006]为了解决上述问题，本专利技术的第一个目的是提供一种免疫组化多重顺次染色用串色阻断剂，该串色阻断剂可有效的防止交叉染色，条件温和，不会对组织带来损伤。
[0007]本专利技术的第二个目的是提供该串色阻断剂在免疫组化多重顺次染色中的应用。
[0008]为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：
[0009]一种免疫组化多重顺次染色用串色阻断剂，主要包括氧化剂、洗脱剂和缓冲剂；所述的氧化剂为过氧化氢、过碳酸钠、过氧化镍中的一种或几种；所述的洗脱剂为十二烷基硫酸钠(SDS)、脱氧胆酸铵、胆酸钠、肌氨酸、Triton
‑
X100、CHAPS、尿素、十二烷基麦芽糖苷、Tween
‑
20、Tween
‑
80、洋地黄皂苷中的一种或几种；所述的氧化剂与洗脱剂的质量比为0.1
～5：0.1～5。
[0010]进一步优选地，所述的氧化剂与洗脱剂的质量比为0.3～4：0.5～3。
[0011]本专利技术提供的串色阻断剂可有效防止免疫组化中多重顺次染色
‑
再染色过程中不同颜色之间的交叉串色问题，获得准确的染色结果，有效提升工作效率和免疫组化病理诊断准确率。该串色阻断剂中氧化剂使第1染色程序中残留具有结合能力的一抗、一抗后放大剂和标记二抗失活，再通过洗脱剂将未结合的一抗、一抗后和标记二抗充分洗脱干净，从而防止串色。
[0012]优选地，所述的缓冲剂pH为6.5～10.0。
[0013]对于缓冲剂的选择没有特殊要求，常用的缓冲剂包括三羟甲基氨基甲烷(Tris)、磷酸盐(PBS)、N
‑2‑
羟乙基哌嗪
‑
N
‑
3丙磺酸(HEPPS)、三(羟甲基)甲级
‑3‑
氨基丙烷磺酸(TAPSN)、3
‑
(N
‑
吗啡代)丙烷磺酸(MOPS)、二乙醇胺(DEA)、三乙醇胺(TRA)。
[0014]进一步优选地，所述的缓冲剂pH为7.0～8.5。
[0015]进一步优选地，所述的缓冲剂pH为7.5。
[0016]此pH范围，能够维持已经结合的抗原抗体所需要的pH环境。
[0017]优选地，还包括稳定剂、消泡剂、防腐剂中的一种或两种或三种；所述的氧化剂与稳定剂的质量比为0.1～5：0.1～20；所述的氧化剂与消泡剂的质量比为0.1～5：0.1～5；所述的氧化剂与防腐剂的质量比为0.1～5：0.01～1。
[0018]进一步优选地，所述的氧化剂与稳定剂的质量比为0.3～4：1.2～17；所述的氧化剂与消泡剂的质量比为0.3～4：0.2～4；所述的氧化剂与防腐剂的质量比为0.2～0.4：0.05～0.8。
[0019]本专利技术的串色阻断剂中稳定剂的作用是保持阻断剂的化学平衡，降低表面张力，稳定试剂；防腐剂的作用是延缓微生物或化学变化引起的腐败。稳定剂和防腐剂共同作用，有利于该串色阻断剂的保存，延长其使用期限。消泡剂的主要作用是，在利用全自动免疫组化机时，防止加热时产生气泡，导致染色不均匀。
[0020]进一步优选地，所述的稳定剂为牛血清白蛋白、小牛血清、甘氨酸、甘油、聚乙二醇6000
‑
20000中的一种或几种；所述的消泡剂为聚二甲基硅氧烷；所述的防腐剂为Proclin950、硫酸庆大霉素、凯松任一种。
[0021]所述的稳定剂为试剂中常规的常规选择，可以根据试剂保存时间、选择洗脱剂的种类等进行选择搭配；所述的Proclin950、硫酸庆大霉素和凯松均具有广谱抑菌性，化学性质稳定且毒性很低，降低手工操作的风险。
[0022]优选地，所述的氧化剂在串色阻断剂中的质量含量为0.1～5％。
[0023]进一步优选地，所述的氧化剂在串色阻断剂中的质量含量为0.3～4％。
[0024]进一步优选地，所述的缓冲剂的使用量为5～600mM。
[0025]串色阻断剂在免疫组化多重顺次染色中的应用，在前一次染色后，使用串色阻断剂孵育阻断，再进行下一顺次的染色。
[0026]使用本专利技术的串色阻断剂进行免疫组化多重顺次染色，不同抗体的定位染色不会出现互相干扰，有效解决串色的问题，使多重顺次染技术染色效果大幅提升，结果更加准确。
[0027]优选地，所述的孵育阻断温度为40
‑
60℃，时间为10分钟。
[0028]该串色阻断剂阻断条件温和，不需要80℃以上的加热，40
‑
60℃孵育不会破坏组织，致使组织形态发生改变，从而影响病结果判断；同时其阻断时间短，只需10分钟左右，大幅节约时间，提升染色效率。
[0029]优选地，所述的免疫组化多重顺本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种免疫组化多重顺次染色用串色阻断剂，其特征在于：主要包括氧化剂、洗脱剂和缓冲剂；所述的氧化剂为过氧化氢、过碳酸钠、过氧化镍中的一种或几种；所述的洗脱剂为十二烷基硫酸钠、脱氧胆酸铵、胆酸钠、肌氨酸、Triton
‑
X100、CHAPS、尿素、十二烷基麦芽糖苷、Tween
‑
20、Tween
‑
80、洋地黄皂苷中的一种或几种；所述的氧化剂与洗脱剂的质量比为0.1～5：0.1～5。2.根据权利要求1所述的串色阻断剂，其特征在于：所述的缓冲剂pH为6.5～10.0。3.根据权利要求2所述的串色阻断剂，其特征在于：所述的缓冲剂pH为7.0～8.5。4.根据权利要求1所述的串色阻断剂，其特征在于：还包括稳定剂、消泡剂、防腐剂中的一种或两种或三种；所述的氧化剂与稳定剂的质量比为0.1～5：0.1～20；所述的氧化剂与消泡剂的质量比为0.1～5：0.1～5；所述的氧化剂与防腐剂的质量比为0.1～5：0.01～1。5.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈鹏，赵琳琳，牛银银，李三华，邢雅南，张林姿，齐华，
申请(专利权)人：河南赛诺特生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：