前处理试剂及制备方法和细胞染色方法及前处理方法技术

一种前处理试剂，用于细胞在悬浮液中染色的前处理，其组分，以体积百分比计，包括0.5%

【技术实现步骤摘要】
前处理试剂及制备方法和细胞染色方法及前处理方法


[0001]本申请属于细胞染色
，尤其涉及在悬浮液状态下的细胞染色技术，尤其涉及悬浮液状态下的细胞染色前处理的方法及试剂。

技术介绍

[0002]在生物体体液或分泌物的细胞检测中，通常采用细胞染色技术来区分不同种类、不同形态、不同状态的细胞。
[0003]用于明场观察检测的常规细胞染色技术中，通常是将待检测样本涂抹在透明载体如载玻片上，等检测样本干燥后，再依次滴入具有不同染色效果的染液及缓冲液，混合均匀完成染色后，再冲洗掉影响观测的染液及缓冲液主体，再等待染色样本干燥后，完成整个染色过程，形成用于明场观测的染色后的样本涂片。现有技术中的干片染色步骤极其繁琐耗时，染色效率极低，无法大批量进行样本细胞染色。且每个步骤的操作都需训练有素的专业操作者，才能制作出合格的观测样本。且干片染色需要的时间较长，效率较低，在大批量样本检测时候成本效率都不能满足现实的需求。
[0004]血细胞在液体环境即在悬浮液中染色时，无需干片制作的复杂过程；但是在悬浮液中进行染色时，染色液中的盐环境、或有机溶剂、表面活性剂的存在，往往会使血细胞形态的剧烈变化，如皱缩、破裂等。最终导致血液细胞液体在上述环境下染色后，无法输出完整的临床信息：如细胞的数量信息、形态信息、分类信息等。且染色的效果由于在悬浮液中容易受到各种组分的影响，要么难以染色，要么染色着色的需要时间较长；且对不同的细胞，很难在较为均衡的时间窗口达到同等水平的染色效果。
[0005]名词解释：CAS编号(CASRegistryNumber或称CASNumber,CASRn,CAS#)，又称CAS登录号或CAS登记号码，是某种物质(化合物、高分子材料、生物序列(Biologicalsequences)、混合物或合金)的唯一的数字识别号码。其由美国化学会的下设组织化学文摘社(ChemicalAbstractsService，简称CAS)构建。该社负责为每一种出现在文献中的物质分配一个CAS编号，避免了化学物质有多种名称的麻烦，使数据库的检索更为方便。
[0006]纯化水是指符合《中国药典(2015版)》纯化水标准的水，其主要参数为：pH值为4.4
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7.6之间，使用离线电导率仪检测，25℃温度下，标示装量不大于10ml(毫升)时，电导率不大于25μS/cm(微西门子每厘米)的水。
[0007]瑞吉氏染色液是指，以伊红、美兰、天青为主要染色物质，经过一定的加工工艺，形成的液态染色液。如珠海贝索生物技术有限公司的姬姆萨染色液(货号BA
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4017)。
[0008]瑞氏(Wright)染色液是指：以伊红和美蓝为主要染料，经一定有机溶剂溶解、混合、经化学作用后，形成的染色液。如北京索莱宝科技有限公司的瑞氏染色液(货号G1040)吉姆萨(Giemsa)染色液是指：以酸性伊红和天青为主要染料，经一定有机溶剂溶解、混合、经化学作用后，形成的染色液。如珠海贝索生物技术有限公司的姬姆萨染色液(货号BA
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4219)。
[0009]新亚甲蓝染色液是指：以新亚甲蓝作为主要染料，通过一定的有机或无机溶剂溶解后，形成的染色液。如珠海贝索生物技术有限公司的姬姆萨染色液(货号BA
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4003)。
[0010]煌焦油蓝染色液是指：以灿烂甲酚蓝为主要染料，通过一定的有机或无机溶剂溶解后，形成的染色液。如北京索莱宝科技有限公司的瑞氏染色液(货号G1410)。
[0011]迪夫染色液是指，以水溶性伊红和美兰、天青Ⅱ，为主要染料，以水为主要溶剂，经一定工艺形成的染色液。如北京索莱宝科技有限公司的瑞氏染色液(货号G1541)。

技术实现思路

[0012]本申请要解决的技术问题在于避免现有技术上述不足之处，提出了一种简单高效的前处理试剂及制备方法和细胞染色方法及前处理方法，在细胞在进入悬浮液中染色之前先进行前处理，使细胞状态调整为适合进行悬浮液染色的状态，非常适用于规模化批量化的样本细胞染色。
[0013]本申请解决上述问题的技术方案是一种前处理试剂用于细胞在悬浮液中染色的前处理，其组分，以体积百分比计，包括0.5%
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5%稳定剂，95%
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99.5%缓冲液。
[0014]本方案中的稳定剂，一方面使细胞膜表面膜蛋白发生交联，使在细胞膜表面形成网状结构，保持细胞形态；另一方面破坏细胞膜的磷脂双分子层，增加细胞膜的透过性，使后续染料进入细胞的效率一致，且快速；使细胞染色的时间变短，染色均一性变高。
[0015]所述的前处理试剂其组分，以体积百分比计，包括1%
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3%稳定剂，97%
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99%缓冲液。优选地，前处理试剂其组分，以体积百分比计，包括1.75%稳定剂，98.25%缓冲液。
[0016]所述前处理试剂的pH值范围为6.5
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8.1;或所述前处理试剂的pH值范围为6.8
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7.6。
[0017]所述稳定剂的组分，以体积百分比计，包括33.3%
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50%戊二醛溶液，50%
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66.7%醛类溶液；或所述稳定剂的组分，以体积百分比计，包括40%
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50%戊二醛溶液，50%
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60%醛类溶液。
[0018]优选地，所述稳定剂的组分，以体积百分比计，包括42.9%戊二醛溶液和57.1%甲醛溶液。
[0019]所述醛类溶液中的醛类物质包括甲醛、乙醛、丙醛、多聚甲醛中的任意一种或多种。
[0020]所述稳定剂的组分，以体积百分比计，包括21.1%
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48.3%戊二醛溶液，51.7%
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88.9%醇类溶液。
[0021]所述醇类溶液中的醇类物质包括无水甲醇或无水乙醇。
[0022]所述戊二醛溶液是戊二醛的质量百分比为50%的戊二醛溶液；所述醛类溶液是醛类物质的质量百分比为37%的醛类溶液。
[0023]优选地，所述甲醛溶液是甲醛的质量百分比为37%的甲醛溶液。
[0024]所述缓冲液的组分，以体积百分比计，包括10%
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50%磷酸缓冲液，50%
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90%纯化水；或所述缓冲液的组分，以体积百分比计，包括20%
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40%磷酸缓冲液，60%
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80%纯化水。
[0025]所述前处理试剂中，磷酸盐浓度0.02M(摩尔/升)至0.1M(摩尔/升)。
[0026]无论磷酸缓冲液中的磷酸盐浓度如何，需要保证配制成前处理试剂后，在前处理试剂中磷酸盐浓度0.02M(摩尔/升)至0.1M(摩尔/升)，以保证前处理试剂的前处理效果，既能保持细胞形态，又能增加细胞膜的透过性，使后续染色均一性能提高。
[0027]所述磷酸缓冲液的组分，以体积百分比计，包括5.3%
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73.5%磷本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种前处理试剂，其特征在于，用于细胞在悬浮液中染色前的待染色样本前处理，其组分，以体积百分比计，包括0.5%
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5%稳定剂，95%
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99.5%缓冲液。2.根据权利要求1所述的前处理试剂，其特征在于，其组分，以体积百分比计，包括1%
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3%稳定剂，97%
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99%缓冲液。3.根据权利要求1或2所述的前处理试剂，其特征在于，所述前处理试剂的pH值范围为6.5
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8.1;或所述前处理试剂的pH值范围为6.8
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7.6。4.根据权利要求1或2所述的前处理试剂，其特征在于，所述稳定剂的组分，以体积百分比计，包括33.3%
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50%戊二醛溶液，50%
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66.7%醛类溶液；或所述稳定剂的组分，以体积百分比计，包括40%
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50%戊二醛溶液，50%
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60%醛类溶液。5.根据权利要求4所述的前处理试剂，其特征在于，所述醛类溶液中的醛类物质包括甲醛、乙醛、丙醛、多聚甲醛中的任意一种或多种。6.根据权利要求1或2所述的前处理试剂，其特征在于，所述稳定剂的组分，以体积百分比计，包括21.1%
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48.3%戊二醛溶液，51.7%
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88.9%醇类溶液。7.根据权利要求6所述的前处理试剂，其特征在于，所述醇类溶液中的醇类物质包括无水甲醇或无水乙醇。8.根据权利要求4所述的前处理试剂，其特征在于，所述戊二醛溶液是戊二醛的质量百分比为50%的戊二醛溶液；所述醛类溶液是醛类物质的质量百分比为37%的醛类溶液。9.根据权利要求1或2所述的前处理试剂，其特征在于，所述缓冲液的组分，以体积百分比计，包括10%
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50%磷酸缓冲液，50%
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90%纯化水;或所述缓冲液的组分，以体积百分比计，包括20%
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40%磷酸缓冲液，60%
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80%纯化水。10.根据权利要求9所述的前处理试剂，其特征在于，所述前处理试剂中，磷酸盐浓度0.02M(摩尔/升)至0.1M(摩尔/升)。11.根据权利要求9所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：王志平，刘亚慧，
申请(专利权)人：深圳安侣医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：