一种用于脱落细胞的染色液及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种用于脱落细胞的染色液及其制备方法和应用，所述染色液包括以下重量份的组分：还原剂10～21份，叶酸0.03～0.05份，亚甲基蓝0.03～0.06份，溶剂1～3份，碱1.5～3份，水75～90份；所述染色液的pH为8～14。本发明专利技术中的染色液为碱性溶液，具有不容易被氧化，染色效果好，试剂保存时间长、检测灵敏度和特异性高等优点，此外，本发明专利技术染色液中的亚甲基蓝溶解性好，解决了现有技术中的亚甲基蓝难溶的问题，可以广泛应用于脱落细胞的细胞学特殊染色，例如针对子宫颈、阴道、外阴等临床常规病变的粗筛检查。变的粗筛检查。

【技术实现步骤摘要】
一种用于脱落细胞的染色液及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物领域，特别涉及一种用于脱落细胞的染色液及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]叶酸受体在正常细胞中较少表达或无表达，而在某些病变细胞表面高表达。叶酸受体介导的特殊染色法是近年迅速发展起来的一种新的较便捷的检测方法，该方法中，染色液的主要成分是叶酸衍生物、还原态亚甲基蓝等，由于叶酸受体介导，亚甲基蓝对肿瘤细胞及黑色素有高度的亲和性，其氧化还原性使亚甲基蓝在肿瘤组织的氧化还原态中表现不同的变色反应。其反应原理是：如果存在上皮组织脱落细胞表面的叶酸表达程度高，染色液中的叶酸就会通过细胞表面的叶酸受体，迅速进入细胞胞浆，同时还原型的亚甲基蓝也进入细胞胞浆内。叶酸被还原成四氢叶酸，参与到一碳单位的代谢过程中。而肿瘤细胞会处于强烈的氧化应激环境中，还原型的亚甲基蓝则被细胞内广泛存在的活性氧(ROS)氧化，变为蓝色的氧化型的亚甲基蓝。由于有许多生物分子的进入，使得细胞内的渗透压升高，致使氧化型的亚甲基蓝逸出细胞外，则可在染色液上显现出蓝色。染色出现蓝色就提示该样本细胞表面的叶酸受体表达增高，细胞内的活性氧压增大，铁蛋白含量高，预示着脱落细胞可能有异常病变，需要进一步检测。
[0003]基于该变色方法的原理，目前市面上出现了很多相关的特殊染色液。市面上出现的特殊染色液都是酸性溶液。在本领域中存在的普遍认知是在酸性条件下该染色液更容易与癌细胞表面的叶酸受体结合，从而可进入癌细胞；而在肿瘤细胞的氧化应激环境下，还原态的无色亚甲基蓝会转化为蓝色或蓝黑色的氧化态，由此实现对癌细胞的诊断。亚甲基蓝水溶液为碱性溶液，现有技术在配制染色液时加入酸性溶液，在酸性溶液中H
+
浓度高会发生酸碱中和反应，当染色液混合液呈酸性的同时若有空气存在，将导致染色液氧化速度加快，染色效果差，试剂保存时间短等缺点。因此，现有技术中的酸性染色液存在以下缺点：(1)在保存过程中染色液容易被氧化变色从而影响测试结果的准确性；(2)染色液不稳定，保存周期短，储存稳定性差；(3)染色液染色效果不理想，且染色结果不准确等。

技术实现思路

[0004]为了克服现有技术中的染色液中均添加酸性溶液所存在的问题，本专利技术的目的之一在于提供一种用于脱落细胞的染色液，本专利技术中的染色液为碱性，染色液中的亚甲基蓝(氧化态)和还原剂(还原糖和抗坏血酸等)在碱性条件下转化为亚甲基白(还原态)，该染色液不容易被氧化，染色效果好，试剂保存时间长，更稳定。
[0005]本专利技术的目的之二在于提供一种用于脱落细胞的染色液的制备方法。
[0006]本专利技术的目的之三在于提供一种肿瘤细胞检测试剂盒。
[0007]本专利技术的目的之四在于提供一种用于脱落细胞的染色液的使用方法。
[0008]本专利技术的目的之五在于提供一种用于脱落细胞的染色液在肿瘤细胞检测材料中
的应用。
[0009]为了实现上述目的，本专利技术所采取的技术方案是：
[0010]本专利技术的第一个方面在于提供一种用于脱落细胞的染色液，所述染色液包括以下重量份的组分：还原剂10～21份，叶酸0.03～0.05份，亚甲基蓝0.03～0.06份，溶剂1～3份，碱1.5～3份，水75～90份；所述染色液的pH为8～14。
[0011]优选地，所述还原剂的重量份数为10～20；进一步优选地，所述还原剂的重量份数为10～18；再进一步优选地，所述还原剂的重量份数为10～16。
[0012]优选地，所述叶酸的重量份数为0.03～0.045份。
[0013]优选地，所述溶剂的用量为1～2份。
[0014]优选地，所述水的用量为80～90份；进一步优选地，所述水的用量为80～88份。
[0015]优选地，所述染色液的pH为10～13；进一步优选地，所述染色液的pH为11.75～13。
[0016]优选地，所述碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化钡中的至少一种；进一步优选地，所述碱为氢氧化钠。
[0017]优选地，所述还原剂选自单糖、抗坏血酸中的至少一种；进一步优选地，所述还原剂包括单糖和抗坏血酸。
[0018]优选地，所述单糖和抗坏血酸的重量比为(50～75)：1。
[0019]优选地，所述单糖选自果糖、葡萄糖、半乳糖、核糖中的至少一种。
[0020]优选地，所述溶剂包括二甲基亚砜。本专利技术为碱性体系，亚甲基蓝在碱性条件下的溶解性很差，本专利技术选用二甲基亚砜作为溶剂，实现了亚甲基蓝在碱性条件下仍然具有较好的溶解度。
[0021]优选地，所述脱落细胞包括子宫颈脱落细胞、阴道脱落细胞、外阴脱落细胞。
[0022]本专利技术的第二个方面在于提供本专利技术第一个方面提供的用于脱落细胞的染色液的制备方法，包括以下步骤：
[0023]将还原剂、叶酸、溶剂和水混合，然后再与亚甲基蓝、碱混合，制得所述的染色液。
[0024]优选地，所述制备方法包括以下步骤：
[0025]S1：分别称取还原剂、叶酸、亚甲基蓝、溶剂；
[0026]S2：将还原剂和叶酸用部分水溶解混合后，加入溶剂，继续混合；
[0027]S3：向步骤S2的混合溶液中加入亚甲基蓝，然后混合；
[0028]S4：向步骤S3中加入碱搅拌混合均匀，加入剩余水并混合。
[0029]优选地，步骤S2中加入的部分水的量占水总量的80％以上；进一步优选地，步骤S2中加入的部分水的量占水总量的90％以上。
[0030]优选地，所述碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化钡中的至少一种；进一步优选地，所述碱为氢氧化钠。
[0031]本专利技术的第三个方面在于提供一种肿瘤细胞检测试剂盒，包括本专利技术第一个方面提供的用于脱落细胞的染色液。
[0032]本专利技术的第四个方面在于提供本专利技术第一个方面提供的用于脱落细胞的染色液的使用方法，使含有染色液的检测材料与脱落细胞混合，记录检测材料的变色时间和颜色。
[0033]本专利技术的第五个方面在于提供本专利技术第一个方面提供的用于脱落细胞的染色液在肿瘤细胞检测材料中的应用。
[0034]优选地，所述肿瘤细胞包括上皮组织肿瘤细胞。
[0035]本专利技术的有益效果是：本专利技术中的染色液为碱性溶液，具有不容易被氧化，染色效果好，试剂保存时间长、检测灵敏度和特异性高等优点，此外，本专利技术染色液中的亚甲基蓝溶解性好，解决了现有技术中的亚甲基蓝难溶的问题，可以广泛应用于脱落细胞的细胞学特殊染色，例如针对子宫颈、阴道、外阴等临床常规病变的粗筛检查。
[0036]此外，本专利技术首次使染色液呈碱性，达到了意想不到的效果，促进亚甲基蓝在碱性条件下与还原剂(还原糖、抗坏血酸等)作用生成亚甲基白，提高了染色液的稳定性，此外，在碱性条件下，染色液加快了叶酸与受体的结合，染色速率更快，染色效果更好，染色准确度也有了很大的提高。
[0037]本专利技术中的染色液的制备方法简单，易操作，反应条件温和，无需特殊的反应设备，适合于工业化本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于脱落细胞的染色液，其特征在于：所述染色液包括以下重量份的组分：还原剂10～21份，叶酸0.03～0.05份，亚甲基蓝0.03～0.06份，溶剂1～3份，碱1.5～3份，水75～90份；所述染色液的pH为8～14。2.根据权利要求1所述的用于脱落细胞的染色液，其特征在于：所述染色液的pH为10～13。3.根据权利要求1或2所述的用于脱落细胞的染色液，其特征在于：所述碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化钡中的至少一种。4.根据权利要求1所述的用于脱落细胞的染色液，其特征在于：所述还原剂选自单糖、抗坏血酸中的至少一种。5.根据权利要求4所述的用于脱落细胞的染色液，其特征在于：所述单糖选自果...

【专利技术属性】
技术研发人员：范文丽，谭芷晴，卢智俊，
申请(专利权)人：广州朗坤生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：