效应CD8+T细胞去分化为CD8+TCM的关键抑制剂及在重症病毒感染药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了在流感病毒FM1感染小鼠模型中使用趋化因子受体抑制剂可以通过促使小鼠体内的效应CD8

【技术实现步骤摘要】
效应CD8+T细胞去分化为CD8+TCM的关键抑制剂及在重症病毒感染药物中的应用


[0001]本专利技术属广谱趋化因子受体抑制剂vMIP
‑
II在防治流感病毒FM1感染小鼠模型进行的基础研究领域，更具体地说，本专利技术涉及广谱趋化因子受体抑制剂vMIP
‑
II调节小鼠体内CD8
+ T细胞的TCM亚组的水平防御流感病毒。

技术介绍

[0002]病毒巨噬细胞炎症蛋白
‑Ⅱ
(vMIP
‑Ⅱ
)是由卡波氏肉瘤疱疹病毒(KSHV)K4基因编码的一种广谱趋化因子受体抑制剂，与人CC类趋化因子巨噬细胞炎性蛋白Ⅰ在氨基酸序列上有较高的同源性。vMIP可以利用与其他趋化因子相似的结构骨架与其受体进行相互结合作用，vMIP
‑Ⅱ
被广泛公认为是一种广谱的趋化因子受体抑制剂，具有结合多种人趋化因子受体亚族的能力，已有研究证明vMIP
‑
II能够拮抗CCR1、CCR2、CCR3、CCR5、CCR8、CXCR4和CX3CR1等多种趋化因子受体，但对CXCR1和CXCR2没拮抗作用,对CCR7的作用暂无明确报道。
[0003]病毒感染后，CD8
+ T细胞会经历扩增、收缩和记忆形成三个阶段。通常使用表面分子KLRG1和CD127(Interleukin
‑
7receptor subunit alpha，IL
‑
7Rα)来表征CD8
+ T细胞的活化状态，并将活化后的CD8<br/>+ T细胞分为短活效应细胞(Short
‑
lived effector cells，SLECs，表征为KLRG1hiCD127low)和记忆前体效应细胞(Memory precursor effector cells，MPECs，表征为KLRG1lowCD127hi)两大类。SLECs能产生大量的细胞毒性分子和细胞因子，大部分在收缩阶段凋亡，而MPECs细胞在清除病原后进一步分化形成记忆细胞。记忆细胞进一步分化为不同的记忆细胞亚群，通常使用表面分子CD45RA、CD45RO、趋化因子受体CCR7和血管L
‑
选择素(CD62L)来表征不同的记忆亚群，具体分为长期记忆T细胞(Central memory T cells，TCM，表型为CD45RA
‑
CD45RO+CCR7+CD62L+)、效应记忆性T细胞(Effector memory T cells，TEM表型为CD45RA
‑
CD45RO+CCR7
‑
CD62L
‑
)和组织特异性T细胞(Tissue resident memory T cells，TRM，表型为CD103+CD69+CD62L
‑
CD27
‑
)。一般情况下TCM主要分布于外周组织免疫器官和淋巴结，当再次受抗原刺激时可迅速分裂增殖和分化。TEM细胞主要存在于非淋巴组织和器官，参与周身循环，可迁移至外周炎症组织发生速发性效应功能。
[0004]当持续抗原刺激下CD8
+ T呈耗竭态(Exhausted T cells,TEX)，表现为低水平IL
‑
2、TNF
‑
α、INF
‑
γ,细胞表面表达高水平的PD
‑
1、TAG3、CD244、CD160等抑制分子。有研究表明记忆CD8
+ T细胞是来自效应T细胞的子集，抑制幼稚相关基因的表达可以逆转效应CD8
+ T细胞分化为长寿记忆CD8
+ T细胞。
[0005]本实验室前期研究利用vMIP
‑
II能竞争性抑制HIV与靶细胞上共受体CCR5、CXCR4、CCR3等的结合，以阻止病毒进入靶细胞，研究其具有抗HIV感染的作用，体内实验表明SIV感染初期的食蟹猴体内部分TCRVβ亚家族的表达量有所变化，一些Vβ亚家族有特异性的增生，且增生的TCRVβ亚家族克隆性发生改变，提示其可能为针对病毒的特异性增生。vMIP
‑Ⅱ
对此种Vβ亚家族的表达的增生有促进的作用，说明其对免疫系统的应答有增强的作用，促使特异性应答的免疫细胞的增生。事实上，我们对重组vMIP
‑
II的猴SIV模型和在人AIDS治疗
的研究均显示了其具有显著增加病毒感染机体的记忆CD8
+ T细胞水平作用，对发病期的病毒感染血症具有重要作用。
[0006]本实验室前期研究发现在COVID
‑
19的治疗中vMIP
‑
II可以通过促使效应CD8
+ T细胞去分化为CD8
+ TCM的方式提高CD8
+ TCM比例从而发挥治疗效果。通过基因芯片分析，vMIP
‑
II发挥治疗效果可能是通过影响趋化因子受体、磷酸化通路、mTOR通路及甲基化酶Dnmt3a来实现的。并且趋化因子受体、G蛋白α为这一作用的关键作用靶点，为了进一步探索此靶点在动物模型上的效果，我们使用流感病毒FM1感染小鼠模型对趋化因子受体靶点进行验证。药物靶点的确认对开发针对于严重病毒感染的抗病毒药物具有重要意义。

技术实现思路

[0007]本专利技术通过对流感病毒FM1感染小鼠模型进行vMIP
‑
II干预治疗，通过细胞中的病毒载量、CD8
+ TCM比例和线粒体功能判断趋化因子受体对于流感病毒小鼠模型的CD8
+ T细胞亚群分化的作用。
附图说明
[0008]图1为实施例1磷酸化蛋白标准蛋白曲线。
[0009]图2为实施例1不同组小鼠效应CD8
+ T细胞中磷酸化蛋白浓度。
[0010]图3为实施例1不同组小鼠记忆CD8
+ T细胞和CD8
+ TCM的百分比，*p&lt;0.05，n＝3。
[0011]图4为实施例1不同组小鼠细胞中线粒体膜电位，**p&lt;0.01，n＝3。具体实施方式
[0012]以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。
[0013]实施例1：流感病毒FM1感染小鼠模型对关键药物靶点的反应
[0014]材料与方法
[0015]病毒和动物：实验小鼠购买自广东省医学实验动物中心，6
‑
8周龄，雌性。在实验前，小鼠饲养在SPF级动物实验室，饲养温度为20
±
1℃，湿度：50％
±
5％，光照度均为3000Lx和0Lx各12小时循环。IAV[FM1/1/47菌株(鼠肺适应株)]用于所有实验，FM1由中国中医科学院中药研究所提供，本实验室－80℃冰箱保存。
[0016]实验试剂:vMIP
‑
II注射用原液和冻干粉针剂，vMIP
‑
II抗原标准品(理化对照品)由暨南大学基因组药物研究所研制并通过本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可以诱导流感病毒FM1感染小鼠体内的效应CD8
+
T细胞去分化为CD8
+
TCM的广谱趋化因子抑制剂vMIP
‑
II，其特征在于，所述的广谱趋化因子抑制剂vMIP
‑
II包括可提高CD8
+
T细胞的TCM亚群的水平的vMIP
‑
II活性成分，还包括其可药用的盐和酯、选择性取代的类似物或者包含vMIP
‑
II的一种或多种化合物的组合，还包括vMIP
‑
II的衍生物，或者其衍生物在药学上可接受的介质或载体。2.权利要求1所述的一种可以诱导流感病毒FM1感染小鼠体内效应CD8
+
T细胞去分化为CD8
+
TCM的广谱趋化因子抑制剂vMIP
‑
II，其特征在于，其可以降...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙晗笑，利时雨，邓健善，刘姝婷，钟志颖，耿承旭，
申请(专利权)人：广州弘润生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：