抗病毒肽的组合物及其使用方法技术

提供了包括治疗有效量的抗病毒肽以及药学上可接受的载体的广谱抗病毒肽和组合物。抗病毒组合物显示出强大的广谱抗病毒效果，而不产生病毒抗性。抗病毒组合物可用于治疗由病毒感染引起的疾病，特别是呼吸系统病毒诸如包膜冠状病毒(SARS

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗病毒肽的组合物及其使用方法
[0001]本国际专利申请要求于2020年3月18日提交的美国临时专利申请号62/991,407的权益，出于所有目的其全部内容通过引用并入本文。
专利

[0002]本专利技术一般涉及广谱抗病毒肽和治疗抗病毒感染的方法。
[0003]专利技术背景
[0004]由于缺乏预先存在的免疫力，新型呼吸道病毒通常导致严重的呼吸道感染并迅速传播。近二十年来，三种高致病性冠状病毒已经跨越物种屏障并引起人类疾病，包括2003年与蝙蝠相关的严重急性呼吸系统综合征(SARS)冠状病毒(CoV)(SARS
‑
CoV)
1,2
、自2012年起的中东呼吸系统综合征冠状病毒(MERS
‑
CoV)
3,4
和最近的2019新型冠状病毒(SARS
‑
CoV
‑
2)5。此外，2009年大流行性流感A(H1N1)pdm09病毒导致了21世纪的第一次流感大流行
6,7
。由于缺乏有效的抗病毒药，尤其是针对冠状病毒，这些呼吸系统病毒与显著的发病率和死亡率有关。此外，这些新出现的呼吸系统病毒也引起了严重的经济和社会动荡。
[0005]COVID
‑
19的爆专利技术确地说明了广谱抗病毒药的重要性。目前，没有针对这种新型病毒的特异性药物治疗。有效的广谱抗病毒剂将改善患者的结果，并且甚至在鉴定新出现的病毒和特异性抗病毒药物之前可能减少社区和医院的传播。抗病毒药物的“一病一药”方法对于HIV、丙型肝炎病毒和流感病毒是成功的9。然而，在鉴定新型病毒或获得特异性抗病毒药物之前，迫切需要广谱抗病毒药来对抗新出现和重新出现的新病毒爆发，诸如SARS
‑
CoV
‑
2。
[0006]专利技术概述
[0007]本专利技术的一个目的是提供广谱抗病毒剂。
[0008]本专利技术的另一个目的是提供广谱抗病毒剂的组合物。
[0009]本专利技术的又一个目的是提供在有需要的受试者中治疗病毒感染的方法。
[0010]提供了抗病毒剂、含有抗病毒剂的组合物及其使用方法。抗病毒剂包括P9R(SEQ ID NO:2)或衍生自P9R的P9R样肽，其特征在于它们“抑制内体酸化”和“肽
‑
病毒结合”，诸如通过体外内体酸化和肽
‑
病毒结合测定法所确定的。在优选的实施方案中，抗病毒剂是P9R。抗病毒组合物包括治疗有效量的抗病毒剂。
[0011]可以向有需要的受试者施用抗病毒组合物以治疗与病毒感染相关的症状。优选地，该受试者感染呼吸系统病毒，更优选地，该受试者感染需要内体酸化来进行病毒
‑
宿主膜融合的pH依赖性病毒。实例包括但不限于包膜冠状病毒(SARS
‑
CoV
‑
2、SARS
‑
CoV和MERS
‑
CoV)、大流行性A(H1N1)pdm09病毒、禽流感A(H7N9)病毒和无包膜鼻病毒。
[0012]附图简述
[0013]图1A显示了肽序列(P9(SEQ ID NO:1)；P9R(SEQ ID NO:2)；PA1(SEQ ID NO:3)；和P9RS(SEQ ID NO:4))和通过InnovaGen的PepCalc分析的正电荷。图1B
‑
1H显示了P9R抑制2019新型冠状病毒(SARS
‑
CoV
‑
2)、MERS
‑
CoV、SARS
‑
CoV、H1N1病毒、H7N9病毒、鼻病毒和3型副流感病毒在细胞中的病毒复制。将病毒与不同浓度的P9R或P9预混合然后感染细胞。通过
噬斑减少测定法评估抗病毒效率。通过将肽处理的病毒的噬斑数除以BSA处理的病毒的噬斑数计算感染(％)。图1I通过用P9R或BSA(50
‑
100μg mL
‑1)处理病毒时测量感染后24h上清液中的病毒RNA拷贝来显示P9R对病毒的有力抗病毒活性。图1J显示了P9R在MDCK、Vero E6和A549细胞中的细胞毒性。当P9R的IC
50
与P9的IC
50
比较时，*表示P<0.05，并且**表示P<0.01。通过双尾学生t检验计算P值。数据展示为至少三个独立实验的平均值
±
SD。
[0014]图2A显示了在通过肽处理的MDCK细胞中内体酸化的红色荧光的定量。从10个随机的显微镜场计算红色荧光强度。图2B显示了通过噬斑减少测定法测量25μg mL
‑1的P9R、P9RS和PA1对SARS
‑
CoV
‑
2和A(H1N1)pdm09病毒的抗病毒活性。肽处理的病毒的噬斑数(％)归一化至BSA处理的病毒。图2C显示了P9R和PA1与SARS
‑
CoV
‑
2和A(H1N1)pdm09病毒的结合。通过ELISA和RT
‑
qPCR检测病毒结合肽。当与P9R比较时**表示P<0.01。通过双尾学生t检验计算P值。
[0015]图3A显示了PA1可以减少P9R与SARS
‑
CoV
‑
2和A(H1N1)pdm09的结合。用PA1或BSA预处理病毒，随后通过RT
‑
qPCR测量处理的病毒与指定的肽的结合。当与用BSA处理的病毒比较时**表示P<0.01。(c)P9R可以抑制病毒的RNP释放进入细胞核。用BSA、P9R或巴弗洛霉素A1(BA1)预处理H1N1病毒，随后用处理的病毒感染MDCK细胞。在感染后3.5h拍摄病毒NP(绿色)和细胞核(蓝色)的图像。图3B
‑
3D包括显示P9R能够广泛与MERS
‑
CoV、H7N9病毒和鼻病毒结合的数据。将与肽结合的病毒的相对RNA拷贝归一化至与P9R结合的病毒。当与P9R比较时*表示P<0.05，**表示P<0.01。通过双尾学生t检验计算P值。图3E显示了与病毒和病毒蛋白结合的肽。对于与SARS
‑
CoV结合的肽(左侧小图)。将SARS
‑
CoV与指定的肽在ELISA板上温育1小时。洗去未结合的病毒并通过RT
‑
qPCR定量结合的SRAR
‑
CoV。将相对RNA拷贝(％)归一化至与P9R结合的病毒的RNA拷贝。与H1N1 HA1蛋白结合的肽(中间小图)。与MERS
‑
CoV S蛋白结合的肽(左侧小图)。在ELISA板上包被肽。通过ELISA测定法测量与肽结合的H1N1HA和MERS
‑
CoV S蛋白。当与P9R比较时*表示P<0.05，**表示P<0.01。通过双尾学生t检验计算P值。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.抗病毒剂，其包含P9R(SEQ ID NO:2)或衍生自P9R的P9R样肽。2.权利要求1所述的抗病毒剂，其中所述P9R样肽的特征在于所述P9R样肽抑制内体酸化并保持病毒结合，如通过体外内体酸化，任选地与对照相比，以及肽
‑
病毒结合测定法所确定的。3.权利要求1或2所述的抗病毒剂，其由P9R(SEQ ID NO:2)组成。4.权利要求1
‑
3中任一项所述的抗病毒剂，其中所述抗病毒剂具有至少5的净正电荷。5.权利要求1
‑
4中任一项所述的抗病毒剂，其中所述抗病毒剂具有约5.6的净正电荷。6.权利要求1
‑
5中任一项所述的抗病毒剂，其中所述抗病毒剂具有5.6的净正电荷。7.组合物，其包含治疗有效量的权利要求1
‑
6中任一项所述的抗病毒剂和药学上可接受的载体。8.权利要求7所述的组合物，其中所述抗病毒剂在受试者中抑制抗病毒复制。9.权利要求7或8所述的组合物，其中所述组合物是单位剂型。10.权利要求9所述的组合物，其中所述单位剂型选自片剂或胶囊。11.权利要求7所述的组合物，其呈适合于鼻内或肺部递送的形式。12.权利要求9所述的组合物，其中所述单位剂型是可注射的...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵旵军，杜启泓，袁国勇，
申请(专利权)人：香港大学，
类型：发明
国别省市：